Белая лада х рей: Белая Лада Х Рей — обзор, фото, видео

11.12.1970 alexxlab 0 Comments

Содержание

ГОТОВЫЕ АВТОЭМАЛИ LADA

Код краски	Образец цвета	Название краски	Цвет	В продаже
102		Абрикос	Серебристо-светло оранжевый	Купить
602		Авантюрин	Серебристо-чёрный	Купить
204		Айсберг	Белая двухслойная	Купить
243		Акапулько	Ярко-жёлтый	Купить
460		Аквамарин	Серебристый сине-зелёный	Купить
503		Аккорд	Серебристо-коричневый	Купить
309		Аллигатор	Оливково-зелёный	Купить
1018		Алмазное серебро	(ИЖ) Серебристый	Купить
205		Альпийский снег	Белый металлик	Купить
660		Альтаир	Серебристый светло-серый	Купить
355		Амазонка	Ярко-зелёный	Купить
145		Аметист	Серебристый фиолетовый	Купить
371		Амулет	Серебристо-тёмно-зелёный	Купить
425		Андриатика	Голубой	Купить
125		Антарес	Тёмно-вишнёвый	Купить
277		Антилопа	Серебристо-бежевый	Купить
286		Апатия	Серебристый оранжевый	Купить
305		Аспарагус	Серебристо-зелёный	Купить
490		Астероид	Тёмно-сине-зелёный	Купить
440		Атлантика	Светло-синий	Купить
1158		Аустер	(GM) Светло-серый	Купить
421		Афалина	Серебристо-зелёно-голубой	Купить
218		Аэлита	Бежевый	Купить
645		Базальт	Серо-чёрный	Купить
107		Баклажан	Тёмно-фиолетовый	Купить
420		Балтика	Тёмно-сине-зелёный	Купить
353		Бальзам	Зелёный	Купить
273		Бархан	Бежевый	Купить
235		Бежевый	Бежевый	Купить
240		Белое облако	Белый	Купить
201		Белый	Белый	Купить
302		Бергамот	Серебристо-зелёный	Купить
633		Борнео	Серебристо-тёмно серый	Купить
451		Боровница	Серебристо-серо-синий	Купить
480		Бриз	Зелёно-голубой	Купить
262		Бронзовый век	Бежево-коричневый	Купить
117		Бургундия	Красный металлик	Купить
388		Вавилон	Металлик серо-бежевый	Купить
464		Валентина	Серо-фиолетовый	Купить
310		Валюта	Серо-зелёный	Купить
191		Венера	Тёмно-красный	Купить
655		Викинг	Тёмно-серый	Купить
129		Виктория	Серебристый ярко-красный	Купить
132		Вишнёвый сад	Тёмно-серебристо-красный	Купить
127		Вишня	Тёмно-бордовый	Купить
313		Водолей	Серо-зелёный	Купить
488		Галактика	Тёмно-фиолетовый	Купить
423		Гейзер	Серо-голубой	Купить
481		Голубой	Голубой	Купить
180		Гранат	Тёмно-бордовый	Купить
682		Гранта	Серо-синий	Купить
150		Дефиле	Серебристо-серо-коричневый	Купить
285		Джем	Оранжево-коричневый	Купить
424		Дипломат	Синий	Купить
502		Дыня	Серебристо-жёлтый	Купить
321		Дюшес	Серебристо-молочно-зелёный	Купить
203		Жасмин	Бело-жёлтый	Купить
200		Жёлтый-такси	Ярко-жёлтый	Купить
230		Жемчуг	Серебристо-бело-молочный	Купить
627		Жимолость	Серо-синий	Купить
307		Защитный	Зелёный	Купить
257		Звёздная Пыль	Бежево-сиреневый	Купить
307		Зелёный сад	Тёмно-зелёный	Купить
963		Зелёный	Зелёный	Купить
1012		Зелёный Авокадо	(ИЖ) Тёмно-зелёный	Купить
1901		Золотая звезда	(GM) Бежево-золотистый	Купить
331		Золотой лист	Золотистый тёмно-зелёный	Купить
245		Золотая Нива	Серебристо-жёлто-зелёный	Купить
109		Золотисто-бежевый	(ИЖ) Золотисто-бежевый	Купить
347		Золото Инков	Золотистый тёмно-зелёный	Купить
311		Игуана	Серебристо-ярко-зелёный	Купить
515		Изабелла	Тёмно-филетовый	Купить
385		Изумруд	Серебристо-зелёный	Купить
441		Индиго	Тёмно-синий	Купить
406		Ирис	Фиолетовый	Купить
128		Искра	Красный	Купить
113		Каберне	Тёмно-вишнёвый	Купить
358		Кайман	Тёмно-зелёный	Купить
104		Калина	Ярко-красный	Купить
190		Калифорнийский Мак	Золотисто-красный	Купить
453		Капри	Тёмно-сине-зелёный	Купить
212		Капучино	Светлый серо-бежевый	Купить
101		Кардинал	Ярко-красный	Купить
118		Кармен	Красный	Купить
630		Кварц	Тёмно-серый	Купить
352		Кедр	Серо-зелёный	Купить
381		Кентавр	Тёмно-зелёный	Купить
322		Колумбийская зелень	Золотисто-оливковый	Купить
116		Коралл	Серебристый тёмно-красный	Купить
790		Кориандр	Золотисто-коричневый	Купить
798		Корица	Коричневый	Купить
370		Корсика	Серебристый болотно-зелёный	Купить
665		Космос	Чёрный	Купить
1017		Красный перец	(ИЖ) Серебристо-вишнёвый	Купить
1013		Красный Порту	(ИЖ) Вишнёвый	Купить
281		Кристалл	Светло-серый	Купить
171		Кубок	Красный	Купить
435		Ла-манш	Серебристо-фиолетовый	Купить
675		Лаванда	Серебристо-коричневый	Купить
487		Лагуна	Серебристо-синий	Купить
411		Ладога	Серебристо-голубой	Купить
445		Лазурит	Фиолетово-синий	Купить
498		Лазурно-синий	Серебристый тёмно-синий	Купить
489		Лазурь	Синий	Купить
560		Ламинария	Зелёный	Купить
221		Ледниковый	Белый	Купить
413		Ледяной	Голубой	Купить
495		Лунный Свет	Светло-голубой	Купить
410		Магеллан	Тёмно-синий	Купить
133		Магия	Серебристо-ярко-фиолетовый	Купить
119		Магма	Оранжевый	Купить
120		Майя	Серебристый тёмно-бордовый	Купить
121		Мальборо	Красный металлик	Купить
428		Медео	Голубой	Купить
234		Медовый	Желто-золотой	Купить

Новая Lada в Белой Церкви. Цены и характеристики новых моделей Lada

Автомобили марки «Лада» известны каждому автомобилисту. Когда-то «Жигули» были монополистом рынка. С 1966 г. по 2016 г. «АвтоВАЗ» был российским автоконцерном, но впоследствии компания была выкуплена французским производителем Renault Group. Смена руководства и обновление технологий должны были в корне поменять стратегию производства. И этого удалось добиться.

На сегодняшний день автомобили концерна «АвтоВАЗ» являются неплохим вариантом, сочетающим в себе доступную стоимость и хорошее качество. Компания «Сфера-Авто» предлагает купить «Лада» в Белой Церкви с гарантией от производителя. Просмотреть каждую модель можно в нашем автосалоне, построенном с учетом всех корпоративных стандартов мировых производителей авто.

Какую Lada выбрать?

Выбирая новый автомобиль «Лада» в Белой Церкви, в первую очередь нужно определить для себя три момента:

бюджет, на который вы рассчитываете;
возможности, которые вы ожидаете от авто;
условия, в которых будет использоваться машина.

Одной из самых бюджетных моделей является Lada Granta в кузове седан. Переднеприводное авто, построенное на основе версии Kalina, выпускается концерном с 2011 года. Эта модель смогла вытеснить своих предшественников с рынка за счет габаритов С-класса. Бренду удалось добиться полной гармонии между стоимостью и привлекательным экстерьером.

Автосалон «Лада» в Белой Церкви предлагает лучший кроссовер в своем ценовом сегменте — XRAY. Данная модель является аналогом Renault Sandero. XRAY может составить конкуренцию другим версиям «Лады» в плане качества сборки.

Для этой модели характерны следующие достоинства:

высокий клиренс, обеспечивающий комфортное управление при движении по бездорожью;
устойчивая и прочная подвеска;
мощный мотор, способствующий качественной динамичности;
объемный багажник;
отличная шумоизоляция;
современная многофункциональная мультимедийная система.

Официальный дилер «Лада» в Белой Церкви также предлагает одну из лучших версий российской марки авто — Vesta. В нашем салоне эта модель представлена в трех вариациях — SW, SW Cross и Sedan. Первая — в кузове универсал, сочетающая в себе интересный дизайн и вместительность. Vesta SW отлично подойдет для всей семьи. В салоне предусмотрено множество ящиков для хранения, а интерьер данной модели продуман до мелочей.

SW Cross представляет собой более спортивную модель, характеризующуюся контрастным дизайном и отличной проходимостью. Благодаря высокому клиренсу эта машина справится с любыми препятствиями, в том числе с заснеженным сугробам и рыхлой почвой. Благодаря вместительному и просторному салону внутри можно чувствовать себя комфортно. Продуманная эргономика позволит получить настоящее удовольствие от езды.

Еще одна модель, которую можно приобрести в салоне «Сфера-Авто» — Largus, впервые появилась в продаже в 2012 году. Разработка технологической начинки осуществлялась под руководством инженеров компании Renault-Nissan. Данная модель оснащается мощным мотором, обеспечивающим высокую проходимость. Благодаря этому Lada Largus может использоваться в качестве семейного авто. Вместительный и продуманный до мелочей салон сделает поездку максимально комфортной.

Еще одной моделью, по характеристикам не уступающей импортным внедорожникам, является «Лада» 4х4. Автолюбители по достоинству оценят качество сборки этой машины, а также ее ходовые характеристики. Данная версия отлично подойдет для ежедневных поездок на работу. Для езды по проселочным местностям, выезда на охоту или рыбалку лучшей модели не найти.

Последняя версия была выпущена с доработанным внешним дизайном. Также производитель поработал над улучшением обивки в салоне, хотя в целом интерьер остается классическим. Lada 4×4 является лучшим вариантом для дорог Украины.

Преимущества машин от «АвтоВАЗ»

Краткая информация об особенностях российских авто:

Соотношение стоимости и качества. Если вы планируете купить «Ладу» у дилера в Белой Церкви, то наверняка понимаете, что в обслуживании такое авто будет значительно дешевле, чем иномарка. Цены на модели, представленные в салоне «Сфера-Авто», стартуют от 219 тысяч грн. Если учесть, что это стоимость новой машины, на которую распространяется гарантия от производителя, — лучшего варианта не найти.
Достойное качество сборки. При выпуске автомобилей производитель использует технологичное оборудование. Сборка машины осуществляется с учетом международных требований.
Надежность. При производстве автомобилей строго учитываются стандарты качества. Именно поэтому покупателю гарантируется надежность эксплуатации. Если своевременно выполнять техобслуживание и менять все «расходники», проблемы с эксплуатацией авто и преждевременные неисправности не возникнут.
Большой выбор. В салоне «Сфера-Авто» представлен большой выбор транспортных средств в разных комплектациях. Обращаясь к нам, вы сможете подобрать оптимальный вариант с учетом бюджета и требований.

Компания «Сфера-Авто» предлагает не только покупку новых машин, но и квалифицированное сервисное обслуживание любых марок и моделей авто. У нас работает квалифицированный персонал, использующий проверенное и технологичное оборудование, позволяющее добиться отличных результатов при ТО и ремонте.

Преимущества работы с нами

В нашем просторном шоуруме представлен полный модельный ряд автомобилей «Лада». Предварительно с фото и ценами, а также с другими предложениями можно ознакомиться на сайте. Если возникли вопросы — наш представитель даст полную и подробную консультацию. Помимо Lada, наш автосалон занимается продажей KIA, Chevrolet, Chery и ZAZ.

Корпорация «УкрАВТО» заботится о клиентах и предлагает выгодные условия сотрудничества. При необходимости вы всегда можете оформить кредит на покупку авто. Мы сотрудничаем с 16 банками, поэтому поможем выбрать оптимальный вариант кредитования в соответствии с возможностями клиента. Мы всегда идем навстречу покупателям, поэтому наши квалифицированные менеджеры найдут подход к решению всех ваших вопросов, связанных с покупкой авто.

Чехлы на Лада Х Рей Кросс, экокожа, ПОЧИН

Чехлы на сидения Лада Х Рей Кросс экокожа

Артикул: DS-171037

Производитель: Почин

Авточехлы предотвращают порчу штатной обивки сидений, защищают их от загрязнений, ведь за годы эксплуатации сидения могут очень сильно испачкаться, либо протереться и порваться.

Данные чехлы производятся из триплированной экокожи (прослойка поролона с обратной стороны), что обеспечивает чёткую посадку и соответствие изгибам штатных кресел. Важные характеристики материала: устойчив как к жаре, так и к холоду; легко чистится влажной салфеткой; износостойкий.

Изготовлены специально под лекала сидений X-Ray Cross, поэтому чехлы будут выглядеть как перетянутые сидения автомобиля.

Текстура материла комбинированная экокожа — перфорированная в центре и гладкая по контуру, очень приятная на ощупь.

В комплект входит 13 предметов, в том числе резинки и крючки для крепления:

подголовники — 5 шт
сиденья переднего ряда — 2 шт
спинки переднего ряда — 2 шт
сиденье заднего ряда — 1 шт
спинка заднего ряда 1/3 за пассажиром — 1 шт
спинка заднего ряда 2/3 за водителем — 1 шт
чехол на передний подлокотник — 1 шт

Присутствуют технологические отверстия для ремней безопасности, а на спинках передних сидений есть карманы.

В ассортименте очень большой выбор цветовой гаммы, который порадует любого искушенного покупателя:

арт. 171037112 — модель «Почин» черно-бежевая
арт. 171037108 — модель «Почин» черно-белая
арт. 171037120 — модель «Почин» черно-коричневая
арт. 171037110 — модель «Почин» черно-красная
арт. 171037118 — модель «Почин» черно-оранжевая
арт. 171037102 — модель «Почин» черно-серая
арт. 171037103 — модель «Почин» черно-синяя
арт. 171037100 — модель «Почин» черная
арт. 171037104 — модель «Почин» серая
арт. 171037109 — модель «Почин» белая
арт. 171037116 — модель «Почин» коричневая
арт. 171037111 — модель «Почин» бежевая

Упакованы в индивидуальную прочную сумку. Купить можно в нашем интернет-магазине.

В Краснодаре объявили в розыск предполагаемого участника перестрелки на белой Lada Priora

Появилась ориентировка на предполагаемых участников перестрелки, произошедшей 20 августа на улице Ставропольской в Краснодаре

UPD: Белая Lada Priora также попала на записи с камер видеонаблюдения. Нескольких участников конфликта уже задержали, позже появилась предположительная причина случившегося.

Что произошло? В Краснодаре в ночь на 21 августа напротив торгового центра Royal city mall недалеко от Вишняковского сквера случился конфликт между группой мужчин, произошла перестрелка. В результате погиб 27-летний уроженец Дагестана Ильяс Ванатов. Остальные участники скрылись с места происшествия.

Что говорят в полиции? В пресс-службе ГУ МВД России по Краснодарскому краю порталу Юга.ру рассказали, что зарегистрировали сообщение о конфликте на улице Ставропольской. По факту происшествия проводят проверку, выясняют обстоятельства случившегося. В следственном комитете рассказали, что один из участников конфликта начал хаотично стрелять. По версии ведомства, он сделал это из хулиганских побуждений. Уголовное дело завели по факту хулиганства, совершенного группой лиц (ч. 2 ст. 213 УК РФ), и убийства (ч. 1 ст. 105 УК РФ).

Предполагаемая машина разыскиваемых

Стрелявших нашли? Пока неизвестно. Утром 21 августа в социальных сетях появилась ориентировка на предполагаемых участников конфликта. Одним из них стал 28-летний уроженец Чечни Руслан Турашов. Он может передвигаться на белом автомобиле Lada Priora с госномером В 990 ТК 95. Вместе с ним в машине могут находиться 25-летний Мурад Турашов и другие неустановленные лица. Они могут быть вооружены.

Тех, кому что-либо известно о местонахождении предполагаемых участников перестрелки, просят сообщить по телефону 8 (861) 255-79-66.

В пресс-службе СУ СК РФ по Краснодарскому краю порталу Юга.ру рассказали, что не могут предоставить никакой информации по поводу розыска стрелков. В пресс-службе ГУ МВД России по Краснодарскому краю также отказались от комментариев, сославшись на то, что дело находится у следственного комитета.

Лада гранта седан белая фото

Лада Гранта — народный автомобиль, который изначально создавался как бюджетный, именно поэтому он получился дешевым, но при этом весьма неплохим автомобилем. Достаточно низкая цена и хорошее качество сделали Granta «новой классикой» на многие годы вперед, а ведь именно этого и хотели добиться инженеры компании АвтоВАЗ.

Новые Лады Гранты 2018 модельного года официально представлены широкой публике в рамках московского автосалона. Российский производитель отказался от бренда “Kalina” переименовав хэтчбек и универсал в Granta. То есть теперь под одним названием будет продаваться вся линейка родственных по конструкции моделей “Автоваза”. Если технически модели и так имели общую платформу, двигатели, подвеску, трансмиссию и ходовую часть, то теперь их унифицировали еще и внешне.

Экстерьер всех 5 типов нового кузова Гранта 2021 модельного года получил свой Х-стиль, которым до этого могли похвастать только Lada Vesta и XRay. Получилось довольно неплохо. Машина стала выглядеть более современной и продвинутой. Больше всех изменений получил седан. Именно седан Гранта является самым продаваемым, поэтому для него сделали максимум возможных изменений. Появились новые бампера, фары головного света, решетка радиатора и хромированные “бумеранги” призванные подчеркнуть новый стиль Лада.

Сбоку существенных изменений, те же двери от Калины еще первого поколения. А вот сзади провели довольно серьезную работу по изменению дизайна. Появились новые бампера, с которых исчезла ниша номерного знака. Крышка багажника получила сложную форму. Сверху специальная выштамповка напоминающая спойлер. Появилась ниша под номерной знак и новые линии изгиба. В общем крышку багажника теперь можно назвать “мечтой” жестянщика, поскольку править такие сложные формы после ДТП будет довольно сложно. Фотографии Lada Granta sedan прилагаются.

Фото новой Лада Гранта лифтбек

Теперь Lada Granta 2021 модельного года может похвастать еще и универсалом. Без такого типа кузова модельный ряд нельзя назвать полноценным. Тем более в нашей стране, где практичных дачников миллионы. В экстерьере от универсального кузова Калины новая только передняя часть. При этом капот и крылья имеют ту же форму, так что проблем с запасными частями по жестянки не будет. Если есть универсал, то должен быть и внедорожный вариант. Так и есть уже в ближайшее время россияне могут порадовать себя модификацией Lada Granta Cross. Внедорожный универсал появится у дилеров чуть позже остальных моделей. Фотографии Granta SW Cross прилагаются.

Фото Лады Гранты

Лада Гранта — отечественный автомобиль линейки LADA от производителя АвтоВАЗ. Внутризаводское обозначение авто — ВАЗ-2190. Мощность от 82 до 106 л.с., объём двигателя 1,6 л. Трансмиссия представлена в трёх видах: механическая, автоматическая и роботизированная.

Гранта исполняется в четырёх конфигурациях: седан, лифтбек, хэтчбэк и универсал. Все они вмещают 5 человек.

Золото-платиновая Лада Гранта в салоне продаж

Лада Гранта 2018 в фотосессии на трассе у моря

Лада Гранта Лифтбек с открытыми дверьми на вечерней набережной

Седан Лада Гранта 2021 года на фоне огней офисного class=»aligncenter» width=»1280″ height=»720″[/img] Под капотом Лады Гранта

Белая Лада Гранта в динамичном ракурсе

Новый бестселлер АвтоВаза Лада Гранта в фотосессии на пленере

Оранжевая Лада Гранта мчится по горной дороге

Зимний тест-драйв Лады Гранта

Лада Гранта Лифтбек на городской набережной

Промоутер у Лады Гранта на стенде автосалона

Чёрная Лада Гранта на зимней парковке

Красная и синяя Лады Гранта в автосалоне

Лада Гранта Лифтбек на фоне заката над мегаполисом

Лада Гранта мчится по городской трассе в лучах заходящего солнца

Динамичный ракурс Лады Гранта Спорт в рекламной фотосессии

Серебристая Лада Гранта Спорт на повороте загородной трассы

Серая Лада Гранта Лифтбек

Лада Гранта Спорт мчится по осенней трассе

Белая Лада Гранта Сэд Сити у фасада здания

Седан Лада Гранта на осенней улице

Серый седан Лада Гранта 2021 года на улице города

Белая Лада Гранта мчится по улице города

Женщина за рулём выставочной Лады Гранта на презентации в автосалоне продаж

Лада Гранта Спорт цвета индиго

Динамичный ракурс серебристой Лады Гранта Лифтбек в студийной фотосессии

Красная Лада Гранта мчится по ночной улице

Белая Лада Гранта мчится по трассе на фоне зимнего леса

Лада Гранта Лифтбек выезжает из здания парковки

Белая Лада Гранта на фоне поля с подсолнухами

Оранжевая Лада Гранта универсал в профиль на горной дороге

Серая Лада Гранта 2021 года на стенде автосалона

Кирпично-оранжевая Лада Гранта в салоне продаж

Чёрная Лада Гранта Спорт в фотостудии а-ля лофт

Гоночная красная Лада Гранта в динамичном ракурсе

Рекламная фотосессия новой Лады Гранта Седан на фоне вечерних витрин мегаполиса

Бордовая Лада Гранта Лифтбек на фоне терракотового фасада здания

Интерьер Лады Гранта Спорт

Под капотом спортивной Лады Гранта

Чёрный салон седана Лада Гранта

LADA Granta презентована в 2011 году как «народный автомобиль»: обладатель демократичной цены, стильный снаружи, просторный и комфортный внутри. В 2021 г. начали производить усовершенствованную LADA Granta 2.

Поделитесь в соцсетях:

Транспорт

авто • автоваз • гранта • лада • транспорт

Почему так случилось?

Возможно, автоматические запросы принадлежат не вам, а другому пользователю, выходящему в сеть с одного с вами IP-адреса. Вам необходимо один раз ввести символы в форму, после чего мы запомним вас и сможем отличать от других пользователей, выходящих с данного IP. В этом случае страница с капчей не будет беспокоить вас довольно долго.

Возможно, в вашем браузере установлены дополнения, которые могут задавать автоматические запросы к поиску. В этом случае рекомендуем вам отключить их.

Также возможно, что ваш компьютер заражен вирусной программой, использующей его для сбора информации. Может быть, вам стоит проверить систему на наличие вирусов.

Если у вас возникли проблемы или вы хотите нашей службе поддержки, пожалуйста, воспользуйтесь формой обратной связи.

Цвета новой Лада Гранта (2018-2019)

Ниже представлены все цвета Лада Гранта. Для наглядности, мы размещаем «живые» фотографии автомобилей, чтобы вы могли наиболее точно оценить цвет именно таким, каким он будет в действительности, а не после многочисленных компьютерных обработок. Если у вас есть более удачные фотографии того или иного цвета, то мы с радостью разместим ваши материалы на нашем сайте.

Белый “Белое облако” (240)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta/515701465948357718/ Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta_liftback/528155909034082496/

Черный “Пантера” (672)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta/533232079341617812/

Красный “Сердолик” (195)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta/536387402835428232/

Ярко-синий “Голубая планета” (418)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta_liftback/512364723035963531/ Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta/460933967135113846/

Серебристый “Рислинг” (610)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta/524374413668254770/

Серебристо-серый “Техно” (618)

Серебристо-темно-серый “Борнео” (633)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta_combi/537887961329435455/

Золотисто-коричневый “Кориандр” (790)

Фото: https://www.drive2.ru/r/lada/granta_combi/522785894244024338/

Обычно используемые флуорофоры FRET способствуют коллапсу неупорядоченного белка

Значение

Белки принимают неупорядоченные ансамбли до сворачивания, а иногда и как часть своей функции. Моделирование и исследования FRET часто описывают неупорядоченные конформации как более компактные, чем состояния случайных клубков, наблюдаемые при высоком денатуранте, тогда как малоугловое рассеяние рентгеновских лучей (SAXS) указывает, что эти конформации остаются расширенными. Устранение этого несоответствия улучшает наше понимание свойств белков, например, является ли вода достаточно плохим растворителем, чтобы вызвать неспецифический коллапс.Мы достигаем согласования, показывая, что добавление флуорофоров FRET уменьшает размеры неупорядоченного белка. Детальный анализ FRET и SAXS, наряду с учетом сокращения, индуцированного флуорофором, демонстрирует, что неупорядоченные и развернутые белки часто остаются сольватированными и расширенными без денатуранта, свойства, которые минимизируют неправильную укладку и агрегацию.

Abstract

Размеры, которые развернутые белки, включая внутренне неупорядоченные белки (IDP), принимают в отсутствие денатуранта, остаются спорными.Мы разработали процедуру анализа профилей малоуглового рассеяния рентгеновских лучей (SAXS) и использовали ее, чтобы продемонстрировать, что даже относительно гидрофобные IDP остаются почти такими же расширенными в воде, как и при высоких концентрациях денатуранта. Напротив, как показано здесь, большинство измерений резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) показали, что относительно гидрофобные IDP значительно сокращаются в отсутствие денатуранта. Мы используем два независимых подхода для дальнейшего изучения этого противоречия.Во-первых, с помощью SAXS мы показываем, что флуорофоры, используемые в FRET, могут вносить вклад в наблюдаемое несоответствие. В частности, мы обнаружили, что добавление Alexa-488 к нормально расширенному IDP вызывает сокращение еще на 15%, что вполне соответствует сокращению, о котором сообщалось в исследованиях на основе FRET. Во-вторых, используя нашу процедуру моделирования и анализа для точного извлечения радиуса инерции (R _g) и расстояния от конца до конца (R _ee) из профилей SAXS, мы проверили недавнее предположение, что результаты FRET и SAXS могут быть согласованным, если R _g и R _ee «не связаны» (т.е., больше не просто пропорциональны), в отличие от случая гомополимеров случайного блуждания. Однако мы обнаружили, что даже для развернутых белков эти две меры измерений развернутого состояния остаются пропорциональными. Вместе эти результаты предполагают, что улучшенные процедуры анализа и коррекция значительных взаимодействий, управляемых флуорофором, достаточны для согласования предыдущих исследований SAXS и FRET, обеспечивая тем самым единую картину природы развернутых полипептидных цепей в отсутствие денатурирующего агента.

Белковые нарушения являются важным компонентом разнообразных клеточных процессов (1-4). В отличие от хорошо свернутых белков, которые населяют четко определенное функциональное состояние, развернутые и внутренне неупорядоченные белки (IDP) образуют широкий набор быстро взаимопревращающихся конформаций (3⇓⇓⇓⇓ – 8) с ошибками, которые плохо изучены и трудно измерить. . Особый интерес представляет степень, в которой ВПЛ заключают контракты в физиологических условиях (т. Е. При отсутствии денатурирующих агентов). Такое сокращение может иметь широкое значение для нашего понимания сворачивания белков, взаимодействий и стабильности, а также действия денатурирующих средств.Более того, понимание степени сжатия неупорядоченных ансамблей имеет большое значение для разработки реалистичных симуляций складчатости и интерпретации измерений малоуглового рассеяния рентгеновских лучей (SAXS) и FRET (9, 10).

Наше понимание физико-химических принципов, лежащих в основе того, будет ли полипептидная цепь складываться, принимать неупорядоченный, но, тем не менее, относительно компактный ансамбль или вести себя как расширенное, полностью сольватированное, самоизбегающее случайное блуждание (SARW), недостаточно для объяснения существующих данных.Большая часть этого понимания получена из исследований белков, разворачиваемых высокими концентрациями денатурирующих веществ, таких как мочевина и гидрохлорид гуанидина (Gdn). В этих условиях консенсус состоит в том, что белки ведут себя как SARW с показателем Флори (ν) 0,60 в соотношении R _г N ^ν (N = длина цепи). Напротив, нет единого мнения относительно поведения ВПЛ при более низком уровне денатуранта или его отсутствии. В частности, в то время как многочисленные FRET (11⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓ – 25) и вычислительные исследования (11, 14, 18, 23, 26⇓⇓ – 29) утверждали, что расширенный неупорядоченный ансамбль обнаруживает при высоком уровне денатуранта сжимается значительно [обычно на 25–50% при переходе на низкий денатурант или без него (ν <0.5)] (11, 14, 18, 23, 26⇓ – 28, 30⇓⇓⇓⇓ – 35), аналогичное количество исследований SAXS сообщает о небольшом сокращении или его отсутствии в тех же условиях (10, 36–35). 41).

Разнообразные недавние исследования пытались примирить это несоответствие (Fig. 1 A ), которое имеет глубокие последствия для физики сворачивания белков. Применение более реалистичных симуляций и аналитических моделей привело к тому, что расстояния, полученные с помощью FRET, имеют меньшую денатурантную зависимость (Рис. 1 A , Bottom ) (40, 42⇓ – 44).Параллельно улучшены данные и анализ SAXS, в том числе использование безразмерного графика Кратки, чтобы подчеркнуть изменения ν, а не R _г (что важно, поскольку добавление флуорофоров на концах цепи увеличит R _г из-за их массы), также предоставили доказательства незначительного сжатия ниже 2 M Gdn (Рис. 1 A , Bottom ) (45, 46). Тем не менее, значительные расхождения сохраняются в отсутствие денатуранта, даже когда для анализа одного и того же белка в идентичных условиях используются одни и те же подходы (рис.1, SI Приложение , рис. S1 и S2 и Movie S1). Недавние исследования показали, что это несоответствие может быть устранено с помощью целостного анализа (42, 43), подчеркивая разделение между обычно фиксированной, пропорциональной зависимостью между R _g (определено из измерений SAXS) и R _ee (определено из Измерения FRET) без необходимости вызывать возмущение из-за присутствия флуорофоров (42).

Рис. 1.

Улучшенные процедуры анализа не устраняют расхождения между измерениями IDP, полученными с помощью SAXS и FRET.( A ) Данные R17 SAXS и FRET (из ссылки 43). ( A , Top ) Сравнение результатов, полученных при подборе данных FRET в предположении гауссовой цепи и данных SAXS с использованием приближения Гинье. ( A , Bottom ) Данные SAXS и FRET подходят с использованием нашего метода анализа MFF и аналогичного подхода (45). Черная линия лучше всего подходит гиперболической линии тренда; серые линии — 95% доверительные интервалы. ( B ) Профили SAXS для R17 ( Левый , данные из Ref.43) и N98 ( справа, , данные из ссылки 42), согласованные с MFF, значительно отличаются от ожидаемого поведения с использованием значений ν, взятых из аналогичного анализа данных FRET. Сплошные линии обозначают область, используемую в процедуре подгонки; пунктирные линии представляют экстраполяцию к более высоким значениям q. Хотя подходило ~ 500 точек на кривую рассеяния (серый цвет), большинство показанных данных были объединены в интервалы только для целей презентации (черные точки). Повороты или изгибы данных при более высоких значениях qR _g, скорее всего, связаны с ошибками при вычитании буфера, что более сложно при высоких значениях q, низкой концентрации образца и / или пониженном контрасте рассеяния (например.g., при высоком денатуранте, см. Материалы и методы ). ( C ) Тенденции гидрофобности (Kyte – Doolittle) в зависимости от ν в отсутствие денатуранта, полученного из SAXS, путем применения MFF к опубликованным данным, собранным из последовательностей складываемых белков (42, 45, 67⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓⇓ № – 82). Также показаны результаты исследований FRET, рассчитанные как в исх. 20 для опубликованных данных (20, 42). Красная линия тренда для данных FRET из исх. 20. Черная линия тренда лучше всего соответствует показанным результатам SAXS. ( C , Top ) Гистограмма гидрофобности репрезентативных белков в PDB (набор данных из исх.45). ( D ) Кумулятивные распределения ν для репрезентативных белков из PDB, выведенные из линий тренда, показанных в C .

Чтобы всесторонне сравнить результаты исследований SAXS и FRET, мы собрали опубликованные наборы данных для различных ВПЛ (Рис. 1 C и D и SI Приложение , Таблица S3). При анализе с использованием нашего моделирования и молекулярного форм-фактора (MFF) исследования SAXS неизменно находят ν> 0,53 (среднее значение = 0,55), тогда как ν, полученное из исследований FRET, обычно падает ниже 0.50 (среднее значение = 0,46). Это расхождение 0,09 является существенным по отношению ко всему диапазону ν, который варьируется только от 0,6 (для SARW) до 0,5 (где внутрицепочечные взаимодействия одинаково благоприятны для взаимодействий растворитель-цепь) до 0,33 (для уплотнения в сферу; это несколько выше для несферических компактных состояний). В целом результаты SAXS предполагают, что конформационные ансамбли большинства развернутых белков и IDP с белковоподобным составом последовательностей сильно расширены (ν> 0.5) и вода является хорошим растворителем, тогда как FRET предполагает иное (рис. 1 D ).

Приведенные выше и другие результаты привели нас и других к поиску факторов, которые могут способствовать стойкому несоответствию между представлениями измерений IDP на основе SAXS и FRET (9, 29, 39, 42, 43, 47⇓⇓ – 50 ). Одна альтернатива, обозначенная здесь «гипотеза разделения гетерополимера», утверждает, что гетерополимерная природа белков приводит к изменению во взаимосвязи между R _g и R _ee, взаимосвязь, которая является фиксированной (т.е.е., независимо от длины цепи) в соотношении 6,3 для гомополимера SARW. Недавнее моделирование показывает, что это соотношение не может быть зафиксировано для развернутых белков, которые более сложны, чем гомополимеры (29, 39, 42, 43). Эта «развязка» предлагает возможное объяснение несоответствия между SAXS (который чувствителен к R _g) и FRET (который чувствителен к R _ee). Напротив, вторая гипотеза, обозначенная здесь «гипотеза взаимодействия флуорофора», предполагает, что в отсутствие денатуранта флуорофоры FRET взаимодействуют друг с другом и / или с полипептидной цепью, вызывая конформационный ансамбль конструкций, модифицированных флуорофором, к сокращаются больше, чем в отсутствие этих флуорофоров (9, 45, 47, 50, 51).

Здесь мы обращаемся как к гипотезе разделения, так и к гипотезе взаимодействия флуорофора. Мы использовали SAXS, чтобы охарактеризовать радиус вращения IDP до и после добавления обычно используемого флуорофора. Мы обнаружили, что такая модификация флуорофора изменяет конформационный ансамбль в отсутствие денатуранта, уменьшая его размеры, измеренные методом SAXS, на 10–20%. В сочетании с улучшенными процедурами анализа с использованием реалистичных смоделированных ансамблей как для SAXS, так и для FRET, этого индуцированного флуорофором коллапса достаточно для согласования результатов исследований SAXS и FRET.Параллельно с этим мы представляем измерения SAXS на полиэтиленгликоле (PEG), подтверждающие предыдущие сообщения о том, что добавление флуорофоров также вызывает сжатие этого полимера SARW (9), открытие, которое недавно было подвергнуто сомнению (42). Кроме того, мы показываем, что SAXS может извлекать R _g, ν и R _ee с точностью выше 97% при анализе с использованием нового MFF, разработанного для гетерополимеров. Эти симуляции достаточно точны для воспроизведения данных рассеяния без необходимости выбора только подансамбля конформаций, как это обычно используется в других процедурах подбора данных.Наконец, мы демонстрируем степень, в которой можно использовать небольшие отклонения от идеальности в данных SAXS, чтобы сделать вывод о смещениях внутри гетерополимерного конформационного ансамбля.

Результаты

Маркировка флуорофора вызывает коллапс.

Чтобы напрямую проверить гипотезу взаимодействия флуорофора, мы измерили профили SAXS немодифицированного IDP и того же самого IDP, сайт-специфически модифицированного одной или двумя копиями обычно используемого флуорофора FRET Alexa-488. Мы выбрали этот флуорофор, потому что он относительно небольшой и гидрофильный, что снижает вероятность образования взаимодействий, которые могут изменить развернутый ансамбль, по сравнению с большинством других флуорофоров FRET (43).В качестве тестового белка мы использовали PNt, IDP с хорошим поведением, содержащий 334 аминоконцевых остатка пертактина (52). Для получения PNt, модифицированного моно- и двойным флуорофором, мы использовали тиол-реактивный Alexa-488 для модификации остатков цистеина в положении 117 (PNtC-Alexa488) или положениях 29 и 117 (PNtCC-Alexa488). В качестве контроля мы использовали немодифицированный родительский белок (PNt) и алкилирование для получения конструкций без флуорофоров (PNtC-Alkd и PNtCC-Alkd).

Добавление Alexa-488 снижает размеры PNt, измеренные методом SAXS, как в отсутствие Gdm, так и при промежуточных концентрациях (рис.2 A и SI Приложение , Таблица S1). В частности, при переходе от 4 к 0 M Gdn, R _g и ν уменьшаются почти в два раза для модифицированного флуорофором PNtCC-Alexa488, чем для PNtCC-Alkd или PNt (рис.2 B и SI Приложение ). , Таблица S1). Эти данные указывают на то, что присутствие Alexa-488 приводит к сокращению конформационного ансамбля PNt. Следует отметить, что в то время как 2 M Gdn является хорошим растворителем (ν> 0,50) для немеченого белка, мечение флуорофором приводит к измеримым внутримолекулярным взаимодействиям даже при этой относительно высокой концентрации денатуранта (рис.2 B , Правый ). В соответствии с общим происхождением эффекта, величина этого зависящего от денатуранта расширения качественно аналогична наблюдаемой FRET для множества других белков (Fig. 1 B ) (42, 43). Мы также наблюдали зависимое от флуорофора снижение среднего R _g и ν для конструкции с одной меткой PNtC-Alexa488 (рис. 2), что указывает на то, что, помимо предполагаемых взаимодействий флуорофор-флуорофор, взаимодействия флуорофор-белок также вносят вклад в наблюдаемое сокращение.

Рис. 2.

Добавление Alexa-488 изменяет разброс PNt. ( A ) Безразмерные графики Кратки для PNt дикого типа (серый), PNtCC-алкилированного (черный), PNtC-Alexa488 (одиночная метка, синий) и PNtCC-Alexa488 (двойная метка, красный) в 0,15 M KCl, 2 M Gdn и 4 M Gdn. Планки погрешностей представляют собой распространенную ошибку из SD, рассчитанного с учетом статистики подсчета (Пуассона), где σ = √counts. Данные были подогнаны и отображены в соответствии с процедурой, описанной на рис. 1 (см. Также Материалы и методы ).Результаты для алкилированного PNt неотличимы от PNt дикого типа, но есть значительные различия для PNt, меченного флуорофором Alexa-488. ( B ) R _г и ν как функция концентрации Gdn. Данные серых кривых из исх. 45.

Следует отметить, что это сокращение происходит, несмотря на установившиеся значения анизотропии флуоресценции для PNtCC-Alexa488, равные 0,11 и 0,08 в 0 и 2 M денатуранте, соответственно ( SI Приложение , Таблица S2), ниже порогового значения, которое обычно рассматривается как доказательство. свободного вращения прикрепленных к белкам флуорофоров (42, 53).Из этих результатов мы заключаем, что добавление даже одного из более мелких, более гидрофильных флуорофоров, обычно используемых для измерений FRET, может значительно уменьшить размеры неупорядоченной полипептидной цепи (42, 43, 53), наблюдение, которое помогает согласовать SAXS – FRET несоответствие.

Размеры ПЭГ, полученные с помощью SAXS, не зависят от концентрации полимера.

В более раннем исследовании мы сообщили, что добавление Alexa-488/594 к PEG приводило к денатурант-зависимому изменению FRET (9), аналогичному тому, которое наблюдается в развернутых белках.Однако сжатия не наблюдалось, когда эквивалентный немеченый полимер исследовали с помощью малоуглового рассеяния нейтронов. Было высказано предположение, что высокие (3 мМ) концентрации ПЭГ, использованные в этом исследовании рассеяния, маскируют то, что в противном случае было бы зависимым от денатуранта изменением R _g (42). Чтобы проверить это, мы измерили профили SAXS в диапазоне концентраций ПЭГ и денатуранта и не обнаружили никаких доказательств значительного изменения размеров этого высокогидрофильного полимера (рис.3). Аналогичным образом, во всех условиях мы наблюдали показатель Флори, равный 0,60, что дополнительно подтверждает, что ПЭГ ведет себя как SARW независимо от концентрации денатуранта. Эффекты флуорофора, а не сокращение цепи, таким образом, остаются простейшей интерпретацией денатурант-зависимых изменений FRET, ранее наблюдавшихся для меченных флуорофором вариантов этого полимера (9).

Рис. 3. Профили

SAXS ПЭГ не зависят от денатуранта. ( A ) Безразмерные графики Кратки для ПЭГ 24 кДа при 0.5 мМ и 0,05 мМ в 0,15 M KCl, 2 M Gdn и 4 M Gdn. Нормализованный профиль рассеяния PEG 24 кДа не изменяется от 0 до 4 M Gdn в широком диапазоне концентраций PEG. Для ясности профили рассеяния смещены по вертикали. Данные были подогнаны и отображены с использованием процедуры, описанной на фиг. 1. ( B ) R _g и ν как функции концентрации Gdn для 0,5 мМ и 0,05 мМ PEG. Открытые и закрытые точки смещены по горизонтали для ясности.

Проверка гипотезы о разделении гетерополимеров.

Взятые вместе, вышеупомянутые наблюдения показывают, что флуорофоры, добавленные к IDP, приводят к значительному сокращению, что способствует различным выводам, сделанным из предыдущих исследований SAXS и FRET. Эти наблюдения, однако, не исключают возможность того, что, как утверждалось ранее (42), развязка гетерополимера (т. Е. Связь между R _ee и R _g, отклоняющаяся от фиксированной пропорциональности, наблюдаемой для гомополимеров) также может вносить свой вклад. к расхождению SAXS – FRET.

Чтобы исследовать, приводит ли конформационный ансамбль реалистичного гетерополимера к значительной непропорциональности между R _ee и R _g, мы использовали Upside, наши модели Cβ-уровня (54, 55), чтобы смоделировать рассеяние для развернутых ансамблей. 50 белков из 250–650 остатков, случайно выбранных из банка данных по белкам (PDB). В своей простейшей версии Upside представляет собой каркас полипептида с шестью атомами на остаток (N, Cα, C, H, O и Cβ) и использует зависимые от соседей карты Рамачандрана, полученные из библиотеки катушек (56).Такие модели способны воспроизводить R _g и NH остаточные диполярные связи (RDC), наблюдаемые в развернутых белках; эти два параметра чувствительны к глобальным и локальным свойствам магистрали соответственно (57, 58). Для создания ансамблей гетерополимеров мы отнесли каждый Cβ как гидрофобный, так и полярный (H / P). Благоприятные профили взаимодействия (форма, показанная в ссылке 45, SI, приложение , рис. S3 A ) вводятся только между атомами Cβ гидрофобных остатков, а самоуничтожение накладывается на все атомы.Для каждой из 50 последовательностей мы использовали 30 различных сил взаимодействия Cβ. После создания этих 1500 ансамблей H / P конформаций скелета мы добавили явные боковые цепи (59), а затем рассчитали профили рассеяния гидратированных версий белков (60).

Для этих 1500 ансамблей мы сравнили истинные значения R _g, ν и R _ee, рассчитанные непосредственно из атомных координат, со значениями, полученными путем аппроксимации моделированного рассеяния (с добавлением реалистичных случайных ошибок) с использованием нашей исходной MFF, разработанной для гомополимеров (45).Как и в случае гомополимеров, мы находим, что значения R _ee и R _g, наблюдаемые в этих симуляциях, пропорциональны (т. Е. Остаются связанными) с коэффициентом корреляции R ² = 0,99 (рис. 4 А ). Затем мы аппроксимируем смоделированные профили рассеяния, чтобы определить: R _g ^{соответствует}, ν ^{соответствует} и R _ee ^{соответствует}, причем последнее получено с использованием соотношения (R _ee / R _g) ² = G (ν), где G (ν) была откалибрована с использованием наших исходных моделей гомополимеров ( SI Приложение , рис.S1 D ). Мы обнаружили среднее абсолютное отклонение всего 1,3 Å, 0,011 и 4,2 Å соответственно, что представляет собой среднюю абсолютную ошибку 3%, 2% и 4% для R _g, ν и R _ee ( SI Приложение , рис. S3). Наибольшие отклонения наблюдаются для более компактных конструкций; для более протяженных конформаций (ν> 0,54) ошибка составляет ∼2%. Корреляция R _g ^{соответствует} и R _ee ^{соответствует} осталась высокой, R ²> 0.99.

Рис. 4. Моделирование

обнаруживает сильную связь между R _g и R _ee, а профили SAXS являются надежным показателем R _g, ν и R _ee, а также дают информацию о степени неоднородности. ( A ) Связывание между R _g и R _ee, полученное из смоделированных ансамблей с использованием модели H / P (черный) или нашего потенциала, используемого для сворачивания белков (красный). ( B — D ) Сравнение R _g, ν и R _ee, рассчитанных на основе координат смоделированных ансамблей, со значениями, полученными при подгонке с нашим MFF _het (R _g, ν) с SAXS профили ансамблей со случайно добавленными экспериментальными ошибками.( E ) Отклонения в ν _концов наблюдаются для гетерополимеров с менее хорошо смешанными H / P-образцами (полученными путем аппроксимации наклона зависимости внутрицепочечного расстояния R _{| i — j |} от разделение последовательностей, | i — j |, где | i — j |> N / 2). ( F ) Эффекты Δν _end при различных значениях ν. ( G ) Соответствие экспериментальных данных MFF (R _g, ν, Δν _конец) демонстрирует, что мечение флуорофора и образование петли через дисульфидные связи в PNt вызывает значительные и измеримые отклонения.

Чтобы еще больше уменьшить небольшую ошибку, связанную с применением нашего MFF, полученного из гомополимеров, для рассеивания гетерополимеров, мы создали новый молекулярный форм-фактор, MFF _het, используя моделирование H / P, описанное выше, и ту же общую процедуру. как описано в исх. 45. Применение этого слегка модифицированного MFF _het снижает ошибки в подогнанных R _g, ν и R _ee до 0,5, 0,005 и 2,7 Å, соответственно, что составляет 1%, 1% и 2% среднего значения. абсолютная погрешность (рис.4 B — D ). Эти результаты демонстрируют, что наша процедура анализа на основе MFF возвращает точные значения для R _g и R _ee, которые остаются пропорциональными (т. Е. Связанными) даже для гетерополимеров.

Далее мы рассмотрели, насколько наши выводы чувствительны к деталям нашей модели или энергетической функции. Чтобы проверить это, мы провели дополнительное моделирование, используя более подробную версию алгоритма Upside, который способен сворачивать de novo белки с <100 остатками (54, 55).В этой версии каждая из 20 боковых цепей представлена многопозиционным эксцентриковым валиком, который позволяет детально упаковать сердечник. Энергетическая функция включает водородные связи, взаимодействия боковая цепь-боковая цепь и боковая цепь-основная цепь, аминокислотно-зависимые потенциалы двугранного угла и член десольватации. Используя эту модель, мы сгенерировали 30 ансамблей для каждого из шести белков (PNt и пять других белков, случайно выбранных из 50, описанных выше), используя короткие симуляции, которые выбирают только развернутое состояние.Мы получили ансамбли, запустив моделирование обмена репликами в диапазоне температур от 280 до 320 К, как описано ранее (54, 55). Значения ν, полученные из этих ансамблей, находились в диапазоне от 0,4 до 0,6 в зависимости от температуры моделирования. Примечательно, что значения R _ee, R _g и ν, полученные непосредственно из этих более реалистичных ансамблей, находятся в близком соответствии со значениями, определенными после подгонки с нашим MFF _het, с почти такой же точностью, что и для более простого H / P-ансамбли (рис.4 A — C , красные точки). Кроме того, непосредственно вычисленные значения для R _g и R _ee для ансамблей остаются пропорциональными с коэффициентом корреляции R ² = 0,99. Следовательно, наш вывод, что R _g и R _ee остаются связанными даже для гетерополимеров, устойчив к деталям нашего моделирования.

Измерение отклонений от идеальности в гетерополимерах.

MFF _het точно отражает общие размеры неупорядоченных гетерополимеров для белковоподобных последовательностей H / P и может использоваться в большинстве случаев.Тем не менее, небольшие, но измеримые отклонения наблюдаются для белков в нашем тестовом наборе с менее хорошо смешанными паттернами H / P ( SI, приложение , рис. S4). Эти различия можно увидеть на графике распределения внутримолекулярных расстояний, где наклон на расстояниях разделения | i — j | > N / 2 может отличаться от среднего наклона, который определяет глобальное значение ν (рис. 4 D ). Мы определяем изменение наклона как Δν _конец (рис. 4 D ). Отрицательные значения Δν _end коррелируют с преобладанием гидрофобных остатков на концах полипептидной последовательности (рис.4 D и SI Приложение , Рис. S4 C ) и с отклонениями в G (ν) ( SI Приложение , Рис. S4 A ) ( R ² ∼ 0.84). Профиль SAXS наиболее чувствителен к Δν _end при низком qR _g (рис. 4 E ).

Для количественной оценки неидеальности гетерополимеров на основе данных SAXS мы создали более общий трехпараметрический форм-фактор, MFF _general (R _g, ν, Δν _end) (рис.4 E и F и Movie S2). Чтобы продемонстрировать его способность давать полезную информацию, мы подобрали данные из PNt, PNtCC-Alexa488 и циркулярного (с дисульфидными связями) PNtCC при 2 M Gdn (рис. 4 F ). Δν _конец уменьшается с ∼0 для PNt до приблизительно -0,1 для PNtCC-Alexa488 и приблизительно до -0,2 для кольцевых PNtCC, что согласуется с увеличением взаимодействий на аминоконце цепи. Менее резкие возмущения, такие как менее хорошо смешанные паттерны H / P и более короткие аминокислотные последовательности с более низким полезным диапазоном qR _g, могут потребовать более высокого отношения сигнал / шум для измерения Δν _end.Тем не менее, эти данные демонстрируют потенциал SAXS для выявления для неупорядоченных полимеров зависимых от последовательности отклонений от поведения гомополимера (рис.4 E и F ), при этом точно измеряя R _g и ν (рис.4 ). А — С ).

В пределе бесконечной длины цепи масштабный показатель Флори ν имеет значения 0,33, 0,50 и 0,60, соответствующие глобулам, случайным блужданиям и SARW, соответственно. Тем не менее, мы и другие придерживаемся прагматического подхода и позволяем ν принимать промежуточные значения; е.g., как получено из наклона графиков масштабирования _{рэндов на} юаней в зависимости от длины цепи или _{рандов ij} в зависимости от | i — j | ( SI Приложение , рис. S6). В поддержку этого подхода можно наблюдать при увеличении силы внутрицепочечного взаимодействия уменьшение как I (q) при высоком q, так и наклона графиков масштабирования для белков из 100-1000 остатков (Fig. 4). Соответственно, мы считаем, что использование значений ν за пределами трех канонических значений обеспечивает законный и практический подход для сравнения качества растворителей для систем разного размера и классификации, является ли вода хорошим или плохим растворителем для полимеров конечной длины.

Обсуждение

В то время как измерения SAXS указывают на то, что вода является хорошим растворителем (ν> 0,5) для развернутых полипептидов, исследования на основе FRET обычно сообщают об обратном (ν <0,5). Однако мы обнаруживаем, что сочетание улучшенных процедур анализа и более тщательного рассмотрения взаимодействий флуорофор-флуорофор и / или флуорофор-цепь достаточно для объяснения этого несоответствия. Эти находки приводят к единой картине, в которой развернутое состояние белков представляет собой SARW при высоком денатуранте и сжимается лишь незначительно (намного меньше, чем ранее сообщалось в литературе FRET) в отсутствие денатуранта.В частности, мы обнаружили, что мечение Alexa-488, широко используемого флуорофора FRET, может изменить конформационный ансамбль IDP, уменьшая R _g и ν даже при низкой анизотропии флуоресценции относительно принятых пределов для свободного вращения флуорофора ( 42, 53). В сочетании с предыдущими исследованиями (9) аналогичные выводы можно сделать для PEG, известного SARW. Эти результаты, наряду с нашим предыдущим результатом о том, что неупорядоченные цепи претерпевают умеренное расширение денатуранта (45), и улучшенные методы извлечения значений R _g из данных FRET (40, 42–44), теперь обеспечивают достаточную основу для устранения несоответствий. между SAXS и FRET по размерам неупорядоченных белков.Фундаментальный и важный вывод полученной единой картины состоит в том, что даже в отсутствие денатуранта вода остается хорошим растворителем для большинства развернутых белков.

Наши данные об эффектах, индуцированных флуорофором, согласуются с предыдущими выводами о том, что молекулярные размеры, выведенные из FRET, могут зависеть от используемой пары флуорофоров, при этом более гидрофобные флуорофоры приводят к большему сокращению (43). МД-моделирование с парой флуорофоров Alexa-488/594, например, привело к 10% сокращению IDP даже в 1 М мочевины (61).Аналогичным образом, недавнее исследование показало, что сигналы одномолекулярного FRET (smFRET) как от ДНК, так и от PEG зависят от условий растворителя, при которых размеры цепей, как ожидается, будут инвариантными (51). Однако, явно не согласившись с нашими данными, Fuertes et al. (42) провели измерения SAXS на пяти IDP с Alexa-488/594 и без них и пришли к выводу, что в среднем изменения, наблюдаемые при добавлении флуорофоров, были минимальными. Однако при рассмотрении каждого белка в отдельности различия кажутся значительными по сравнению с узким диапазоном возможных значений.В частности, для пяти белков, охарактеризованных в этом исследовании, ν _{без метки} — ν _{с меткой} = 0,08, 0,03, 0,03, -0,02 и -0,04 (или 0,09, 0,06, 0,03, -0,02 и -0,08 при анализе с использованием наши процедуры; SI Приложение , рис. S5). Хотя Fuertes et al. (49) утверждают, что только один белок (NLS) демонстрирует сокращение, индуцированное флуорофором, на самом деле четыре из пяти протестированных белков имели статистически значимые индуцированные флуорофором изменения в ν, причем более половины из них демонстрировали сокращение, индуцированное флуорофором (42). по величине, аналогичной сокращению, которое мы наблюдали для меченного флуорофором PNt в воде (45) ( SI Приложение , рис.S5). Вместе эти данные подтверждают последовательную картину возмущений, вызванных флуорофором, которые вносят свой вклад в различия в величине и денатурирующей зависимости R _g, полученные с помощью SAXS и FRET.

Другой фактор, который, как предполагалось, способствовал расхождению между результатами SAXS и FRET, — это отклонения от пропорционального отношения между R _g и R _ee, которое может возникнуть при анализе гетерополимеров по сравнению с гомополимерами (42). В основе этой точки зрения лежит наблюдение, что если переоценить ансамбль (т.е., вычисляет R _g с использованием только подмножества конформаций), многие возможные значения R _ee согласуются с любым заданным R _g (и наоборот). Вместо того, чтобы выбирать подансамбль конформаций для соответствия паре параметров, мы выбрали альтернативный подход (45). С самого начала мы генерируем физически правдоподобные ансамбли, создаем MFF, используя все эти ансамбли, и проверяем, соответствует ли он данным в целом. Мы обнаружили, что наша MFF точно соответствует всему профилю рассеяния (а не только R _g), что обеспечивает надежную поддержку нашей процедуры.Поскольку мы можем вычислить значения R _g и R _ee непосредственно из базовых ансамблей, у нас есть процедура для получения этих двух параметров путем подгонки данных SAXS с нашим MFF. Мы обнаружили, что для реалистичных денатурированных ансамблей складываемых последовательностей моделируемые пары R _g и R _ee, а также их аналоги, определенные из профилей рассеяния, пропорциональны ( R ²> 0,99). Это оставляет красители как источник остающегося несоответствия между SAXS и FRET.

Используемый нами MFF несовершенен в том смысле, что несколько разные ансамбли могут быть подобраны с использованием одних и тех же параметров R _g и ν. Но погрешность этих двух параметров очень мала по сравнению с их истинными значениями (Рис. 4 A — C ). Учет эффектов гетерополимера не меняет этого вывода. Из этих результатов мы заключаем, что SAXS хорошо подходит для извлечения как R _g, так и R _ee для неупорядоченных гетерополимеров, избегая при этом потенциальных артефактов из-за взаимодействий флуорофора с полипептидными цепями.Этот вывод не отрицает возможности FRET для измерения динамики, связывания и конформационных изменений; Однако в нем подчеркивается, что следует проявлять осторожность при использовании FRET для определения количественных расстояний в исходной немеченой биомолекуле.

Почти дюжина наборов данных IDP SAXS, представленных здесь, и ранее (45), как было показано, хорошо подходят для нашего общего MFF ( SI, приложение , таблицы S1 и S3). Это открытие предполагает, что взаимодействия, приводящие к сокращению цепи, распространяются по белковым последовательностям.Водорастворимые, хорошо уложенные белковые последовательности обычно представляют собой хорошо перемешанные гетерополимеры с относительно небольшими участками последовательных гидрофобных остатков (62). Эти хорошо перемешанные последовательности имеют тенденцию вести себя как гомополимеры при измерении глобальными методами с низким разрешением, такими как SAXS. Действительно, мы продемонстрировали, что при достаточном качестве данных плохо смешанные последовательности можно идентифицировать по их отклонению от нашего MFF (Рис. 4 D — F ). Большие отклонения могут возникать у некоторых IDP, особенно с частичным сворачиванием, необычным паттерном последовательностей (например,g., блок-сополимеры) и / или в условиях тесноты, которые могут выполнять определенные функции (63, 64).

Представленная здесь унифицированная картина, касающаяся исследований SAXS и FRET развернутого состояния в отсутствие денатуранта, усиливает мнение о том, что вода является хорошим растворителем для большинства развернутых полипептидов, свойство, которое должно уменьшать неправильную укладку и агрегацию, одновременно облегчая синтез и транспорт. То, что большинство белков, тем не менее, легко сворачивается в воде, предполагает, что взаимодействия, управляющие сворачиванием, являются более стабилизирующими, т.е.е. преодолеть способность воды сольватировать развернутое состояние — чем те, которые способствуют неспецифическому коллапсу. Действительно, наблюдение, что, несмотря на минимальные доказательства значительного сокращения развернутого состояния даже при полном отсутствии денатуранта, некоторые белки остаются стабильно свернутыми до 6 M Gdn (41, 65), предполагает, что нативные взаимодействия гораздо более благоприятны, чем любые другие. неспецифические взаимодействия, связанные с коллапсом. Однако, учитывая высокоспецифический характер взаимодействий, образующихся в нативных белках, их способность преодолевать сольватацию развернутой цепи, возможно, не удивительна.

Материалы и методы

PNtCC и PNtC были экспрессированы в Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS и очищены от телец включения, как описано ранее (45, 52, 66), со следующими модификациями. После солюбилизации телец включения конструкции PNt повторно укладывали в 50 мМ Tris pH 7,2 с 50 мМ β-меркаптоэтанола (βME). Перед заключительной стадией эксклюзионной хроматографии к исходному белковому раствору добавляли 20 мМ βМЕ.

Дополнительную информацию об алкилировании белков и маркировке Alexa-488, а также измерениях стационарной анизотропии, анализе данных SAXS и моделировании можно найти в приложении SI .

Примечание добавлено в доказательство.

Во время обзора было опубликовано исследование, в котором флуорофоры участвовали в усилении аффинности связывания между двумя IDP (83).

Благодарности

Мы благодарим Шриниваса Чакраварти и М. Чемпиона за их помощь в области SAXS и масс-спектрометрии, соответственно; и О. Бильзель, Х. С. Чан, С. Такахаши, Р. Бест, Р. Паппу, Д. Тирумалай, Ю. Бай, А. Холхаус, Э. Мартин и Б. Шулер за полезные обсуждения. Эта работа была поддержана грантом NIH GM055694 (Т.R.S.) и GM130122 (для T.R.S. и P.L.C.), Фонд W. M. Keck Foundation (P.L.C.) и Национальный научный фонд гранты GRF DGE-1144082 (для J.A.R.) и MCB 1516959 (для C.R. Matthews, который финансировал периодические встречи между нашими лабораториями). Использование Усовершенствованного источника фотонов, пользовательского объекта Управления науки, находящегося в ведении Управления науки Министерства энергетики (DOE) Аргоннской национальной лабораторией, поддерживалось Министерством энергетики в рамках контракта DEAC02-06Ch21357. Этот проект поддержали NIH 2P41RR008630-18 и 9 P41 GM103622-18.

Сноски

Вклад авторов: J.A.R., M.A.B., K.W.P., P.L.C. и T.R.S. спланированное исследование; J.A.R., M.A.B., A.M.Z., P.L.C. и T.R.S. проведенное исследование; J.A.R., M.A.B., P.L.C. и T.R.S. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; J.A.R., M.A.B., P.L.C. и T.R.S. проанализированные данные; и J.A.R., M.A.B., K.W.P., P.L.C. и T.R.S. написал газету.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.
Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1813038116/-/DCSupplemental.

Одномолекулярный FRET и конформационный анализ бета-аррестина-1 посредством расширения генетического кода и реакции Se-click

* Соответствующие авторы

^a Тяньцзиньский институт промышленной биотехнологии Китайской академии наук, экономическая зона аэропорта Тяньцзинь, Тяньцзинь, Китай

^б Ключевая лаборатория экспериментальной тератологии Министерства образования и Департамента биохимии и молекулярной биологии, Школа фундаментальных медицинских наук, Медицинский колледж Челоо, Университет Шаньдун, 44 Wenhua Xi Road, Цзинань, Шаньдун, Китай
Эл. Почта: sunjinpeng @ sdu.edu.cn

^c Школа наук о жизни, Объединенный центр наук о жизни Цинхуа-Пекин, Пекинский инновационный центр структурной биологии, Университет Цинхуа, район Хайдянь, Пекин, Китай
Эл. Почта: chunlai @ tsinghua.edu.cn

^д Департамент физиологии и патофизиологии, Школа фундаментальных медицинских наук, Пекинский университет, Ключевая лаборатория молекулярно-сердечно-сосудистых исследований, Министерство образования, округ Хайдянь, Пекин, Китай

^e Институт биофизики Китайской академии наук, район Чаоян, Пекин, Китай

^f Университет Китайской академии наук (UCAS), район Шицзиншань, Пекин, Китай

^г Шэньчжэньский институт трансфузионной медицины, Шэньчжэньский центр крови, район Футянь, Шэньчжэнь, Китай

^ч Школа наук о жизни, Университет науки и технологий Китая, район Баохэ, Аньхой, Китай

^и Школа биологических наук и технологий, Университет Цзинань, Цзинань, Шаньдун, Китай

Визуализация синдрома Конна

Какое сканирование лучше всего для опухоли надпочечников и синдрома Конна?

Типичная компьютерная томография, демонстрирующая аденому правого надпочечника, продуцирующую альдостерон (стрелка), вызывающая синдром Конна.Без сомнения, лучший рентгеновский снимок или сканирование для пациентов с первичным гиперальдостеронизмом — это «КТ с контрастным усилением». На КТ без усиления (без контраста) аденомы обычно представляют собой хорошо разграниченные круглые или овальные поражения с однородными и относительно низкими Значения ослабления.Добавление контраста помогает лучше визуализировать сосуды, и, таким образом, КТ с контрастом и без него — лучший вариант. Если у вас аллергия на в / в контраст, вы можете пройти КТ без контраста, что не так хорошо , но лучше, чем без сканирования. Практически во всех случаях это сканирование — это все, что вам нужно . МРТ помогает таким пациентам лишь изредка. Доктор Карлинг опубликовал одно из знаковых исследований, когда дело доходит до визуализации аденомы, продуцирующей альдостерон (APA). Мы часто называем этот тип компьютерной томографии с контрастированием надпочечников КТ по протоколу надпочечников .

Что мы можем сказать по компьютерной томографии надпочечников? Из правильно проведенной компьютерной томографии надпочечников можно многому научиться, поэтому в ваших интересах, чтобы ее проводили врачи, которые проводят много подобных операций.Опыт действительно имеет значение. Сканирование покажет, в каком надпочечнике находится опухоль (правый или левый) и где в надпочечнике она расположена. Он также покажет размер опухоли, продуцирующей альдостерон, и ее расположение относительно почки, желудка, селезенки, печени, поджелудочной железы, кишечника и основных кровеносных сосудов, таких как полая вена и почечные вены.

Очень большой объем этих операций доктора Карлинга позволил ему опубликовать научные исследования, демонстрирующие, что в аденомах, продуцирующих альдостерон (APA), существует сильная корреляция между визуализирующим фенотипом (т.е. как выглядит ваша опухоль на компьютерной томографии), гистологию (как выглядит ваша опухоль под микроскопом) и генотип (какой ген мутировал в опухоли). Это важно, так как он может предсказать, кто может сразу пойти на операцию с отличным результатом, а кому может потребоваться забор крови из надпочечников.

МРТ, демонстрирующая левую альдостероному (аденома, продуцирующую альдостерон; APA), вызывающую синдром Конна, и после удаления с помощью адреналэктомии Mini Back Scope (MBSA).Доктор Карлинг, примечание редакции: если у вас первичный гиперальдостеронизм, не беспокойтесь о том, что ваш эндокринолог или рентгенолог думает о вашем сканировании, размере опухоли или локализации опухоли — позвольте нам решить — мы делаем больше это чем никто. Кроме того, не тратьте время на ненужные дорогие снимки (например, МРТ) или инвазивную процедуру взятия пробы надпочечников. В редких случаях он может вам понадобиться, но чаще всего вы этого не делаете, и неопытные врачи и хирурги получат МНОГО снимков и рентгеновских снимков, которые вам не нужны.Доктор Карлинг видел все это, и почти у всех пациентов есть снимки, которые им не нужны, и эти снимки сбивают с толку врачей и вызывают у пациентов и врачей слишком много страха и опасений. Доктор Карлинг создал научную основу болезни посредством крупных международных исследований и может за считанные минуты выяснить, что происходит с вашей опухолью надпочечников, то есть с аденомой надпочечников, продуцирующей альдостерон (APA).

Просто свяжитесь с нами. Отправьте нам свои данные и скан. Мы знаем, что делать. Мы можем значительно сэкономить ваше время и деньги, избегая расточительных и ненужных анализов, и направить вас на путь к излечению!

Забор вены надпочечников (AVS) при опухолях надпочечников .Иногда требуется отбор пробы из надпочечниковой вены, чтобы отличить односторонний от двустороннего источников секреции альдостерона надпочечниками. Это интервенционное радиологическое исследование. АВС следует выполнять всем пациентам, у которых КТ неоднозначна или демонстрирует опухоли надпочечников как с правой, так и с левой стороны. Через небольшие катетеры образцы крови берут из каждой надпочечниковой вены и нижней полой вены последовательно или одновременно. В опытных центрах проводят катетеризацию двусторонних вен надпочечников и забирают пробы с техническим успехом, превышающим 90%.Технический успех напрямую связан с опытом оператора, поэтому рекомендуется, чтобы процедура выполнялась одним или двумя операторами в учреждении, чтобы максимально повысить их квалификацию.

Д-р Карлинг, от редакции: позвоните нам, если ваш эндокринолог не имеет большого опыта в выборе лучшего интервенционного радиолога для выполнения процедуры взятия пробы из надпочечниковой вены (если она вам нужна)! Мы знаем, кто сможет проделать эту процедуру с большим успехом и безопасно. Но помните, МНОГИМ пациентам с синдромом Конна и гиперальдостеронизмом не требуется отбор пробы надпочечников .

Предупреждение: техническая информация о взятии пробы из надпочечников: поскольку нормальный надпочечник вырабатывает кортизол в ответ на АКТГ, уровни венозного кортизола используются в качестве положительного контроля для определения адекватности взятия пробы AV. Уровень кортизола в каждой надпочечниковой вене сравнивается с периферическими образцами, взятыми из нижней полой вены. После того, как будет доказано, что образцы из левой и правой надпочечников были взяты надлежащим образом, следующим шагом будет определение того, передаются ли результаты в сторону одной железы (посмотрите, выше ли уровень гормона с одной стороны, чем с другой).Уровень альдостерона (A) в каждом образце нормализован по уровню кортизола. Затем одна сторона делится на другую для определения индекса латерализации (LI). Индекс латерализации более 4 совместим с односторонним источником альдостерона. Большинство центров используют LI для диагностики односторонней этиологии ПА; Подавление контралатеральной железы также может подтвердить наличие аденомы, продуцирующей альдостерон (APA).

Доктор Карлинг, редакционная заметка: Опять же, если у вас первичный гиперальдостеронизм, позвольте нам проверить ваши снимки (пришлите нам свою компьютерную томографию).У доктора Карлинга больше опыта в изучении опухолей надпочечников с помощью компьютерной томографии (и много публикаций об этом), чем у почти любого эндокринолога или рентгенолога (рентгенолога) в мире. Кроме того, не тратьте время на ненужные дорогостоящие снимки (например, МРТ, который почти никому с этим типом проблемы надпочечников не нужен) или на инвазивную процедуру взятия пробы надпочечников. Иногда он может вам понадобиться, но чаще всего нет. Доктор Карлинг все это видел. Он создал научную основу болезни с помощью крупных международных исследований и может за считанные минуты выяснить, что происходит с вашими альдостерон-продуцирующими аденомами (APA) .

Если у вас опухоль надпочечника, не волнуйтесь. Это все, что мы делаем, и мы можем упростить вам задачу. Просто свяжитесь с нами. Отправьте нам свои данные и скан. Мы знаем, что делать. Мы можем значительно сэкономить ваше время и деньги, избегая расточительных и ненужных анализов, и направить вас на путь к излечению!

Отслеживание промежуточных продуктов Са2 + АТФазы в реальном времени с помощью рассеяния рентгеновских лучей в растворе

Abstract

Sarco / эндоплазматический ретикулум Ca ²⁺ Транспортеры АТФазы (SERCA) регулируют передачу сигналов кальция путем обратного захвата активных ионов кальция во внутренние запасы.Структурные переходы, связанные с транспортом, были охарактеризованы рентгеновской кристаллографией, но критические промежуточные соединения, участвующие в переключении доступности через мембрану, отсутствуют. Мы объединили эксперименты по рассеянию рентгеновских лучей в растворе с временным разрешением (TR-XSS) и моделирование молекулярной динамики (MD) для отслеживания в реальном времени согласованной динамики цикла реакции SERCA в нативной мембране. Равновесное состояние [Ca ₂] E1 перед лазерной активацией отличалось расположением доменов по сравнению с кристаллическими структурами и после индуцированного лазером высвобождения клеточного АТФ, a 1.Образовался 5-мс интермедиат, который показал закрытие цитоплазматических доменов, типичных для состояний E1, связанными Ca ²⁺ и АТФ. Последующее 13-мс переходное состояние показало ранее неразрешенное расположение исполнительных (A) доменов, которые открывали сайт связывания ADP после фосфорилирования. Следовательно, полученные модели TR-XSS определяют относительное время до сих пор неуловимых перегруппировок доменов в естественной среде.

ВВЕДЕНИЕ

Аденозин-5′-трифосфат (АТФ) -зависимый транспорт ионов Ca ²⁺ через мембрану сарко / эндоплазматического ретикулума (SR / ER) восстанавливает уровни кальция в цитоплазме после передачи сигналов кальция.Этот процесс очень активен в прекращении мышечного сокращения и является центральным для физиологии мышц и сердца ( 1 ), но также, например, в секреторной ( 2 ) и нейрональной ( 3 ) тканях. Аденозинтрифосфатаза (АТФаза) (SERCA) SR / ER Ca ²⁺ проходит через мембрану SR / ER и катализирует активный транспорт из цитоплазмы в SR / ER двух ионов Ca ²⁺ ( 4 ). Нарушения функциональности SERCA и, следовательно, гомеостаза Ca ²⁺, могут приводить к патологическому мышечному контролю, например, при сердечных заболеваниях, и нарушении секреторных функций ( 5 ).Гидролиз АТФ в активном центре, расположенном в цитоплазматических доменах A (исполнительный механизм), N (связывание нуклеотидов) и P (фосфорилирование), и связывание ионов в M (мембранном) домене перемещают белок между состояниями высокого (E1) и низкого (E2) ионное сродство, сопровождающееся альтернативным доступом к внутренним сайтам связывания ионов (рис. 1). Используя ингибиторы, аналоги АТФ и металлофториды, SERCA был захвачен и кристаллизован в промежуточных состояниях, описывающих реакционный цикл на атомистическом уровне ( 6 , 7 ).Полученные кристаллические структуры показывают, что транспорт Ca ²⁺ связан с обширными меж- и внутридоменными перестройками, которые связывают гидролиз АТФ с переносом ионов. Однако кристаллические структуры демонстрируют динамику только в локальном пространственном масштабе ( 8 , 9 ), в то время как крупномасштабная динамика вызывает исчезновение особенностей электронной плотности и, кроме того, ключевые структурные промежуточные соединения, связанные с аденозин-5′-дифосфатом (ADP) и высвобождение Ca ²⁺ отсутствует (рис.1А). Мониторинг в реальном времени динамики SERCA, возможно, может разрешить переходные структурные состояния, недоступные для известных протоколов захвата, а также ответить на фундаментальный вопрос, в какой степени структурные перестройки, определенные с помощью рентгеновской кристаллографии в смесях детергент-липид, сохраняются в нативной мембране, которая имеет высокоспецифический состав липидов ( 10 ).

Рис. 1 Основные состояния, участвующие в SERCA-опосредованном транспорте Ca ²⁺.

( A ) Схема реакционного цикла основных состояний SERCA и кристаллических структур (PDB ID), использованных в структурном уточнении. [Ca ₂] E1P-ADP и [Ca ₂] E1P: ADP представляют собой переходные и ковалентные состояния фосфорилирования, [Ca ₂] E1P и [Ca ₂] E2P являются фосфорилированными состояниями без ADP, тогда как E2P, E2-P и E2: P _i относятся к ковалентным состояниям, переходным состояниям гидролиза и состояниям фосфофермента, связанным с P _i. ( B ) SERCA [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M) и ( C ) E2-P (PDB ID: 3N5K) кристаллические структуры с N (красный), P (синий), A (желтый ) и домены M (серый), встроенные в имитаторы мембран саркоплазматического ретикулума [состоящие из фосфатидилхолина (синий), фосфатидилэтаноламина (красный), фосфатидилсерина (оранжевый), фосфатидилинозитола (зеленый) и сфингомиелина (розовый), необходимые для конформации липидов]). для достижения перехода E1-to-E2, связанного с транспортом Ca ²⁺.

В нормальных физиологических условиях транспортный цикл [обзор в ( 7 , 11 )] инициируется, когда белок SERCA обеспечивает доступ двух ионов Ca ²⁺ и одной молекулы АТФ к сайтам связывания в M и N доменов, соответственно, таким образом формируя связанное с Ca ²⁺ состояние с закрытой цитоплазматической головной частью ([Ca ₂] E1ATP) (рис. 1). Перестройка, в первую очередь, N-домена, чтобы приблизиться к P-домену, создает основу для аутофосфорилирования Asp ³⁵¹, которое происходит через переходный ([Ca ₂] E1P-ADP) и ковалентный ([Ca ₂] E1P: ADP ) состояния образования фосфоферментов.Структурные перестройки в высокоэнергетическом состоянии [Ca ₂] E1P-ADP приводят к деформации домена A, который, таким образом, тянет трансмембранные (TM) спирали M1 – M2 к цитоплазме, блокируя ионы Ca ²⁺.

Кристаллические структуры, соответствующие состояниям Ca ²⁺-связанного E1 ([Ca ₂] E1) и Ca ²⁺-включенного фосфорилированного E1 ([Ca ₂] E1P-ADP), показали, что связывание АТФ и фосфорилирование связаны с большими структурными изменениями в цитоплазматических доменах, переходящими от открытого и динамичного к компактному и стабильному расположению ( 6 , 7 ).Однако масштабы этого структурного изменения обсуждались. Например, было высказано предположение, что гибкость N-домена вызвана отсутствием АТФ и, следовательно, не зависит от остальной части белка, и что кристаллизованные открытые состояния [Ca ₂] E1 представляют собой лишь некоторые из возможных состояний. в присутствии Ca ²⁺, который может не быть доминирующим, если вообще присутствует в физиологических условиях с высоким содержанием АТФ в цитоплазме ( 12 ).Структуры не содержащего Ca ²⁺ промежуточного соединения E1 демонстрируют более компактное расположение с открытым цитоплазматическим путем, ведущим к сайтам связывания Ca ²⁺ ( 13 , 14 ).

Следующим по структуре известным промежуточным звеном реакционного цикла является открытое наружу состояние E2P, захваченное BeF ₃ ^—, которое следует за диссоциацией АДФ в цитоплазму ( 6 , 7 ). В этом состоянии структурные перестройки домена A индуцируют движения M1-M6, приводящие к искаженным сайтам Ca ²⁺, экспонированным к просвету SR, чтобы обеспечить высвобождение Ca ²⁺.Следовательно, в настоящее время существует пробел в структурных знаниях, связанных с переключателем доступности через мембрану. Структуры состояний Ca ²⁺, включающих [Ca ₂] E1P и [Ca ₂] E2P, связанные с высвобождением АДФ (на этой стадии чувствительны к АДФ) и инициированием высвобождения кальция в просвет SR, ведущего к АДФ -инчувствительное состояние E2P пока неизвестно. Однако эти промежуточные соединения наблюдались, например, по данным биохимической ( 15 ) и флуоресцентной микроскопии ( 16 ).Остальная часть реакционного цикла проходит через состояния E2, связанные с протонированием посредством 2-3 H ⁺ (E2-P) и дефосфорилированием (E2: P _i и E2), что в конечном итоге приводит к конформации E1 и высвобождению протона в цитоплазма.

Кинетика и динамика реакционного цикла SERCA сильно зависят от температуры и условий образца. Например, исследования с временным разрешением, изолирующие частичные реакции, предположили, что этапами, ограничивающими скорость в реакционном цикле SERCA, являются переход E1P – E2P ( 17 ) или реформация состояния E1 после дефосфорилирования E2P ( 18 ), я.е. переходы внутрь-наружу или наруж-внутрь относительно мембраны в зависимости от используемого состояния образца. Следовательно, выбор экспериментальных условий, в которых накапливается ограничивающее скорость состояние при переходе E1P-E2P, может, в принципе, позволить структурные методы, которые исследуют конформационные изменения в реальном времени, чтобы предоставить структурную информацию о неуловимых фосфорилированных промежуточных соединениях, связанных с Ca ²⁺. , если они были задействованы в согласованных действиях. Кроме того, поскольку мембраны SR быстрых скелетных мышц кролика состоят из SERCA до> 90% от общего содержания белка ( 19 ), такая характеристика динамики белка может быть выполнена непосредственно в естественной среде.

В ранних исследованиях дифракции рентгеновских лучей на пастбище, индуцированное лазером высвобождение АТФ из заключенного в клетку АТФ [АТФ γ- (1- [2-нитрофенил] этил) эфир] использовалось для запуска синхронизации циклов реакции SERCA, что позволило обнаружить промежуточный продукт реакции, соответствующий фосфорилированному Ca ²⁺-связанному состоянию в пределах одноциклового оборота ( 20 ). В том же исследовании аналогичное состояние [Ca ₂] E1P наблюдалось для накопления в стационарных условиях, что указывает на то, что переход E1P – E2P может быть лимитирующей стадией в транспортном реакционном цикле Ca ²⁺ .Однако эксперименты по ламеллярной дифракции на частично дегидратированных мультислоях SR могут разрешить только различия профилей, перпендикулярных нормали к мембране, в то время как исследования рассеяния в растворе в принципе позволяют моделировать трехмерные оболочки белковых структур.

Методология рассеяния рентгеновских лучей с временным разрешением (TR-XSS) может использоваться для характеристики тонкой структурной динамики в фотоактивных химических веществах ( 21 ), димеризации белков ( 22 ) и для отслеживания конформационных изменений растворимых веществ. белки ( 23 — 26 ), а также мембранные белки в мицеллах детергентов ( 8 , 27 ) и нанодисках ( 28 ).Также был предложен гибридный подход, способный разрешить как локальные, так и глобальные структурные перестройки ( 29 ). В этих экспериментах с накачкой и зондированием обычно используется импульс лазера накачки для запуска желаемой реакции, за которым следует рентгеновский зондирующий импульс. Устройства ввода на синхротронах третьего поколения могут доставить 10 ¹⁰ фотонов на образец за один импульс рентгеновского излучения длительностью ~ 100 пс ( 30 ). Интенсивность зондирующего импульса можно увеличить, выбирая микросекундные последовательности одиночных рентгеновских импульсов.Это увеличивает отношение сигнал-шум и подходит для отслеживания структурной динамики сложных биологических макромолекул, которые обычно реагируют во временном масштабе от микро до миллисекунд.

В этой работе мы использовали методологию TR-XSS для отслеживания структурной динамики SERCA между 20 мкс и 200 мс после лазерно-индуцированного фотолиза клеточного АТФ, тем самым охватывая как одноцикловую, так и стационарную динамику. Выбранные экспериментальные условия были специфичными для исходного состояния [Ca ₂] E1. Моделирование предымпульсного состояния TR-XSS предполагает компактное расположение цитоплазматических доменов в растворе по сравнению с кристаллическими структурами [Ca ₂] E1.Кинетический анализ структурной динамики после фотолиза клеточного АТФ соответствовал двум переходам со временем нарастания переходного состояния на 1,5 мс (промежуточное состояние) и нарастанием устойчивого состояния на 13 мс (позднее состояние). Промежуточное состояние показало перестройки домена, соответствующие связыванию АТФ и фосфорилированию состояния E1. Позднее состояние показало обширное вращение домена A в сторону положения E2P, но при этом домены P, N и M оставались в основном в положениях E1.Эта конформация раскрывает сайт связывания АДФ. Следовательно, модель позднего состояния TR-XSS описывает ранее ненаблюдаемую структуру, которая соответствует ADP-чувствительному [Ca ₂] состоянию E1P.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Мониторинг динамики реакции SERCA в реальном времени

Для выявления переходных состояний SERCA мы отслеживали одноцикловую динамику и установившееся накопление в реакционном цикле SERCA, отслеживая рассеяние рентгеновских лучей от 20 мкс до 200 мс после лазерного излучения. фотолиз клеточного АТФ.Разностные спектры были получены путем вычитания спектра, записанного за 50 мкс до лазерной вспышки (рис. S1, A и B). Полученные данные о различиях содержали особенности, происходящие из перегруппировок с участием вторичных и третичных структурных элементов, а также окружающей мембраны SR. Отрицательные и положительные особенности при 0,04 и 0,09 Å ^-1, соответственно, стали различимы через 5 мс (рис. 2А), что согласуется с наблюдаемыми скоростями высвобождения АТФ из заключенного в клетку АТФ ( 31 ).Кроме того, отрицательная особенность наблюдалась при 0,12 Å ^–1 и два более слабых положительных пика при 0,16 и 0,22 Å ^–1 соответственно (рис. S1B). Данные не сильно различались после временной задержки в 50 мс, что совпадает с продолжительностью цикла реакции в аналогичных условиях ( 32 ) и указывает на накопление состояния с ограничивающим скорость затуханием для временных задержек> 50 мс. Добавление ингибитора тапсигаргина, который захватывает белок в состоянии E2 ( 33 ), полностью устранило разницу интенсивностей (рис.2Б).

Рис. 2 Мониторинг структурных изменений и кинетики SERCA с помощью TR-XSS.

( A ) Разница в данных рассеяния рентгеновских лучей (черные линии), полученных путем вычитания темных эталонов (-50 мкс) из измерений, записанных от 20 мкс до 200 мс после запуска лазера. Восстановленные данные (красные линии), полученные в результате линейной комбинации базисных спектров и соответствующих плотностей населения, полученных из кинетической модели [см. ( C ) и ( D )], были выровнены с экспериментальными кривыми разностного рассеяния.( B ) Данные TR-XSS для SERCA в присутствии ингибитора тапсигаргина. Масштаб оси y идентичен шкале (A). (C) Независимые от времени базисные спектры, полученные из спектрального разложения, выявили три переходных состояния: раннее состояние (черный), промежуточное состояние (красный) и позднее состояние (синий). (D) Временные сдвиги в плотности населения ранних (черный), промежуточных (красный) и поздних (синий) переходных состояний в результате глобального соответствия трех базисных спектров экспериментальным данным.Квадраты показывают оптимальные линейные комбинации в каждый отдельный момент времени.

Временное развитие переходных состояний лучше всего было представлено последовательной моделью с тремя состояниями (см. Материалы и методы). Спектральное разложение извлекло три независимых от времени базисных спектра (рис. 2C) с временем нарастания от раннего к промежуточному состоянию τ ₁ = 1,5 мс и переходом от промежуточного состояния к позднему τ ₂ = 13 мс ( Рис. 2D). Поскольку спектр раннего базиса был зашумленным и происходил в том же временном режиме, что и фотоактивация клеточного АТФ, мы рассмотрели только структурную интерпретацию промежуточного и позднего базисных спектров.Образование промежуточного состояния могло бы содержать структурную информацию о временно сформированном состоянии во время первого реакционного цикла. Последующее позднее состояние определялось базисным спектром с ~ 6.5-кратной величиной спектральных особенностей по сравнению с базисным спектром промежуточного состояния. Следовательно, можно ожидать более выраженных структурных изменений, необходимых для формирования позднего состояния. Кроме того, в то время как промежуточное состояние представлено белками SERCA в самом первом раунде реакционных циклов, позднее состояние содержало временные задержки до 200 мс и, следовательно, также измерялось установившееся образование с учетом последующих реакционных циклов, что дополнительно способствует увеличенная величина позднего состояния.При температуре 294 К шкала времени τ ₂ соответствует ранее наблюдаемым скоростям фосфорилирования белка SERCA ( 32 , 34 ), что является относительно медленным шагом, который инициирует движение внутрь-наружу ( E1P в E2P) и транспорт Ca ²⁺ через мембрану SR ( 32 ). Подобная временная эволюция состояний также наблюдалась при независимом анализе разложения по сингулярным значениям (SVD) данных с временным разрешением, который показал присутствие второстепенного компонента при более коротких временных задержках, за которым следовало постепенное увеличение основного компонента при более длительных временных задержках. (Рис.S1, D и E).

Сравнение переходных состояний TR-XSS с промежуточными соединениями кристаллической структуры

Чтобы охарактеризовать идентифицированные переходные состояния структурно, мы сначала сравнили экспериментальные данные с разностными кривыми XSS, полученными вычитанием профилей рассеяния, рассчитанных из кристаллических структур. Поскольку мембраны, содержащие SERCA, в нашем исследовании были приготовлены при уровнях насыщения ионами Ca ²⁺ (см. Материалы и методы), и поскольку весь АТФ в образце был заблокирован в фотокамерах, можно предположить, что доминирующее предымпульсное состояние представлено по [Ca ₂] структуры E1.Мы также сгенерировали разностные профили с использованием линейных комбинаций состояний E1 и E2, поскольку данные малоуглового рассеяния нейтронов (SANS) с использованием детергентов с уровнями дейтерирования, оптимизированными для обеспечения невидимого фона в не содержащем кальция буфере D ₂ O, оказались наиболее подходящими. с линейной комбинацией состояний E1 и E2 SERCA без Ca ²⁺ в растворе ( 35 ). Однако ни в одном случае линейные комбинации не превосходили подгонки, полученные в результате предположения [Ca ₂] E1 [идентификатор банка данных белка (PDB): 2C9M] в качестве единственного компонента в предымпульсном растворе (таблица S1), что также согласуется в условиях эксперимента с избытком Ca ²⁺ для насыщения сайтов связывания.Следовательно, разностные профили XSS были получены путем вычитания рассчитанного рассеяния из связанного с Ca ²⁺ состояния E1 (PDB ID: 2C9M) из профилей рассеяния, рассчитанных для каждого из состояний цикла реакции SERCA: [Ca ₂] E1ATP ( PDB ID: 3N8G), [Ca ₂] E1P-ADP (PDB ID: 1T5T), [Ca ₂] E1P: ADP (PDB ID: 3BA6), E2P (PDB ID: 3B9B), E2-P ( ID PDB: 3N5K), E2: Pi (ID PDB: 3FGO) и E2 (ID PDB: 3NAL).

Рассчитанные разностные профили для кристаллических структур с E1-состоянием были почти идентичными, что отражает их структурное сходство после формирования компактного расположения цитоплазматических доменов, в то время как соответствующие расчетные разностные профили для кристаллических структур E2 показали большее разнообразие (рис.3, А и Б). Чтобы количественно оценить соответствие между рассчитанными и экспериментальными разностными профилями XSS, мы вычислили R-фактор, который аналогичен стандартному R-фактору в кристаллографии белков (уравнение 6; см. Материалы и методы). Масштабный коэффициент использовался для приведения экспериментальных показаний к тому же масштабу, что и рассчитанные разностные профили рассеяния. Отражая большую величину спектра позднего базиса, этот масштабный фактор был в ~ 6.5 раз больше для спектра со промежуточным базисом. Поскольку этот масштабный фактор возникает не только из-за различий в структурных изменениях, но и из-за позднего состояния, включая задержки во времени, превышающие один цикл реакции, и, следовательно, большее количество белковых молекул в ограничивающей скорость конформации, сравнивались базовые спектры промежуточного и позднего состояний. отдельно к рассчитанным разностным профилям.Нормальные тепловые флуктуации белка SERCA, смоделированные при 294 К, привели к коэффициенту R 0,1 (см. «Материалы и методы»), который можно рассматривать как минимально возможное значение или идеально подходит для экспериментальных данных.

Рис. 3 Структурное уточнение спектров промежуточного и позднего базиса.

Сравнение промежуточных спектров TR-XSS ( A ) и позднего базиса ( B ) с разностными профилями рассеяния, полученными вычитанием рассчитанного рассеяния кристаллической структуры [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M) из каждого из рассматриваемые кристаллические структуры состояний E1 (идентификаторы PDB: 3N8G, 1T5T и 3BA6) и E2 (идентификаторы PDB: 3B9B, 3N5K, 3FGO и 3NAL).Смоделированная динамика перехода от кристаллической структуры [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M) в целевое состояние ( C ) [Ca ₂] E1ATP (PDB ID: 3N8G) или целевое состояние ( D ) ) E2-P (идентификатор PDB: 3N5K). На графике показаны RMSD (красный) для каждой целевой структуры и соответствующий R-фактор (черный) по отношению к (C) промежуточному и (D) позднему базисному спектрам. Кадры моделирования, соответствующие самым низким R-факторам, обведены (красным). Улучшения в лучшей посадке для промежуточного звена ( E ) (с 6.5-кратный масштабный коэффициент по отношению к спектру позднего базиса) и спектры позднего базиса ( F ) показаны для профилей разности, рассчитанных на основе кристаллических структур (черный), моделирования переходов (красный) и моделирования мембраны (пурпурный).

Сравнение позднего состояния с профилями разности кристаллической структуры дало неудовлетворительный R-фактор ~ 0,9 (таблица S2). Промежуточное состояние, однако, привело к снижению R-фактора на ~ 0,2, что позволяет предположить, что расположение доменов в промежуточном состоянии больше напоминает наблюдаемое в кристаллографии, в то время как домены в позднем состоянии объединены в пока еще ненаблюдаемом расположении. .Особенности в спектре TR-XSS поздних состояний, не наблюдаемые в кристаллических структурах, включали выраженный сдвиг пика на q на 0,08 Å ⁻¹ и его относительный размер по сравнению с остальными особенностями, а также особенность на q <0,05 Å ^-1 (рис. 3Б).

Моделирование динамики переходов

Чтобы выяснить, можно ли объяснить переходные промежуточные соединения TR-XSS структурной динамикой за пределами кристаллических решеток, мы сначала смоделировали динамику перехода между кристаллическими структурами с помощью целевого моделирования молекулярной динамики (МД) без липидов.Белковые структуры извлекались по траекториям, начиная от состояния [Ca ₂] E1, представленного кристаллической структурой 2C9M, до каждого из семи исследованных промежуточных соединений кристаллической структуры (рис. S1, F и G). Смоделированные переходные структуры к кристаллическим структурам E1 показали снижение R-фактора с ~ 0,7 до ~ 0,5 по сравнению с промежуточным базисным спектром со среднеквадратичным отклонением (RMSD) <5 Å в сторону целевых структур (рис. 3C и рис. S2). Сравнение переходов E1 с базисным спектром поздних состояний дало более высокие R-факторы, с лучшими R-факторами, возникающими при RMSD переходов> 15 Å.Мы пришли к выводу, что промежуточное состояние, но не позднее состояние, можно объяснить закрывающим движением цитоплазматических доменов, что является первым крупным структурным переходом, ожидаемым после фотолиза заключенного в клетку АТФ для связывания SERCA. Отраженные структурным сходством состояний E1, три рассматриваемых структуры E1 дали почти одинаковые оценки R-фактора (таблица S2). Поскольку состояние [Ca ₂] E1ATP встречается первым в реакционном цикле SERCA, мы рассматриваем структуру, дающую самый низкий R-фактор в этом переходе, как кандидата на дальнейшее структурное уточнение промежуточного состояния (обведено на рис.3С). Согласие между полученными спектрами TR-XSS улучшилось за счет уменьшения положительного признака на 0,08 Å ⁻¹ по сравнению с отрицательным признаком при 0,15 Å ⁻¹, что привело к снижению R-фактора с 0,73 до 0,51 (рис. 3Е). Разложение динамики реакционного цикла на последовательные этапы с использованием известных кристаллических структур приводит к пикам при 0,07 и 0,14 Å ^-1 при переходе от состояния [Ca ₂] E1 к состоянию [Ca ₂] E1ATP, что указывает на то, что эти особенности представляют собой закрытие цитоплазматических доменов при связывании АТФ (рис.S3B).

Базовый спектр поздних состояний лучше согласуется с переходами E2, где E2P (PDB ID: 3B9B, комплекс BeF ₃, имитирующий фосфорилирование) и E2-P (PDB ID: 3N5K, комплекс AlF ₄, имитирующий дефосфорилирование) состояния привели к более низким R-факторам по сравнению с последующими состояниями E2: P _i (PDB ID: 3FGO, комплекс MgF ₄ ^2-) и E2 (PDB ID: 3NAL, стабилизированный аналогом тапсигаргина) (рис. . 3D и рис. S4). Минимальные R-факторы обоих переходов E2P и E2-P происходят из белковых структур в середине перехода к структурам-мишеням (RMSD> 7 Å).Основные улучшения были связаны с особенностью q <0,05 Å ⁻¹, которая не присутствовала ни в одном из профилей разности, рассчитанных по кристаллическим структурам с использованием структуры [Ca ₂] E1 в качестве общего предымпульсного состояния (рис. 3F). Однако сравнение с вкладом рассеяния рентгеновских лучей кристаллическими структурами на отдельных стадиях цикла реакции показывает, что переход в состояние E2P, а также событие дефосфорилирования связаны с особенностями при q <0.05 Å ⁻¹ (рис. S3B). Следовательно, позднее состояние может быть лучше всего объяснено ранее неуловимым расположением доменов, захваченным при переходе между состояниями E1 и E2.

Моделирование естественного окружения и локализации домена в предымпульсе [Ca

₂] E1 состоянии

Поскольку функциональность SERCA зависит от липидной среды ( 36 ), мы вставили наиболее подходящие структуры переходного белка, соответствующие промежуточному и поздние состояния, а также кристаллическую структуру [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M), представляющую предымпульсное состояние, в мембраны, которые моделировались в соответствии с содержанием липидов в мембране SR ( 10 ).В неограниченном МД-моделировании три структуры SERCA отобрали конформационную динамику, ограниченную исключительно наличием мембраны. По каждой траектории было извлечено 200 смоделированных структур. Пары промежуточных / предымпульсных и поздних / предымпульсных структур, которые лучше всего согласовывались с соответствующими экспериментальными данными, были идентифицированы из матриц корреляции R-факторов, полученных из 40000 разностных профилей рассеяния, сгенерированных вычитанием интенсивностей рассеяния смоделированных предымпульсных структур из полученных из промежуточных и поздних -государственное моделирование.Локальные минимумы R-фактора на разных участках траекторий моделирования соответствовали аналогичным конструктивным решениям, что демонстрирует надежность уточняющего подхода (рис. S5). Учет рассеяния от окружающего растворителя и липидов не изменил распределение R-фактора между траекториями (рис. S6, от A до C). Структурные пары, приводящие к самым низким R-факторам, были одинаковыми вне зависимости от того, было ли включено мембранное рассеяние, что, возможно, можно объяснить большими конформационными изменениями в выступающих растворимых доменах белка SERCA, доминирующими в разностном рассеянии по сравнению со структурными изменениями в мембране. .

Разностные спектры смоделированных промежуточных и поздних состояний показали лучшее согласие с данными с временным разрешением при вычитании смоделированных структур [Ca ₂] E1 по сравнению с кристаллической структурой 2C9M (рис. 3, E и F, и таблица S2). Следовательно, основная совокупность структур в предымпульсном состоянии в растворе недостаточно хорошо представлена кристаллической структурой 2C9M. Структуры из моделирования 2C9M, которые привели к самому низкому R-фактору для промежуточного и позднего TR-XSS состояний, были в целом похожими (RMSD основной цепи 5 Å) и показали относительно незначительные перестройки доменов M и P (рис.4, рис. S5, D и E и таблица S3). Однако положения домена A и, в частности, домена N были смещены по сравнению с кристаллической структурой. Эта перегруппировка привела к более компактному расположению доменов A и N с изменением расстояния от 45 до 29 Å между Thr ¹⁷¹ (домен A) и Lys ⁵¹⁵ (домен N).

Рис.4 Уточненные TR-XSS модели предымпульса, промежуточного и позднего состояний (домены N, A, P и M, окрашенные, как на рис.1) показаны с ближайшими соответствующими кристаллическими структурами (белые) и временами нарастания образования из кинетического анализа.

Все белковые структуры были наложены на спирали M7 – M10.

Структурная интерпретация моделей TR-XSS промежуточного и позднего состояния

Уточнение моделей TR-XSS промежуточного и позднего состояния на основе МД привело к значительному снижению R-факторов до 0,48 и 0,30 соответственно , а полученные структуры являются представлениями белка SERCA в нативной среде в реальном времени (рис.3 и таблица S2). Промежуточное состояние 1,5 мс показало ограниченные перестройки доменов P (RMSD, 5,8 ± 0,7 Å) и M (RMSD, 5,7 ± 0,1 Å) по сравнению с кристаллической структурой [Ca ₂] E1ATP (PDB ID: 3N8G). (Рис. 4 и таблица S3). Однако ориентация, в частности, A-домена (RMSD, 11 ± 0,8 Å), а также N-домена (RMSD, 6,9 ± 3 Å) отличалась по сравнению с кристаллической структурой, что можно объяснить присущей им гибкостью при переходе. в следующие состояния. Следовательно, промежуточная модель TR-XSS с индексом 1.Время нарастания 5 мс представляет собой раннее состояние E1, связанное с Ca ²⁺, когда цитоплазматические домены замыкаются вокруг субстрата АТФ с немного другой ориентацией доменов A и N по сравнению с кристаллическими структурами.

Уточнение 13-мс позднего состояния привело к структуре, в которой домен A не соответствовал кристаллической структуре состояний E1 / E1P или E2P / E2, тогда как домен N лучше согласовывался с ориентацией E1 (рис. 4 и таблица S3). Домены P и M не показали явных тенденций к обоим состояниям.Таким образом, позднее состояние захватило SERCA после частичного перемещения домена A в положение E2P, но до любого существенного перемещения домена N. Таким образом, доменные перестройки в позднем состоянии были значительно более выраженными по сравнению с таковыми в промежуточном состоянии, что вносит вклад в наблюдаемую разницу величин соответствующих базисных спектров (рис. 2D). Для структурного сравнения кристаллические структуры, наиболее точно представляющие эту часть реакционного цикла SERCA, [Ca ₂] E1P: ADP (PDB ID: 3BA6) и E2P (PDB ID: 3B9B), были наложены на TR в позднем состоянии. -XSS модель.Домен A в модели TR-XSS был расположен на вращающейся оси между кристаллическими структурами [Ca ₂] E1P: ADP и E2P (рис. 5A). Сайт связывания нуклеотидов в цитоплазматических доменах открыт в кристаллической структуре E2P, в то время как он закрыт в состоянии [Ca ₂] E1P: ADP ( 37 ) (рис. 5B). Однако сайт связывания ADP оказывается экспонированным уже в модели TR-XSS позднего состояния (рис. 5C). По сравнению со структурой [Ca ₂] E1P: ADP модель TR-XSS показала структурный сдвиг фосфорилированного Asp ³⁵¹ и, таким образом, уменьшение расстояния до мотива Thr-Gly-Glu-Ser (TGES). от 28 до 18 Å, что примерно на полпути к положению E2P-состояния (рис.5D). Спирали TM1-TM3 были несколько смещены в сторону соответствующих положений E2P, но с кальций-координирующими остатками в конфигурации [Ca ₂] E1P-ADP и доменом M, полностью закрытым с обеих сторон мембраны (рис. 5E). Следовательно, модель TR-XSS позднего состояния, вероятно, представляет собой промежуточное состояние перехода [Ca ₂] E1P: ADP в E2P, который, как мы предполагаем, является ADP-чувствительным, окклюзированным кальцием [Ca ₂] E1P. состояние (рис. 6).

Инжир.5 Динамика в реальном времени по сравнению с известными структурными перестройками.

( A ) Структурные различия в домене A между поздней моделью TR-XSS (желтый), [Ca ₂] E1: ADP (ID PDB: 3BA6; синий) и E2P (ID PDB: 3B9B; пурпурный) состояния. Домен N окрашен в красный цвет. ( B ) Кристаллическая структура [Ca ₂] E1: ADP (PDB ID: 3BA6) отображает закрытый интерфейс AN, в то время как в модели TR-XSS позднего состояния в ( C ) A домен (желтый) переместился относительно домена N (красный), открыв карман для связывания ADP (обведен кружком).Усеченная остальная часть АТФазы показана серым цветом. ( D ) Мотив TGES и динамика Asp351 в [Ca ₂] E1: ADP (ID PDB: 3BA6; голубой) и E2P (ID PDB: 3B9B; розовый) (вверху) и [Ca ₂] E1 : ADP (PDB ID: 3BA6; голубой) и позднее состояние TR-XSS (пурпурный) (внизу). ( E ) Спирали TM1-TM3 и домены A из [Ca ₂] E1: ADP (PDB ID: 3BA6), E2P (PDBID: 3B9B) и позднее состояние с цветовой кодировкой, как в (A), и ионное связывающие остатки из позднего состояния. Усеченный остаток белка показан как прозрачная поверхность.

Рис. 6 Схематическое сравнение основных структурных перестроек между кристаллическими структурами и моделями TR-XSS.

В предымпульсном состоянии показано уменьшенное открытие цитоплазматических доменов, промежуточная модель TR-XSS подобна состоянию [Ca ₂] E1ATP, а смещение домена A в поздней модели TR-XSS обнажает сайт ADP, но с доменом N еще не в позиции E2. Цветовая кодировка белков такая же, как на рис.1, АТФ и АДФ отображаются в виде четырех и трех фиолетовых пятиугольников, мотив TGES представлен зеленым прямоугольником, фосфорилированная аспарагиновая кислота окрашена в желтый цвет, а ионы кальция изображены в виде зеленых кружков. .

ОБСУЖДЕНИЕ

Мембранные белки, осуществляющие активный транспорт через липидные бислои, имеют решающее значение для широкого спектра клеточных процессов, таких как генерация ионных градиентов. Поскольку мембранные переносчики обычно очень динамичны и демонстрируют функциональную зависимость от окружающей мембраны, усилия по выявлению лежащих в основе молекулярных принципов функционирования и заболевания в идеале должны отслеживать транспортную реакцию в липидной среде при комнатной температуре в режиме реального времени.Учитывая сложность липидной среды и масштаб времени от микромиллисекунд, в котором работают мембранные транспортеры, получение прямых структурных данных представляет собой большую проблему и еще не стандартизировано. Методология TR-XSS, используемая в этой работе, регистрирует структурные отпечатки пальцев в режиме реального времени, что в сочетании с подходящими подходами к структурному уточнению может предоставить структурные данные временных промежуточных соединений, участвующих, например, в мембранном транспорте, наряду с их кинетикой. Структурное уточнение основывается на наличии структурных данных с высоким разрешением, и поэтому методологию TR-XSS следует рассматривать как дополнительный метод в структурной биологии, который очень своевременен, поскольку он использует, например, следующие.g., последние разработки в области криогенной электронной микроскопии (крио-ЭМ).

В этой работе мы отслеживали динамику транспорта в белке SERCA после лазерно-индуцированного доступа к АТФ. Временная эволюция разностных сигналов, извлеченные константы скорости, связанные с переходным промежуточным состоянием, и накопление ограничивающего скорость состояния согласуются с наблюдаемыми скоростями фосфорилирования и оборота ферментов ( 32 ). В процедуре структурного уточнения нам нужно было смоделировать предымпульсное состояние для получения разностных данных.Выбранные экспериментальные условия с избытком Ca ²⁺ для насыщения сайтов связывания ионов SERCA, но без доступного АТФ, должны лучше всего описываться состоянием E1, связанным с Ca ²⁺. Однако структурные особенности состояния [Ca ₂] E1 обсуждаются. Кристаллические структуры формы [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M или 1SU4) принимают открытую конформацию цитоплазматических доменов ( 38 ), что резко контрастирует с более компактными структурами, обнаруженными в структурах других состояний SERCA. .Более того, обширные структурные перестройки, необходимые для перехода от открытого к компактному расположению растворимых доменов, не согласуются с резонансным переносом энергии Фёрстера, который не показал значительных изменений расстояния между доменами N и P в состояниях E1 и E2 ( 12 ). Модель предымпульсного состояния TR-XSS состояния [Ca ₂] E1, представленная здесь, показала заметное уменьшение междоменного расстояния N-A по сравнению с кристаллическими структурами [Ca ₂] E1 (рис.4), что указывает на преимущественно компактную конформацию цитоплазматических доменов (см. Схему на рис. 6). Однако, хотя большая часть структурного ансамбля демонстрирует замкнутое расположение цитоплазматических доменов, вполне вероятно, что также отбираются пробы более открытых конформаций, хотя и реже ( 11 ).

Вариации экспериментальных условий определяют, какое состояние SERCA накапливается в установившемся состоянии. Например, наблюдалось, что состояние [Ca ₂] E1P доминирует в присутствии KCl и высокой концентрации Ca ²⁺ ( 39 — 41 ).Кроме того, с помощью микроскопии с резонансным переносом энергии флуоресценции одиночных молекул (FRET) было показано, что АТФаза Ca ²⁺ из Listeria monocytogenes в условиях насыщения Ca ²⁺ демонстрирует лимитирующую стадию фосфорилирования и использует короткую -живой интермедиат с окклюзией кальция, который предшествует необратимой стадии, связанной с высвобождением ионов Ca ²⁺ ( 16 ). При аналогичных условиях насыщения Ca ²⁺ мы получаем прямую структурную информацию о состоянии, в котором несмещенное моделирование предполагает положение домена A, который находится между кристаллическими структурами [Ca ₂] E1P-ADP и E2P. состояний, но с доменами N и P все еще в ориентации E1.В состоянии E2P мотив TGES в домене A реструктурирован, чтобы защитить фосфорилированный Asp ³⁵¹ от цитоплазмы, что делает белок SERCA нечувствительным к возможным обратным реакциям, индуцированным ADP. В поздней конформации TR-XSS мотив TGES в домене A начал приближаться к фосфорилированному Asp ³⁵¹ (рис. 5D), и сайт связывания АДФ экспонируется в цитоплазме и, следовательно, примирован для АДФ. релиз. Таким образом, уточненное состояние позднего TR-XSS (с временем нарастания 13 мс) может представлять неуловимое ADP-чувствительное состояние [Ca ₂] E1P SERCA, которое после связывания ADP может преобразовывать ATP из [Ca ₂] E1P ( схему на рис.6). Триггер, высвобождающий наблюдаемую динамику, очень вероятно, завершение фосфорилирования, которое, в сущности, нарушает напряженную конфигурацию цитоплазматических доменов. Одномолекулярные FRET исследования Listeria Ca ²⁺ -АТФазы показывают, что белок претерпевает очень быстрые, крупномасштабные конформационные изменения после того, как произошло фосфорилирование ( 16 ).

Возникающее мнение о том, что липиды являются аллостерическими модуляторами функции мембранных белков ( 42 ), требует усилий в области структурной биологии для мониторинга структуры и динамики белков в естественной среде.Эти исследования часто затруднены из-за неоднородности белков в нативных мембранах. Мембрана SR представляет собой исключение, поскольку она содержит> 90% белков SERCA ( 19 ), что позволяет проводить структурные исследования в естественной среде. Однако учет вкладов окружающей липидной динамики в эксперименты TR-XSS чрезвычайно сложен, и в настоящее время не существует стандартизированных методов ( 8 , 27 , 28 ). Поскольку цитоплазматические домены SERCA существенно выступают из мембраны и обнаруживают сильно доминирующие конформационные изменения, было обнаружено, что вклад окружающих липидов незначителен.Чтобы подготовить почву для характеристики менее выраженных структурных изменений белков, лишенных выступающих подвижных частей, необходимо разработать стратегии, позволяющие учитывать влияние рассеяния от окружающих липидов.

Наконец, с технической точки зрения, измерения TR-XSS фотоактивных химикатов ( 21 ), светочувствительных белков ( 8 , 23 — 28 ) и димеризации белков ( 22 ) проложили путь к успеху. способ для данных, представленных в этом исследовании.Используя лазерно-индуцированную активацию заключенного в клетку соединения для запуска транспортной реакции, наши опытно-конструкторские работы позволили расширить метод TR-XSS, включив в него мембранные белки, которые по своей природе не чувствительны к световой активации, что резко увеличивает количество потенциальных биологических мишеней, поддающихся воздействию. метод TR-XSS. Кроме того, ожидаемая повышенная яркость, например, в синхротронах Европейского центра синхротронного излучения (ESRF) -Extremely Brilliant Source (EBS) (Гренобль, Франция) и лаборатории MAX IV (Лунд, Швеция) будет способствовать дальнейшему улучшению отношения сигнал-шум в TR-XSS эксперименты, что упрощает обнаружение и определение характеристик переходных промежуточных продуктов в ранее недоступных временных режимах.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Саркоплазматический ретикулум Ca

²⁺ Препарат АТФазы Р-типа

Мембраны SR из быстро сокращающихся скелетных мышц кролика получали согласно ( 43 ) и суспендировали в буфере, содержащем 150 мМ MOPS KOH (pH 7.0), 150 мМ KCl и 75 мкМ CaCl ₂ с последующим центрифугированием при 140000 g в течение 40 мин с последующим ресуспендированием в том же буфере с добавлением 5 мМ MgCl ₂, 10 мМ дитиотриетола и 10 мМ АТФ в клетке нитрофениэтилового эфира (NPE) (конечные концентрации) при конечной концентрации 25 мг / мл мембран SR.Чтобы избежать нарушения естественной среды, мы воздержались от детергентной экстракции белка SERCA и, следовательно, сохранили чистоту природного белка 90% ( 19 ).

Сбор данных TR-XSS

Эксперименты TR-XSS проводились на выделенном канале с временным разрешением ID09 в ESRF в Гренобле, Франция ( 44 ). Поскольку высвобождение АТФ является необратимой реакцией, очищенные и концентрированные мембраны SR, содержащие SERCA, прокачивались с постоянной скоростью потока 3 мкл / мин через кварцевый капилляр размером 300 мкм (Hampton Research), тем самым пополняя образец для каждого цикла «насос-зонд». .АТФ с клетками NPE в образце фотолизовали наносекундным лазером Ekspla NT342B на длине волны 355 нм. Лазерный луч фокусировался в месте расположения образца в эллиптическое пятно размером 1 мм на 0,25 мм с плотностью энергии 1 мДж / мм ². Лазер попал в капилляр со стороны, длинной осью, параллельной направлению падающего рентгеновского луча (60 мкм на 100 мкм). Рентгеновский луч, генерируемый ондулятором в вакууме, имел ширину полосы по энергии Δ E / E = 3% и пиковую энергию 17,5 кэВ. Расстояние между образцом и детектором составляло 400 мм, а коническая камера, заполненная гелием, помещалась между образцом и детектором для уменьшения фонового рассеяния от воздуха.Импульсы рентгеновского излучения длительностью 20 мкс выделялись от синхротрона в многосгустковом режиме с помощью высокоскоростного вращающегося прерывателя. Температура в экспериментальной клетке составляла 294 К.

Каждый эксперимент генерировал данные с определенной временной задержкой между лазерной вспышкой и рентгеновским импульсом. Удовлетворительное отношение сигнал / шум было достигнуто после измерения в каждую временную точку ~ 1000 раз. Чтобы избежать экспериментального отклонения в измерениях, временные задержки регистрировались в заранее определенном порядке и перемежались с отрицательной временной задержкой после трех временных задержек: -50 мкс, 20 мкс, 10 мс, 100 мс, -50 мкс, 5 мс, 1 мс. , 20 мс, −50 мкс, 50 мс, 2 мс и 200 мс.Следовательно, результирующий временной ряд составил 20 мс, 1 мс, 2 мс, 5 мс, 10 мс, 20 мс, 50 мс, 100 мс и 200 мс. Интенсивность рассеянного рентгеновского излучения регистрировалась на камере устройства с зарядовой связью (ПЗС) с использованием импульсов рентгеновского излучения длительностью 20 мкс, и перед каждым считыванием детектора накапливалось 40 импульсов. Временной ряд был повторен 27 раз, и разностные профили рассеяния, следовательно, являются средними из 1080 измерений, для которых потребовалось всего 20 мг мембран SR. Эксперименты проводились с частотой повторения 1 Гц, что обеспечивало полное пополнение образца в промежутках между циклами.Поскольку полученные данные TR-XSS также содержат реакцию растворителя на нагревание ( 45 ), эти эффекты были устранены в соответствии с предыдущим протоколом ( 23 ) (рис. S1C). Контрольные эксперименты с буфером или клеточным АТФ в буфере не показали явной разницы в интенсивностях при 10 и 200 мс (рис. S6, D и E).

Обработка данных

Записанные изображения XSS были интегрированы по азимуту для получения радиальных кривых интенсивности S ( q , ∆ t ) как функции величины вектора рассеяния q = 4πsinθ / λ, где 2θ — угол отклонения, λ — длина волны рентгеновского излучения, а ∆ t — временная задержка между фотоактивирующим лазерным импульсом и рентгеновским зондирующим импульсом.Для получения разностных спектров «темные» эталоны -50 мкс были вычтены из каждого спектра после нормализации в области q от 2,0 до 2,1 Å ^-1, где ожидаются минимальные различия. Данные о разнице, которые разошлись более чем в 3,5 раза по сравнению со стандартным отклонением для данной временной задержки, рассматривались как выбросы и исключались из дальнейшего анализа. В результате сохранялось не менее 85% данных для каждой временной точки. Следовательно, полученные разностные кривые рассеяния содержат только сигналы структурных перестроек в образце.

Анализ SVD

Набор данных TR-XSS был организован в матрицу размером м × n , содержащую разностные интенсивности рассеяния, записанные в 799 ( м ) q значениях и 9 ( n ) временных точках и разложенные используя SVD в соответствии со следующим уравнением: ∆S (q, ∆t) = U (q) SvV (∆t) T (1)

Здесь U ( q ) — это м × м матрица, содержащая ортонормированные базисные спектры набора данных ∆ S . S _v — это диагональная матрица м × n , указывающая вклады базисных спектров (сингулярные значения), а V (∆ t ) — матрица n × n , описывающая изменение во времени базисных спектров. Исходя из этого, были определены основные компоненты, содержащие сигнал в наборе данных. В соответствии с полученными результатами SVD, которые показали один доминирующий компонент (рис. S1, D и E), амплитуды пиков в позднем базисном спектре были значительно больше по сравнению с ранним и промежуточным спектрами.

Спектральное разложение

Чтобы охарактеризовать переходные промежуточные соединения с течением времени, для описания разностных спектров TR-XSS использовались кинетические модели с увеличивающимся числом состояний. Данные разностного рассеяния SERCA от 0 до 2,35 Å ⁻¹ были спектрально разложены в соответствии с последовательными кинетическими моделями Раннее → k1 Позднее → k1 Промежуточное → k2 Позднее, где константы скорости соответствуют образованию переходных состояний. Кинетические модели предполагают необратимые шаги и то, что ранние состояния формируются одновременно с лазерным импульсом.Для получения не зависящих от времени базисных спектров и констант скорости, связанных с образованием переходных структурных промежуточных состояний, мы выполнили спектральную декомпозицию с глобальной подгонкой к данным разностного рассеяния SERCA S ( q , ∆ t ) в соответствии с ∆S (q, ∆t) теория = Ured (q) C (∆t) (2) где U _{красный} ( q ) — матрица размером м × k , содержащая первые k компонентов, а C (∆ t ) представляет собой матрицу k × n с кинетическими профилями для различных переходов k .Последний задается интегральными уравнениями скорости [ранний] = e − k1t (3) [средний] = k1k2 − k1 (e − k1t − e − k2t) (4) [поздно] = 1 + [(k1 * e− k2t) — (k2 * e − k1t)] / (k2 − k1) (5)

Константы скорости были оптимизированы глобальным уточнением методом наименьших квадратов между экспериментальными и восстановленными данными. Чтобы оценить соответствие экспериментальным данным, линейные комбинации полученных базисных спектров и соответствующих плотностей населенностей были подогнаны к экспериментальным разностным данным. Модель с тремя состояниями привела к лучшему глобальному методу наименьших квадратов ( S = 1.9 × 10 ⁻⁶; Рис. 2A) по сравнению с модельным переходом между двумя состояниями ( S = 2,9 × 10 ⁻⁶) или распадом одного состояния ( S = 1,2 × 10 ⁻⁵). Полученные базовые спектры были подвергнуты 10-точечному сглаживанию, что позволило избежать экспериментального шума.

Структурное уточнение

Кривые разностного рассеяния рассчитывали с использованием программного обеспечения CRYSOL ( 46 ). Профили разности с поправкой на атомы и растворитель показали очень похожие характеристики, но с поправкой на растворитель, приводящей к несколько худшим R-факторам, что, вероятно, зависит от того, что везикулы интактных мембран SR плохо моделируются при допущении водного окружения.Поэтому, чтобы избежать введения дополнительного подгоночного параметра и возможного переобучения экспериментальных данных, мы использовали атомное рассеяние для сравнений, которые не включали модель мембраны. Кристаллическая структура SERCA, соответствующая состоянию [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M), представляет собой «основное» состояние начального предымпульса. В качестве представителей основных промежуточных состояний SERCA были выбраны восемь кристаллических структур. Все структуры были модифицированы, чтобы они содержали только белок и такое же количество аминокислотных остатков.Полученные расчетные разностные профили рассеяния были скорректированы с учетом использования полихроматического излучения путем свертки с измеренным спектром ондулятора. R-фактор был определен для измерения соответствия между разностными кривыми XSS, предсказанными на основе структурных моделей, и экспериментальными данными разностного рассеяния в диапазоне 0 < q <0,6 Å ^-1 R = Σ (∆Stheory − c * ∆Sexperiment ) 2∑ (c * ∆Sexperiment) 2 (6)

Здесь ∆ S ^{эксперимент} представляет собой разностный базисный спектр XSS из спектрального разложения экспериментальных данных, ∆ S ^теория представляет рассчитанную разницу Кривая XSS для данной структурной модели, а c — это масштабный коэффициент, который можно изменять, чтобы можно было сравнивать показания детектора и вычисления CRYSOL.Чтобы измерить тепловую динамику белка при комнатной температуре (то есть минимальном R-факторе), целевые спектры разности были получены из первого и последнего кадров в моделировании целевой молекулярной динамики (TMD). R-фактор 0,1 был рассчитан на основе динамики, отображаемой после полного перехода, то есть, когда белок смещен в сторону целевой структуры и, следовательно, исследует динамику, не переходя в другое состояние.

Целевое моделирование MD

Кристаллическая структура, соответствующая состоянию [Ca ₂] E1 (PDB ID: 2C9M), была центрирована в блоке моделирования с размерами 200 Å на 200 Å на 200 Å и сольватирована водами TIP3P с использованием CHARMM -GUI ( 47 ) и расслаблен в минимизации энергии наискорейшего спуска с 5000 шагов в GROMACS 5.1.4 ( 48 ), за которым следует короткое уравновешивание постоянного числа (N), объема (V) и температуры (T) (NVT) за 25 пс с временным шагом 1 фс при температуре 303,15 K, поддерживаемой Схема температурной связи Носа-Гувера ( 49 , 50 ). Параметры силового поля описывались аддитивным силовым полем для белков CHARMM36 ( 51 ). В семи целевых МД-моделированиях состояние [Ca ₂] E1 приводилось к каждому из следующих состояний (и кристаллических структур): [Ca ₂] E1ATP (PDB ID: 3N8G), [Ca ₂] E1P -ADP (ID PDB: 1T5T), [Ca ₂] E1P: ADP (ID PDB: 3BA6), E2P (ID PDB: 3B9B), E2-P (ID PDB: 3N5K), E2: Pi (ID PDB: 3FGO) и E2 (идентификатор PDB: 3NAL).В симуляциях TMD использовалась коллективная переменная RMSD из плагина для молекулярной динамики (PLUMED) ( 52 ). Для траекторий 10 нс использовалась муфта давления Парринелло-Рахмана ( 53 , 54 ) и термостат Носа-Гувера ( 49 , 50 ). Координаты белков извлекались каждые 100 пс, что давало 100 структур на траекторию и состояние TMD. Рассчитанное рассеяние из состояния [Ca ₂] E1 затем вычиталось из каждого из полученных из 100 белковых структур, равномерно распределенных по траекториям перехода, чтобы получить 100 разностных профилей рассеяния.

Мембранные моделирование MD

Мембрана SR, содержащая 366 димиристоиламинодезоксифосфатидилхолина (DDPC), 138 пальмитоилолеилфосфотидилэтаноламин (POPE), 48 фосфатидилсерин (POPS), была создана с использованием 30 фосфатидилсерин (POPS) и PIMPI-фосфил-фосфил-фосфид (30) спитосилодилолеоида (30 spitoshodyloleoin). Конструктор мембран ( 55 ) в CHARMM-GUI ( 47 ). Белковые структуры SERCA были вставлены в модель мембраны SR в соответствии с базой данных Orientations of Protein in Membranes ( 56 ).Параметры силового поля описывались дополнительным силовым полем CHARMM36 для белка ( 51 ) и липидов ( 57 ). Энергия каждой системы моделирования была минимизирована с помощью метода наискорейшего спуска с 5000 шагами, с последующим постепенным уменьшением ограничений на тяжелые атомы белков и липидов для трех последовательных 25-пс моделирования NVT. В этих симуляциях использовался временной шаг 1 фс, а температура 303,15 К поддерживалась с использованием схемы температурной связи Берендсена ( 58 ).За этим последовали три последовательных моделирования NPT длительностью 100 пс с дальнейшим постепенным снятием ограничений, связанных с тяжелыми атомами. В последнем моделировании за 100 пс липиды полностью не удерживались, и им позволяли расслабиться вокруг удерживаемого белка. В этом моделировании использовался временной шаг 2 фс, а давление поддерживалось постоянным на уровне одного бара с использованием полуизотропного баростата давления Берендсена ( 58 ).

Конформации белка, используемые в процедуре структурного уточнения, затем были получены в ходе неограниченного моделирования продолжительностью 300 нс, по одной для каждого состояния.В этих моделированиях использовался временной шаг 2 фс, а температура поддерживалась на уровне 303,15 К с помощью термостата Носа-Гувера ( 49 , 50 ) и полуизотропного баростата Парринелло-Рахмана ( 53 , 54 ) использовался для регулирования давления. Набор из 200 белковых структур был извлечен из неограниченного моделирования 2C9M (предымпульсное состояние) и вычтен из каждой из структур, созданных из моделирования переходных моделей, соответствующих промежуточному и позднему состояниям, соответственно.Комбинация привела к получению 40 000 разностных профилей, которые сравнивались со спектрами промежуточного и позднего базиса.

Поскольку в динамике структуры транспорта SERCA доминируют большие конформационные изменения в растворимых доменах, выступающих из мембраны, влияние окружающих липидов на разностное рассеяние должно быть незначительным. Чтобы проверить, может ли включение перекрестных членов рассеяния на окружающие липиды и исключенный растворитель изменить структурную интерпретацию, мы смоделировали беспорядок из одного участка мембраны SR, рассчитав разностные профили рассеяния dS ( q ), включая 200-Å ² Дебая. -Фактор Валлера B, как описано ранее ( 27 , 59 ).

Статистический анализ

Для оценки ошибок при описании локализации цитоплазматических доменов мы выбрали 10 структур в предымпульсном, промежуточном и позднем состояниях из траекторий моделирования мембраны, которые получили наилучшие оценки с точки зрения R-фактора на экспериментальной промежуточной и поздней основе. спектры. R-факторы находились в пределах 0,05 от наилучшего соответствия. Среднеквадратичные значения RMSD доменов A, P, N и M были рассчитаны по отношению к типичным кристаллическим структурам [Ca ₂] E1, [Ca ₂] E1P: ADP, E2P и E2-P состояний. (Идентификаторы PDB: 2C9M, 3BA6, 3B9B и 3N5K).Средние и SD вычисленных RMSD домена для 10 пар приведены в таблице S3.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Дополнительные материалы к этой статье доступны по адресу http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/6/12/eaaz0981/DC1

Рис. S1. Анализ данных и целевой подход MD.

Рис. S2. Целевой MD состояний E1.

Рис. S3. Схема реакции и различия в последовательном рассеянии рентгеновских лучей.

Рис. S4. Целевой MD состояний E2.

Рис. S5. Анализ R-фактора моделирования мембран и предимпульсных моделей TR-XSS.

Рис. S6. Вклады рассеяния растворителя и мембраны и контрольные эксперименты TR-XSS.

Таблица S1. Создание разностного рассеяния с использованием линейных комбинаций рассчитанного рассеяния на кристаллических структурах предполагаемых предымпульсных состояний.

Таблица S2. Кристаллические структуры (и идентификаторы PDB), соответствующие основным переходным ферментативным состояниям в реакционном цикле SERCA, рассматриваемые при уточнении структуры.

Таблица S3. Структурное сходство (RMSD) между доменами.

Таблица S4. Список сокращений.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution, которая разрешает использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что в результате будет использовано , а не для коммерческих целей и при условии, что оригинальная работа правильно цитируется.

Благодарности: Финансирование: Эта работа была поддержана Stiftelsen Olle Engkvist Byggmästare (2015/768) Х.R., докторская стипендия IWT, предоставленная агентством Agentschap Innoveren & Ondernemen (VLAIO) AS, Lundbeck Foundation через центры BRAINSTRUC (R328-2019-546) и DANDRITE (R248-2016-2518) для PN, а также шведского исследовательского совета Стартовый грант (2016-03610), Грант на интеграцию карьеры Марии Кюри (FP7-MC-CIG-618558), Магнус Бергваллс Стифтельсе (2016-01593) и Оке Вибергс Стифтельсе (M16-0164) для MA. Расчеты были выполнены с использованием предоставленных ресурсов Шведской национальной инфраструктурой для вычислений (SNIC) через Центр высокопроизводительных вычислений Север (HPC2N) в рамках проекта SNIC 2018 / 2-32.A.D. был софинансирован Международной академией трансляционных исследований Уильяма Харви и получил финансирование от Седьмой рамочной программы Европейского Союза для исследований, технологических разработок и демонстрационной деятельности в соответствии с соглашением о гранте No. 608765. Вклад авторов: MA задумал и разработал исследование. H.R., M.N.P., M.E., A.S., C.L., A.D., M.L. и M.A. провели синхротронные эксперименты в ESRF при поддержке со стороны канала ID09, M.W.H.R. выполнила моделирование.H.R., M.N.P., A.B., P.N. и M.A. проанализировали данные. C.O. и П. предоставил образец. Все авторы внесли свой вклад в написание рукописи. Конкурирующие интересы: Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов. Доступность данных и материалов: Все данные, необходимые для оценки выводов в статье, представлены в документе и / или дополнительных материалах. Дополнительные данные, относящиеся к этой статье, могут быть запрошены у авторов.

Copyright © 2020 Авторы, некоторые права защищены; эксклюзивный лицензиат Американской ассоциации содействия развитию науки.Нет претензий к оригинальным работам правительства США. Распространяется по некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (CC BY-NC).

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Макромолекулярная кристаллография с временным разрешением на импульсных источниках рентгеновского излучения

Когда неоднозначность индексации устранена и парциальные интенсивности масштабируются и объединяются, интегральные интенсивности могут быть преобразованы в амплитуды стандартными методами [57]. Таким образом получаются эталонный набор данных F (ref) и набор данных с временным разрешением F (t).Крайне важно масштабировать разрешенные во времени амплитуды как можно точнее до темновых (эталонных) амплитуд. Программа «scaleit», доступная в составе пакета программ CCP4 [57], особенно полезна [4]. Затем определяются разностные амплитуды ΔF = F (t) -F (ref). Если параметры элементарной ячейки не изменяются, карты изоморфных разностей рассчитываются на основе ΔF и фаз из эталонной модели. Смещения атомов, вызванные структурными изменениями, идентифицируются парами положительных и отрицательных характеристик электронной плотности.Действительные отрицательные характеристики всегда находятся над атомами эталонной структуры. Химически значимые положительные особенности должны интерпретироваться с новой структурой. Найти эту (неизвестную) структуру может быть сложно, так как особенности положительной разности электронной плотности и отрицательные особенности имеют тенденцию сокращаться. Кроме того, переход популяции из состояния покоя в реакцию обычно невелик: порядка 5–20% [58]. Особенно, когда структурные изменения небольшие, пустота между элементами сбивает с толку, а атомы имеют тенденцию слишком сильно смещаться в сторону положительных черт.К счастью, существует способ создать обычную карту, на которой перенос населения экстраполируется до 100% [59]. Фактор N измеренной разницы, ΔF (obs), добавляется к расчетным структурным факторам, F (calc), определенным из модели эталонного состояния, чтобы получить экстраполированные структурные факторы, F (ext) = N · ΔF (obs) + F (calc), из которого можно рассчитать обычную карту. Когда в кристалле активирована большая часть молекул, N мало: порядка 2–5 [4]. Даже когда фракционная концентрация активированных молекул (FCM) мала, этот метод успешен.Но тогда N велико [60]. Результирующая экстраполированная карта зашумлена из-за ошибок, вызванных разностным приближением Фурье [61], и из-за экспериментального шума в (тогда) малых разностных амплитудах. N можно оценить (N _est) даже при низком FCM путем последующего добавления большего количества ΔF к факторам темной структуры и проверки полученной экстраполированной карты в положениях, где есть сильная отрицательная плотность разности на карте разности. Это удобно сделать, вырезав сферический объем из экстраполированной карты, расположенной в местах, которые демонстрируют сильную разницу электронной плотности.Отрицательная (экстраполированная) плотность, обнаруженная в сферическом объеме, суммируется ниже порогового значения [43,60], и результат (Ʃ _с) отображается как функция N. Соответствующий N _est находится в точке точка, в которой Ʃ _с начинает расходиться [62]. Могут быть найдены молекулярные модели (M _int), которые интерпретируют экстраполированную электронную плотность. M _int вписывается в экстраполированную карту путем уточнения реального пространства в соответствующей программе, такой как coot [63], и обычно уточняется относительно экстраполированных амплитуд.В случае высоких значений N _est, показатели качества (_{кристально} / R _{бесплатно}), полученные после уточнения, являются низкими. Тем не менее получается действительный M _int, который можно проверить по наблюдаемым данным разницы. Для этого рассчитываются структурные факторы, каждый из уточненных M _int и эталонной структуры. Из них получаются коэффициенты разностной структуры, из которых вычисляется расчетная карта разностей. Затем рассчитанную карту разностей можно сравнить с наблюдаемой картой разностей.Согласие между наблюдаемыми и рассчитанными картами разностей проверяется, например, с использованием соответствующего коэффициента корреляции, и может быть оптимизировано путем повторения анализа с немного изменяющимися факторами N _est и / или другими моделями. Как только лучший M _int найден, доступны фазы для ΔF [43,60] и могут быть определены поэтапные экстраполированные структурные факторы. Уточнение относительно фазированных экстраполированных амплитуд обычно приводит к приемлемым R-факторам [4,5,43,58,60].Однако качество M _int должно в первую очередь основываться на сходстве (корреляции) между рассчитанной картой различий и наблюдаемой картой различий. В идеале M _int объясняет все отличительные особенности, и даже ложные (положительные) значения электронной плотности интерпретируются правильно. Это тем более важно, когда FCM мала и, соответственно, большое значение N _est. Когда параметр элементарной ячейки существенно изменяется во время реакции, карты изоморфных разностей не могут быть рассчитаны.Затем необходимо рассчитать разностные карты «пропустить» с использованием данных, полученных только после инициирования реакции (см., Например, [64]). Для этого структурная модель с удаленной (опущенной) областью интереса уточняется по световым данным, предпочтительно с моделированием отжига, чтобы минимизировать фазовое смещение. Структурные факторы F (опустить) рассчитываются по модели. Затем рассчитывается карта пропущенных различий из амплитуд ΔF = F (t) -F (пропустить) и фаз из уточненной (опущенной) модели. При необходимости также могут быть вычислены экстраполированные структурные факторы F (ext), а также экстраполированные карты для руководства структурной интерпретацией: F (ext) = F (пропустить) + N · [F (t) -F (пропустить)].

Печатный индекс | Fretboard Journal

Наш постоянно растущий список историй, предметов и инструментов, представленных в печатном журнале the Fretboard Journal . Примечание. Большинство из них можно найти только в нашем печатном издании на память.

Темы:

’59 Les Pauls: Set You Free: Взрыв по швам с тайником Les Paul ’59, The Fretboard Journal: Выпуск 20, зима 2010, страницы 108-116

65 А: Низкий и смотрите: мощность — это еще не все при 65 А, The Fretboard Journal: Выпуск 20, зима 2010, страницы 100-107

Алан Мунде: Magic Note: десятилетия инноваций в банджо Алана Мунде, The Fretboard Journal : выпуск 37, 2016, страницы 92-99

Alex Glasser: Shake, Rattle and Roll: Алекс Глассер делает дань уважения укулеле к Aqua Teen Hunger Force , The Fretboard Journal: Выпуск 24, зима 2011, страницы 110-112

Элисон Браун: Инвестиции в звук: Как банджоистка Элисон Браун превратила призвание в карьеру, The Fretboard Journal : выпуск 15, осень 2009, страницы 64-81

Аль-Джардин: Открытка из Биг-Сура: дома с пляжными мальчиками Аль-Джардин, The Fretboard Journal : выпуск 30, лето 2013, страницы 92-105

Аллан Бердселл: Альтернативная вселенная: эксперименты футуристического мастера Аллана Бердселла, Журнал Гриф : Выпуск 18, лето 2010, страницы 34-45

Элвин Янгблад Харт: Признания партизана из гаража: открытие прелести рабочего класса «альтернативного оборудования», The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 6-13

Andy’s Music и Чикагская музыкальная биржа: Windy City Windfall: история двух магазинов в Чикаго, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 84-94

Энди Статман: Бруклин и за его пределами: музыкальное и духовное путешествие Энди Статмана, The Fretboard Journal: Выпуск 2, лето 2006 г., страницы 14-21

Энтони Пейн (Harvester Guitars): Работа в Италии: Энтони Пейн из Harvester Guitars, канализирующий самую эзотерическую электротехнику Европы, The Fretboard Journal: Issue 39, 2017, pages 20-33

Applegate Guitars: Звезды Севера: праздник гитарного сообщества Миннесоты, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 83-99

Art Rosenbaum: Обзоры: Hey Stranger: Art of Field Recording, Volume I: Пятьдесят лет традиционной американской музыки, задокументированные Артом Розенбаумом, T he Fretboard Journal : Issue 11, Fall 2008, pages 118-120

August Rush: Not Quiet on the Set: Композитор саундтрека приступает к необычному кинопроекту The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008, страницы 12-14

Братья Аветт: Движение вперед: для братьев Аветт прогресс означает оглядываться назад, The Fretboard Journal: Выпуск 20, зима 2010, страницы 46-59

Ави Авиталь: Пьесы: израильский мандолинист помогает выстраивать репертуар, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 14-16

Барри Ташиан: Еще кое-что сказать: 50-летняя одиссея Барри Ташиана, The Fretboard Journal : Выпуск 11, осень 2008, страницы 20-27

Б.B. King: Command Performance: после более чем 10 000 концертов шоу B.B. King все еще в пути, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 56-67

Bear Creek Instruments: Hollow Be Thy Name: Билл Хардин из Bear Creek и очарование гитары в стиле Вайссенборна, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 18-25

Бела Флек: Гибрид: Вооруженный надежным банджо Гибсона, Бела Флек подчиняет себе мятлик, The Fretboard Journal: Выпуск 20, зима 2010, страницы 62-75

Бен Харпер: Божество: музыкальное колдовство Дэвида Линдли, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 50-79

Бен Уилкокс: Небольшие различия: инструменты мастера Бена Уилкокса, The Fretboard Journal : Выпуск 34, 2015, страницы 58-67

Берт Янш: Шотландское Просвещение: изысканное искусство Берта Янша, The Fretboard Journal : Выпуск 20, зима 2010, страницы 26-33

Берил Харрелл: Первопроходец: маловероятное правление Берил Харрелл в качестве королевы стального круга, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 98-109

Беван Фрост: Решающий фактор: дегустация Big Hollow Guitars Бевана Фроста, The Fretboard Journal : выпуск 29, весна 2013, страницы 14-26

Билл Ашер: California Dreamin ’: корни Билла Ашера в Тинселтауне, The Fretboard Journal : выпуск 30, лето 2013, страницы 60-81

Билл Коллингс: Кошачий глаз: Билл Коллингс в поисках совершенства, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 34-44

Билл Коллингс: Вспомнил: музыканты, строители и клиенты размышляют о промышленном гиганте The Fretboard Journal : выпуск 40, 2017, страницы 102-118

Билл Фризелл: Музыка хороша: интервью с Биллом Фризеллом, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 15-22

Билл Хейли: Немного кантри, Немного рок-н-ролла, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 86-88

Билл Хардин: Hollow Be Thy Name: Билл Хардин из Bear Creek и очарование гитары в стиле Вайссенборна, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 18-25

Билл Кирхен: Hot Rod Pickin ’: Как нераскаявшийся фолк Билл Кирхен стал мастером Telecaster, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 28-39

Билл Монро: Обзоры: наконец завершено, T Журнал грифа : выпуск 9, весна 2008 г., стр. 118120

Билл Нэш: Старый сердцем: Билл Нэш о старении электрики, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007 г., страницы 18-27

Билл Питман: Studio Savant: беседа с гитаристом Биллом Питманом, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 27-33

Билл Тапиа: Самый старый рабочий в шоу-бизнесе: Билл Тапиа возвращается к гавайской гитаре, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 8-9

Билл Тапиа: Обзоры: Герцог Уке, The Fretboard Journal : Выпуск 7, осень 2007, страницы 116-118

Билли Гиббонс и Йен Мур: Что-то в воде: Билли Гиббонс и Ян Мур обсуждают корни техники Техасской гитары, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 68-85

Блейк Миллс: Бульвар Сансет: переход Блейка Миллса в мейнстрим, The Fretboard Journal : выпуск 34, 2015, страницы 26-37

Blind Willie Johnson: Sculpting Blind Willie: Художник Марк Уикли отдает дань уважения легенде Евангелия, The Fretboard Journal : Выпуск 2, лето 2006, стр. 12

Фестивали мятлика: Flatbeds и Flatheads: редкая возможность увидеть первые дни фестивалей мятлика, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 108-117

Боб Бейн: Ганн Слингер: Истинные студийные рассказы Боба Бейна, The Fretboard Journal : Выпуск 36, 2016, страницы 34-47

Бобби Лонг: Горизонт Хакни: миллион миль до Нэшвилла — гитарные мечты Бобби Лонга, The Fretboard Journal : выпуск 20, зима 2010, страницы 16-20

Боб Дженкинс: Знаки рождения: стремление Боба Дженкинса раскрыть правду о гитарах Harwood, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 74-85

Боб Шейн (Kingston Trio): Behind the Stripes: Боб Шейн размышляет о безумной поездке Kingston Trio, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 22-39

Боб Тейлор: Заявление: рождение Р.Taylor Guitars, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 20-26

Бортоло Бусато: Все для музыки: открытие таинственной жизни художника Бортоло Бусато, Журнал грифа : выпуск 34, 2015, страницы 80-87

Брэндон Сибрук: Throng of Tremolo Terror: Возвращение тенор-банджо, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 6-8

Brazilian Rosewood: Hallowed Log, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008 г., стр. 80

Brazilian Rosewood: The Perfect Tone ?: Раскрытие секретов легендарного бразильского палисандра, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 82-91

Brazilian Rosewood: Внесение пары ключей: Путеводитель любителей гитары по договору о сохранении CITES, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 92-101

Брюс Кокберн Линда Манзер: Руки, которые строят, руки, которые играют: Лютье Линда Манзер и гитарист Брюс Кокберн, магазин, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 40-51

Брайан Саттон: Finding Forever Заметки: Брайан Саттон перескакивает с гитарного суперсайдмена в центр внимания в качестве лидера группы, The Fretboard Journal : выпуск 40, 2017, страницы 46-65

Брайан Саттон: обзора, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 90-91

Брайант Тренье: Вырезание ниши: поклонник Archtop пробует свои силы, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 6-10

Бак Оуэнс: Бак для начинающих: учебник по Баку Оуэнсу, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 114-117

Баки Пиццарелли: Список Баки: краткий список Пиццарелли стандартов, которые нельзя пропустить, Fretboard Journal : Выпуск 31, осень 2013 г. , стр. 12–14

Бадди Миллер: Спагетти-вестерн: Американа Бадди Миллера (с помощью Италии) путешествие, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 86-97

Бад Айзекс: Проволока и петли: как новатор в области педальной стали Бад Айзекс помог изменить курс музыки кантри, The Fretboard Journal : Выпуск 26, лето 2012, страницы 94-103

С.Ф. Мартин III: «Вы можете называть меня Фредом»: легенда о К.Ф. Мартин III (1894-1986), The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., страницы 69-76

Карл К. Хольцапфель: Для рабочих жесткости: Карл К. Хольцапфель, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008 г., страницы 103-111

Carr Amplifiers: Trans Carolina Express: маловероятное музыкальное влияние Carr Amplifiers, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 14-15

Семья Картеров: Назад в Бристоль: Семья Картеров: Сессии Acme 1952/56, The Fretboard Journal : Выпуск 12, зима 2008, страницы 114-116

Чарльз «Скип» Пит: Сложный человек: история культового фанк-риффа, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 116-118

Чарли Хантер и Джефф Трауготт: Проверка двигателя: гитарист Чарли Хантер и мастер Джефф Трауготт идут под капотом своего продолжающегося сотрудничества на гитаре, The Fretboard Journal : Issue 22, Summer 2011, pages 48-57

Чарли Лувен: Интервью с Чарли Лувеном, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 24-29

Charlie Nothing: Краткая история Nothing: Чарли Nothing и его дингулятор, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 14-16

Чарли Пул: Обзоры: Ты не говоришь со мной: Чарли Пул и корни музыки кантри, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 120-122

Час Смит: Призывы к металлу: Час Смит черпает жуткую красоту из обрывков и излишков, The Fretboard Journal : Выпуск 34, 2015, страницы 88-107

Chicago Music Exchange и Andy’s Music: Windy City Windfall: рассказ о двух магазинах в Чикаго, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 84-94

Музыкальный магазин в Чикаго: Bless This Mess: Tucson’s Chicago Store, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 43-47

Чикагская школа изготовления гитар: Идеальный образец: Ян Шнеллер и Чикагская школа изготовления гитар, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 56-67

Крис Элдридж и Джулиан Лейдж: 1 + 1 = 1: Джулиан Лейдж и Крис Элдридж совершенствуют искусство дуэта, The Fretboard Journal : выпуск 39, 2017, страницы 80-87

Крис Хиллман; Byrds, Squirrels and Desert Roses: полевой гид по музыкальной флоре и фауне Криса Хиллмана, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 62-75

Крис Мартин IV: Обломок старой грифа: Крис Мартин IV ведет Мартина мимо дискотеки в 21 ^{-й век}, The Fretboard Journal : Выпуск 2, лето 2006, страницы 77-80

Синди Кэшдоллар: The Unexpected: Стальная гитаристка Синди Кэшдоллар строит карьеру на основе универсальности, The Fretboard Journal : Выпуск 35, 2015, страницы 32-47

Крестон Ли и Пол Лангедок: Вместе в одиночестве: Пол Лангедок и Крестон Ли связаны бизнесом построения соло, The Fretboard Journal : Выпуск 21, весна 2011, страницы 66-77

Крис Тайл: Generation GAB: обмен фразами с Крисом Тайлом, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008 г., страницы 56-71

Чак Эриксон: Fruits De Mer: Чак Эриксон — герцог Жемчужный, для производителей гитар всего мира, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 84-93

Чак Огсбери: Универсальный звук: Чак Огсбери и Оме Банджо, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., страницы 43-55

Кларенс и Роланд Уайт: Отдавать и брать: вместе и врозь, Роланд и его брат Кларенс оказали прочное влияние на блюграсс и кантри, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009, страницы 96-111

Clifftop: Clifftop Calling: где панк-рок и старина живут в гармонии, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 101-109

Общественный центр: Общественный центр: легендарная музыка Вествуд Фреда Валецки — это частично магазин инструментов, частично социальный клуб, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., страницы 101-113

Кузина Эмми: Победитель Эмми: кузина Эмми и ее родственники 1939-1947, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 114-118

Крис Мирабелла: Время реакции: Крис Мирабелла ведет джазовую гитару в новых направлениях, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 6-12

Дана Буржуа: Практика: как Дана Буржуа стала крупнейшим производителем гитар Новой Англии, The Fretboard Journal : Выпуск 32, зима 2013, страницы 78-95

Дэн Бимборн: Scroll Play: В поисках трехточечной мандолины Gibson F-4, The Fretboard Journal : Выпуск 15, осень 2009, страницы 6-11

Дэн Эрлевин: Создан для комфорта: рождение единственного и неповторимого кресла Rockin ’, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007 г., страницы 12-17

Даниэль Лануа: Самая красивая вещь: уроки языка с Даниэлем Лануа, The Fretboard Journal : выпуск 38, 2017, страницы 40-47

Дэнни Барнс: Блестящее место: Медитации Дэнни Барнса на банджо, The Fretboard Journal : Выпуск 35, 2015, страницы 90-105

Дэнни Феррингтон: Тонкая настройка: жизнь Дэнни Феррингтона как мастера на заказ, Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 44-65

Дэнни Калб: Gateway: Моя сцена, Гринвич-Виллидж, начало 1960-х, The Fretboard Journal : Выпуск 15, осень 2009, страницы 12-14

Дэйв Элвин: Выбросы в Калифорнии: наследие Дэйва Элвина Golden State, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010 г., страницы 40-53

Дэйв Мэтьюз: Странный и синкопированный: множество влияний певца и автора песен Дэйва Мэтьюза, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 46-63

Дэвид Бромберг: Сохранение коня: музыкант Roots — и эксперт по скрипке — Дэвид Бромберг заново открывает для себя радость исполнения музыки, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007 , стр. 36-53

Дэвид Кросби: Gale Force: Дэвид Кросби размышляет об истории и гармониях, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 42-61

Дэвид Гриер: Действительно дикая мечта: гитарист Дэвид Гриер исполняет свое предназначение, The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009 г., страницы 80-93

Дэвид Грисман: Поэт-лауреат: Дэвид Грисман сочиняет новый стих для двух классических произведений, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005, страницы 30-35

Дэвид Грисман и Eastman Music: The Italian Job: Дэвид Грисман и Eastman Music совместно работают над новой серией инструментов, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009, страницы 112-114

Квинтет Дэвида Грисмана: Дни Dawg: Оглядываясь назад на рождение квинтета Дэвида Грисмана, The Fretboard Journal : Выпуск 6, лето 2007, страницы 86-101

Дэвид Идальго: Волк выживает: 40-летняя история Дэвида Идальго с Лос-Лобосом и за его пределами, The Fretboard Journal : выпуск 29, весна 2013, страницы 64-81

Дэвид Линдли: Божество: музыкальное колдовство Дэвида Линдли, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 50-79

Дэвид Роулингс: Олимпийская слава: История Дэвида Роулингса и грязной старой гитары Archtop, The Fretboard Journal : Выпуск 18, лето 2010, страницы 58-73

Dehradun Guitar Company (Дэвид Мюррей): В Индию и обратно: запуск лютерийского движения в предгорьях Гималаев, The Fretboard Journal : Выпуск 38, 2017, страницы 6-16

Дик Дикерсон: Его собственная реальность: добро пожаловать в рай для любителей гитары, созданный самим Диком Дикерсоном, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 46-59

Лихорадка денге: Юг к юго-западу: Лихорадка денге: Лунатизм через Меконг, The Fretboard Journal : выпуск 15, осень 2009 г., страницы 118-120

Дерек Бейли: Обзоры: Самовозгорание, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 84-86

Дерек Тракс: Возвращение в это место: несколько мгновений с великолепной гитарой Дерек Тракс, Журнал грифа : выпуск 36, 2016, страницы 60-75

Джанго Рейнхардт: обзора, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 87-90

Джанго Рейнхардт: Бродячий цыган: Дханджо Рейнхардт, The Fretboard Journal : Выпуск 2, лето 2006 г., страницы 86-89

Донован Уиттемор: Bee Keeper: Донован Уиттемор из Luxe пересматривает легендарный конденсатор, The Fretboard Journal : выпуск 33, весна 2014 г., страницы 6-12

Дуг Грин: Тайная жизнь рейнджера Дуга: звезда ковбоев — и коллекционер Стромберга — демонстрирует свои навыки арктопа в горячем свинг-оркестре, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 27-35

Дрю Кристи: Я не могу бросить вас: трудно расстаться с гитарой, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 6-8

Дрю Кристи: Резьба по дереву: Дрю Кристи из Сиэтла черпает из прошлого, The Fretboard Journal : выпуск 30, лето 2013, страницы 28-41

Duane Eddy: Raising Arizona: Duane Eddy and the sound of American cool, The Fretboard Journal : Issue 3, Fall 2006, pages 14-19

Эрл Скраггс: Банджо, изменившее мир: Удивительная жизнь и тяжелые времена Эрла Скраггса, The Fretboard Journal : Выпуск 7, осень 2007, страницы 68-83

Eastman: Сделано в Китае: Некоторые из рук, стоящих за инструментами ручной работы Eastman, The Fretboard Journal : Выпуск 16, зима 2009 г., страницы 102-109

Eastman Music и Дэвид Грисман: The Italian Job: Дэвид Грисман и Eastman Music совместно работают над новой серией инструментов, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 112-114

Эд Аскью: The Unicorn Answers: слово от самого известного в мире певца-певца-песенника, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009, страницы 14-15

Эдди Веддер (Pearl Jam): Широкий ресивер: Эдди Веддер из Pearl Jam выводит гавайскую гитару на мейнстрим, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 44-63

Эдвард Виктор Дик: Звук эпохи Возрождения: Неповторимое очарование банджолы, The Fretboard Journal : Выпуск 15, осень 2009, страницы 106-107

Эль Джейн Хендерсон: Устойчивая энергетика: производитель гитар и укулеле Эль Джейн Хендерсон занимает свою нишу, The Fretboard Journal : выпуск 39, 2017, страницы 54-63

Эль МакМин: Сэндвич с балони: Обед со Стефаном Гроссманом и Эль МакМином, Журнал Гриф : Выпуск 10, лето 2008, страницы 6-7

Epiphone Recording Model Guitars: A to E: Увлекательный, странный мир гитар Epiphone Recording Model, The Fretboard Journal : Выпуск 40, 2017, страницы 38-45

Ergo Guitar: Ergo, Guitars: Чарльз Фокс понимает, что две вершины лучше, чем одна, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007 г., страницы 6-7

Эрик Бибб: Фанатик Fylde: Эрик Бибб копается в своих любимых инструментах Fylde, The Fretboard Journal : Выпуск 7, осень 2007, стр. 60

Эрих Соломон: Несоразмерно: жизнь (и строительство) по золотой середине, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 34-45

Эрвин Сомоги: В погоне за совершенством: программа ученичества Эрвина Сомоги в Старом Свете, The Fretboard Journal : Выпуск 36, 2016, страницы 76-91

Фарид Хак: В фокусе: взгляд в мир Фарида Хака, Журнал «Гриф» : выпуск 20, зима 2010, страницы 6-14

Флетчер Брок: Путь якоря: Как уважаемый корабельный плотник помог начать карьеру Флетчера Брока в строительстве мандолины, Журнал грифа : выпуск 16, зима 2009 г., страницы 6-11

Флетчер Брок и Лоуренс Смарт: Серенада Солнечной долины: Флетчер Брок и Лоуренс Смарт о создании мандолин в Sawtooths, The Fretboard Journal : Выпуск 32, зима 2013, страницы 104-120

Fylde Guitars: Industrial Evolution: замечательная команда людей и машин помогает создавать легендарные гитары Fylde Роджера Бакнелла, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 56-65

Фрэнк Форд: Родился старинный инструмент, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 36-41

Фрэнк Форд: My Phoenix Vacation, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012 г., страницы 76-83

Фрэнк Уэйкфилд: Мост: долгое, странное и иногда обратное путешествие Фрэнка Уэйкфилда, The Fretboard Journal : выпуск 35, 2015, страницы 64-75

Фред Карлсон: Free Hand: потусторонние струнные инструменты Фреда Карлсона из Калифорнии, The Fretboard Journal : выпуск 40, 2017, страницы 66-81

Фред Картер мл.: Наемный стрелок: Нэшвилл А-тимер Фред Картер-младший, типичный специалист по первому вызову, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 25-35

Фред Фрит: Новые горизонты: импровизированная вселенная Фреда Фрита, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 82-93

Фред Остер: Искусство и ремесла: машина времени 19 ^-го-го века, известная как Vintage Instruments Фреда Остера, Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 66-81

Фред Тэкетт: Природные ресурсы: Арканзас Фред Тэкетт долгое время был одним из самых ценных активов поп-музыки, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 90-101

Фред Валецки: Общественный центр: легендарная музыка Фреда Валецки Westwood — это частично инструментальный магазин, частично социальный клуб, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008, страницы 101-113

The Fretboard Summit: Scenes from the Summit: The Fretboard Journal проводит первое национальное собрание гитар, The Fretboard Journal : выпуск 36, 2016, страницы 100-122

Friends of Old Time Music: The Folk Arrival 1961-1965: Обзоры: Friends of Old Time Music: The Folk Arrival 1961-1965, The Fretboard Journal : Выпуск 6, лето 2007, страницы 117-118

Galax: Crooked Roads: Путеводитель для новичков по Конвенции старых скрипачей Galax, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 10-20

Gallagher Guitars: Приказы врача: посещение Wartrace, Tennessee’s Gallagher Guitars, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 34-43

Galloup Guitars: Acoustic Tone Control: Galloup Guitars и их стремление к количественной оценке, контролю и манипулированию тоном в древесине, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 64-77

Гэмбл Роджерс: Не называй меня Мистер: Гэмбл Роджерс проиграл интервью с Мерл Трэвис, The Fretboard Journal : выпуск 34, 2015, страницы 108-122

Гэмбл Роджерс: Оракул Оклавахи: Гэмбл Роджерс, джентльмены с юга, The Fretboard Journal : Выпуск 3, осень 2006 г. , стр. 26-30

Гэри Дэвис: Обучение у преподобного: уроки игры на гитаре с Гэри Дэвисом, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 66-74

Джин Отри: Обзоры: Blue Gene, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 111-112

Джин Парсонс: Искусство и наука: разговоры о музыке и технике с Джином Парсонсом, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 46-57

Джефф Бенж: Лорд Люсит: Просматривая творения Джеффа Бенжа из Чикаго, The Fretboard Journal : Выпуск 30, лето 2013, страницы 18-26

Джефф Клайн: Топор: В поисках сокровищ на пути к Граалю, The Fretboard Journal : Выпуск 19, осень 2010, страницы 14-16

Джефф Малдаур: Daring the Fates: The Regeneration of Geoff Muldaur, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 22-33

Джордж К. Lindsey: Третье поколение: таинственные гитары Джорджа К. Линдси, The Fretboard Journal : выпуск 29, весна 2013 г., страницы 6-12

Джордж Грун: Интеллектуальный дизайн: знаменитый торговец инструментами и историк Джордж Грун также знает свой путь к чертежной доске, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 72-85

Джордж Томско (Огненные шары): Недостающее звено: Огненные шары Джордж Томско бороздил первые волны рок-н-ролла, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 98-118

Gibson Electric Steel Guitars: Steel Guitar Rag: Gibson Electric Steel Guitars: 1935-1967, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 114-118

Укулеле Гибсона: Младенцы Гибсона: Тайны всех этих укулеле из Каламазу, Журнал Гриф : Выпуск 40, 2017, страницы 82-95

Джиллиан Уэлч: Вне коробки: бессвязная карьера Джиллиан Уэлч, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 66-73

Джино Бордин: Tropical Strom, The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009 г., страницы 110-114

Глен Хансард: Once a Busker…: Некоторые вещи никогда не меняются для певца и автора песен Глена Хансарда, The Fretboard Journal : Выпуск 17, весна 2010, страницы 22-33

Гордон Гилтрап: Не могли бы вы сделать меня одним ?: В течение 35 лет Гордон Гилтрап и Роджер Бакнолл плодотворно сотрудничали, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, стр. 63

Grand Ole Opry: Country Chaos: Backstage at Grand Ole Opry, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 30-37

Грант Горди: Исследования и разработки: бесконечные открытия гитариста Гранта Горди, The Fretboard Journal : выпуск 40, 2017, страницы 6-16

Грант Грин: Обзор звукозаписывающей карьеры Гранта Грина, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., страницы 90-91

Грант Джонсон: Music City Diary: Почему я бросил свою дневную работу, чтобы стать музыкантом в Нэшвилле, The Fretboard Journal : Выпуск 5, весна 2007, страницы 14-16

Грег Герман: Естественный отбор: эволюция Грега Германа в производство гитар, The Fretboard Journal : Выпуск 31, осень 2013, страницы 82-95

Грег Лейс: Go Tell It On The Mountain: Грег Лейс и архитектура песни, The Fretboard Journal : Выпуск 33, 2014, страницы 52-73

Грегори Спатц: Обзоры: Сборщики с ручками: Fiddler’s Dream, The Fretboard Journal : Выпуск 8, зима 2007, стр. 120

GTR: Интеллектуальный дизайн: Известный продавец инструментов и историк Джордж Грун также знает свой путь к чертежной доске, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 72-85

Список желаний гитариста: The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 6-8

Guitar Street: Магазин инструментов во Вьетнаме обеспечивает закрытие для ветерана войны, The Fretboard Journal : выпуск 35, 2015, страницы 76-89

The Guitar X-Ray Project: We’re Looking Through You: The Guitar X-ray Project, The Fretboard Journal : Issue 26, Summer 2012, pages 104-118

Гай Кларк: Подарки ручной работы: беседа с легендарным певцом, автором песен и мастером, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006, страницы 48-53

Guild Guitars: Back East: Возвращение Guild в Новую Англию знаменует собой возвращение к форме, The Fretboard Journal : выпуск 20, зима 2010, страницы 34-45

Gypsy Jazz Guitar: Gypsy Caravan, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 114-120

Гамильтон де Холанда: обзора, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 118-120

Гамильтон де Холанда: Сердца и умы: подружиться (и радоваться жизни) с бразильским мандолинным феноменом Гамильтон де Холанда, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 20-27

Happy Traum: Долгое путешествие: целая жизнь занятий музыкой с Happy Traum, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 30-45

Харлан Ф.Seachris: Saving Harlan’s Bacon: старинное пятиструнное банджо, купленное в самом неподходящем месте, The Fretboard Journal : выпуск 37, 2016, страницы 6-14

Гитара арфы: Сила симфонии: для преданного сообщества музыкантов и строителей гитара арфы все еще звучит правдоподобно, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 98-111

Гарри Тафт (Денверский фольклорный центр): Гудок и крик: стойкое влияние Денверского фольклорного центра Гарри Тафта, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 106-111

Харви Томас: Аттракцион Мидуэй: рассказ из первых рук об эксцентричном гении (и создателе гитар) Харви Томасе, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 85-93

Гавайская гитара: Слайд заказа по почте: Эдди Алкир и музыкальная компания Оаху, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 75-82

Гавайская укулеле: Гавайская гавайская гитара и маркеры для гитары с 1884 по 1930 год, The Fretboard Journal : Выпуск 4, зима 2006, страницы 120-123

Хайнц Ребеллиус: Поиск золота: поиск вдохновения в стопке старых писем, The Fretboard Journal : выпуск 15, осень 2009, страницы 16-20

Hoffman Guitars: Звезды Севера: праздник гитарного сообщества Миннесоты, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 83-99

Hohner: Почетный гитарный инструмент: Hohner: The Living Legend, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., стр. 114

Рекламный клуб Гонолулу: Сделано на Гавайях: Краткая история Табу, торговой марки Рекламного клуба Гонолулу, The Fretboard Journal : Выпуск 1, лето 2006, страницы 81-85

Горячий клуб Сан-Франциско: Обзоры: Tango with Django: Yerba Buena Bounce, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 118-120

Howard Rains: The Forager: Howard Rains хроники редких песен… и музыкантов, The Fretboard Journal : выпуск 40, 2017, страницы 28-37

Howe-Orme: Тайна Хау-Орма: потерянная история индивидуального дизайна инструментов, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006, страницы 76-85

Huey Long: The Longest Road: Совет (и свиные отбивные) 104-летнего бывшего Ink Spot Хьюи Лонга, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 16-18

Ян Мур и Билли Гиббонс: Что-то в воде: Билли Гиббонс и Ян Мур обсуждают корни техники Техасской гитары, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 68-85

Ян Шнеллер: Идеальный образец: Ян Шнеллер и Чикагская школа изготовления гитары, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 56-67

Исилио Консалви: Бостонский жемчужный король: Исилио Консалви, мастер по изготовлению грифа позолоченного века, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 12-19

Джек Джонсон: Держим перо на плаву: за кулисами с певцом и автором песен Джеком Джонсоном, The Fretboard Journal : выпуск 33, 2014, страницы 92-105

Джек Сандерс: If It Ain’t Baroque…: Джек Сандерс улавливает магию Страда, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 112-114

Jackshit: Straight Outta Cochtotan: Знакомство с звездной группой, известной как Jackshit, The Fretboard Journal : Выпуск 37, 2016, страницы 22-34

Джексон Браун: Разгрузка: в дороге с Джексоном Брауном и десятками винтажных Гибсонов, The Fretboard Journal: выпуск 22, лето 2011, страницы 84-95

Джексон Браун: Остаться: Джексон Браун пишет песни, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 96-107

Джеймс Блэкшоу: Катерсис: в сознании выдающегося 12-струнного гитариста, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 18-20

Джеймс Эйнольф: Последняя честная сделка: Лютье Джеймс Эйнольф возвращает к жизни легендарную гитару Роберта Джонсона, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 12-21

Джеймс Гудолл: Контрапункт: Многогранность создателя гитар Джеймса Гудолла, The Fretboard Journal : Выпуск 16, зима 2009 г., страницы 32-43

Джеймс Джонс: Celtic Pride: В поисках настоящей любви в Интернете, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 14-16

Джеймс Уильямсон: Гробы в углу: гитары пионера розового Джеймса Уильямсона оживают, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 100-109

Джейсон Лоллар: Художник-пикап: Длинная извилистая дорога Джейсона Лоллара, Журнал «Гриф» : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 19-23

Жан Ларриве: Шеф, повар, мойщик бутылок: От джунглей Индии до производственного цеха, Жан Ларриви выступает за практический подход, Журнал грифа : выпуск 10, лето 2008, страницы 37-55

Джефф Остин: Heartattack: история из трех частей о мандолине Nugget, построенной в Колорадо, в Эльдоре, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 6-8

Джефф Хасс и Марк Далтон: Мальчики из долины Шенандоа: Из колыбели Аппалачей Джефф Хасс и Марк Далтон обновляют традиции изготовления гитар, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 73-87

Джефф Трауготт: Заявление художника: Лютье Джефф Трауготт описывает свою новую модель RGE, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 86-93

Джефф Трауготт и Чарли Хантер: Проверка двигателя: гитарист Чарли Хантер и мастер Джефф Трауготт идут под капотом своего продолжающегося сотрудничества на гитаре, The Fretboard Journal : Issue 22, Summer 2011, pages 48-57

Джерри Дуглас: Смерть клоуна: в руках Джерри Дугласа добро — не повод для смеха, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 15-24

Джерри Рид: Дань: Джерри Рид, 1937-2008, The Fretboard Journal : Выпуск 12, зима 2008, стр. 110

Джим Коэн: Обзоры: At the Electric Table, Home, James: Steelin ’My Way Back to the 60s, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, стр. 118

Джим Холл: Расширенный урок: старый ученик все еще находит, чему поучиться у легенды джазовой гитары Джима Холла, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 59-73

Джим Харви: Крепкие старики и Клен с высоты птичьего полета: Нерассказанная история Джима Харви, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 80-93

Джим Меррилл: Должен быть: Джим Меррилл и деревянный ящик, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 38-59

Джимми и Кэти Вингерт: Перламутр: Кэти и Джимми Вингерт делают гитары семейным бизнесом, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 22-29

Джимми Эдмондс: Молва: Растущая репутация мастера Galax Джимми Эдмондса, The Fretboard Journal : Выпуск 28, зима 2012, страницы 64-71

Джимми Пондер: Что видели эти руки: хватка гитариста Джимми Пондера на классический джаз, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 71-83

Дж.Дж. Кейл: Основной инстинкт: Дж. Дж. Кейл остается — во многих отношениях — мастером преуменьшения, The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009, страницы 68-79

Джоан Шелли: Еще тише: странствующие люди из Луисвилля Джоан Шелли, The Fretboard Journal : Выпуск 39, 2017, страницы 8-18

Джо Бюссар: Джо Бюссар чувствует себя непоколебимым сегодня: в сознании непреклонного коллекционера пластинок, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 100-107

Джо Голдмарк: Обзоры: За электрическим столом: Соблазнение 60-х, The Fretboard Journal : Выпуск 8, зима 2007, стр. 118

Джо Генри: Предназначен для того, чтобы быть услышанным: Растущая коллекция старинных гитар певца и автора песен Джо Генри, The Fretboard Journal : Выпуск 26, лето 2012, страницы 22-29

Джоэл Экхаус: На распутье: разлагающийся Мартин получает вторую жизнь, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 12-19

Джоэл Уокер Суини: Из его тыквы: Рождение банджо: Джоэл Уокер Суини и ранний менестрель, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 114-118

Джо Вейлетт: Алхимия: Джо Вейлетт высвобождает магическую энергию дерева, The Fretboard Journal : Выпуск 20, зима 2010, страницы 76-87

Джон Билезикджян: Джонни Б.Уд: Мастерство Джона Билезикджяна, The Fretboard Journal : Выпуск 19, осень 2010, страницы 18-27

Джон Энгель: Обзоры: Необычный звук: гитаристы-левши, изменившие музыку: Джон Энгель, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 112-116

John Fahey: The Cross: Переписка молодого гитариста с Джоном Фейи, The Fretboard Journal : Issue 29, Spring 2013, pages 96-118

John Fahey: Reviews, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 116-118

Джон Хаммонд: Одинокий волк: жизнь Джона Хаммонда с блюзом, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 78-85

Джон Хартфорд: Хороший поступок: Джон Хартфорд, Hippie Eclectic Southern Riverboat Intellectual, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 100-115

Джон Генри Паркер: История двух лютеров: в погоне за призраком Джона Генри Паркера, Журнал грифа : выпуск 30, лето 2013, страницы 106-118

Джон Йоргенсон: Gypsy Come Home: Универсальный виртуоз Джон Йоргенсон возвращается к музыке Джанго Рейнхардта, The Fretboard Journal : Выпуск 9, весна 2008, страницы 33-41

Джон Ли Хукер: Погоня за отголосками: В поисках Детройта Джона Ли Хукера, The Fretboard Journal : Выпуск 16, зима 2009, страницы 94-101

Джон Лундерберг: Дань: Джон Лундерберг 1935-2011, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 115-118

Джон Монтелеон: Эллиптическое путешествие: инструменты Джона Монтелеона в стиле ар-деко питают глаза, щекочут уши и стимулируют воображение, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 76-89

Johnny Paycheck: Guitarcheology 101: бункерная гитара Джонни Пейчека и его предсмертный опыт, The Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 28-33

Джон Пиццарелли: Династия: великий джаз Джон Пиццарелли поддерживает семейную традицию, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 30-47

Джон Райшман: Лучшее: Джон Райшман размышляет о трех десятилетиях моногамии мандолины, The Fretboard Journal : Выпуск 28, зима 2012, страницы 36-45

Джон Родерик: Movin ’on Up: путешествие инди-рокера на« темную сторону », The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009 г., страницы 12-14

Джон Скофилд: Хамелеон: От блюза до бопа, от фанка до фьюжн, отличительный звук Джона Скофилда всегда вписывается, The Fretboard Journal : Выпуск 8, зима 2007, страницы 54-69

Джон Тефтеллер: Самые редкие рекорды в мире!: Поиск блюза Джона Тефтеллера, Журнал грифа : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 95-96

Джоли Холланд: Highway Kind: Техасские корни певицы и автора песен Джоли Холланд, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 96-103

Хорди Саваль: Возвращение из могилы: Хорди Саваль поддерживает традицию альта да гамба, Журнал грифа : выпуск 5, весна 2007, страницы 105-113

Йорма Кауконен: Привет из лагеря Кауконен: выходные на ранчо мира Йормы, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 44-57

Joseph Arthur: Boroughing In: The New York Canvas of Singer-Songwriter Joseph Arthur, Fretboard Journal : Выпуск 31, осень 2013, страницы 16-26

Джозеф Янузилло: Остров: повседневные проблемы мастера Джозефа Янузилло, The Fretboard Journal : Выпуск 37, 2016, страницы 74-91

Джоуи Тейлор: Maple Leaf Rag: История канадской Six String Nation Guitar, The Fretboard Journal : Выпуск 5, весна 2007, страницы 8-11

Джулиан Лещ: Музыкальная фантазия: Сквозь лес с Джулианом Лещом и Франческо Канова да Милано, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 9-11

Джулиан Лейдж и Крис Элдридж: 1 + 1 = 1: Джулиан Лейдж и Крис Элдридж совершенствуют искусство дуэта, The Fretboard Journal : выпуск 39, 2017, страницы 80-87

Джулиан Лейдж: Зов: Джулиан Лейдж получает одну из самых желанных вакансий в джазе, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 86-97

Камака укулеле: Гордость и ананасы: крепкая семейная традиция по-прежнему является движущей силой укулеле Камака, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 103-111

Kari Nieminen: Helsinki Soul: Luthier Kari Nieminen объединяет гитары с финским дизайном, The Fretboard Journal : выпуск 29, весна 2013, страницы 48-63

Кэти и Джимми Вингерт: Перламутр: Кэти и Джимми Вингерт делают гитары семейным бизнесом, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 22-29

Кейт Кэри: Нечетные дела: фантастический мир Кита Кэри, The Fretboard Journal : выпуск 37, 2016, страницы 100-111

Keller Guitars: Звезды Севера: праздник гитарного сообщества Миннесоты, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 83-99

Кеннет «Джетро» Бернс: Смешно, но правда: Наследие Кеннета «Джетро» Бернса, The Fretboard Journal : Выпуск 18, лето 2010, страницы 87-101

Кен Паркер: Было бы лучше, если …: Прекрасный день с Кеном Паркером (часть первая), The Fretboard Journal : Выпуск 38, 2017, страницы 100-120

Кен Паркер: Было бы лучше, если …: Прекрасный день с Кеном Паркером (пар. 2), The Fretboard Journal : Выпуск 39, 2017, страницы 98-118

Kenyan Lutherie: The Jua Kali Spirit: Благодаря находчивости гитаристов — и гитарных мастеров Кении — музыка бенга все еще процветает, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008, страницы 6-10

Кевин Енох: Создание нового старого банджо: Как Кевин Енох создал новый дизайн банджо на основе коллекции старинных инструментов, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 96-111

Древесина киаве: В сорняках: изготовление инструментов из гавайской древесины киаве, The Fretboard Journal : выпуск 37, 2016, страницы 62-73

Ким Тайил (Soundgarden): Немного больше шума: многочисленные влияния Кима Тайила из Soundgarden, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 26-37

Ким Уокер: Эстетика Archtop: рождение гитары Kim Walker Solo Novo, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., страницы 43-53

Ким Уокер: Scrap Leap: The Kim Walker One Third Century of Progress Guitar, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 6-10

Король Санни Аде: Танцуй музыку: оглянись назад с гигантом джуджу Кинг Санни Аде, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 22-33

Кинджи Като: Вся шумиха в Японии: сямисэн возвращается, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 16-20

Ларри Бридлав: Заявление: рождение Р.Taylor Guitars, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 20-25

Ларри Крэгг: Аренда для владения: гитарный техник Ларри Крэгг имеет снаряжение (и советы) наготове, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 52-65

Ларри Погреба: Легко быть зеленым: мастерство переработки мотокросса, лесозаготовки, изготовления ножей, ловли нахлыстом, мастер Ларри Погреба, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 68-83

Ларри Робинсон: Shell Games: Ларри Робинсон и миллионный Мартин, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 11-14

Ларри Робинсон: Canon Fodder: волшебная, единственная в своем роде гитара Lindisfarne, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 10-16

Братья Ларсоны: Под любым другим именем: Легенда о братьях Ларсон, Журнал Гриф : Выпуск 15, осень 2009, страницы 92-105

Лоуренс Берндт (Берндт Вудс): Переосмысление ладов: стремление одного человека перезагрузить лады старого стиля — с новым поворотом, The Fretboard Journal : выпуск 30, лето 2013, страницы 14-16

Leadbelly: Bourgeois Blues: воссоздание 12-струнной Stella Leadbelly, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., страницы 16-20

Leo Kottke: Up and Running: подключение к легенде акустической гитары Лео Коттке, The Fretboard Journal : выпуск 38, 2017, страницы 64-87

Les Paul: Эксперименты со звуком: Les Paul размышляет о жизни музыкальных подвигов, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 90-101

Линда Манзер и Брюс Кокберн: Руки, которые строят, руки, которые играют: Лютье Линда Манзер и гитарист Брюс Кокберн, магазин, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 40-51

Линда Манзер: С нуля: коллега-мастер отдает дань уважения новаторской работе Линды Манзер, The Fretboard Journal : выпуск 36, 2016, страницы 92-99

Linthead Stomp: Социальная сеть: Linthead Stomp: Создание музыки кантри на юге Пьемонта, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 116-118

Лайонел Лук: обзора, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 89-90

Ллойд Бэггс: Тридцать два вкуса: инновационные гитары Ллойда Бэггса, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 85-97

Ллойд Лоар: Небеса мандолины: отчет с фестиваля Loar Fest West 2006, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006, страницы 8-9

Мандолина Лоар: 70281: Возвращение первой Мандолины Лоар, Журнал Гриф : Выпуск 38, 2017, страницы 18-31

Лаудон Уэйнрайт III: Легче, чем ребенок: переулок памяти Лаудона Уэйнрайта, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 60-67

Лютер Дикинсон: Секретный код: Лютер Диксон разгадывает тайны звука Hill Country, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 42-59

Лайл Ритц: Обзоры: Без излишеств, The Fretboard Journal : Выпуск 7, осень 2007 , страниц 116-118

Lynn Dudenbostel: Double Exposure: опыт работы в изобразительном искусстве помогает руководить работой художника Линн Дуденбостель, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 58-71

Lyon & Healy и Washburn: голоса в хоре: малоизвестное наследие Lyon & Healy и Washburn, Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 96-118

Mac Yasuda: Большой Plink: Mac Yasuda приносит домой бесценную коллекцию банджо — по цене The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009, страницы 56-67

Mandolin Abstractions: Brooklyn and Beyond: Музыкальное и духовное путешествие Энди Статмана, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006, страницы 14-21

Симпозиум по мандолине: Давайте просто сделаем мандолину!: Отчет с симпозиума по мандолинам, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 8-10

Мануэль Дельгадо: С востока Л.A. в Ист-Нэшвилл: мексикано-американский мастер в третьем поколении Мануэль Дельгадо начинает все заново в Music City, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 40-51

Марк Майнгард: Из Африки: художественное путешествие Марка Майнгарда из Кейптауна, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 22-35

Марк Рибо: Искусство переводчика: интерпретирующие способности Марка Рибо, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 32-43

Марк Зильбер: Guitar Vagabond: 50-летнее путешествие Марка Зильбера с американскими винтажными инструментами, The Fretboard Journal : Выпуск 33, 2014, страницы 106-122

Маркус Итон: Flying High: Как Маркус Итон стал одним из любимых гитаристов Дэвида Кросби, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 24-29

Margaret Glaspy: A Ways From Weiser: Очаровательные звуки нью-йоркской певицы и автора песен Маргарет Гласпи, The Fretboard Journal : Выпуск 37, 2016, страницы 16-21

Марк Байер: Босс Твид: Марк Байер’s Victoria Amp Co.привносит винтажные тона в современный мир, The Fretboard Journal : Issue 9, Spring 2008, pages 22-30

Марк Далтон и Джефф Хасс: Мальчики из долины Шенандоа: Из колыбели Аппалачей Джефф Хасс и Марк Далтон обновляют традиции изготовления гитар, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 73-87

Мартин Симпсон: Виртуоз виртуоза: гитара Мартина Симпсона, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007 г., страницы 76-77

Марти Лэнхэм: Сотрудник компании: Как Марти Лэнхэм стал мастером в Нэшвилле, The Fretboard Journal : Выпуск 35, 2015, страницы 48-63

Марти Стюарт: Куратор: Традиционная музыка кантри в надежных руках Марти Стюарт, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 46-65

Мэтью Д.Тейлор: Hollow Victory: неуловимая мечта Лес Пола о 12-летнем мальчике, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 18-20

Мерл Трэвис: Не называй меня Мистер: Гэмбл Роджерс проиграл интервью с Мерл Трэвис, The Fretboard Journal : выпуск 34, 2015, страницы 108-122

Майкл Чепмен: Всегда гость: взгляд Майкла Чепмена с севера, The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009, страницы 20-31

Майкл Гуриан: Первопроходец: Лютерийская жизнь Майкла Гуриана на третьей планете от Солнца, The Fretboard Journal : выпуск 4, весна 2007, страницы 41-51

Майкл Миллард (гитары Froggy Bottom): Жизнь в лесу: Майкл Миллард и естественный мир гитар Froggy Bottom, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 28-41

Майкл Стивенс: Ranch Hand: стремление Майкла Стивенса к совершенству гитары, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 94-107

Микки Бейкер: Странная связь: встреча с легендой гитары Микки Бейкером, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 12-14

Майк Блумфилд: Я всегда с вами: непреходящее наследие Майка Блумфилда, The Fretboard Journal : выпуск 37, 2016, страницы 112-122

Майк Комптон: Общий блеск: Мандолинист Майк Комптон объединяет древние тона с современной выдержкой, The Fretboard Journal : выпуск 39, 2017, страницы 64-79

Майк Кемнитцер: Золотой самородок: визит к известному мастеру мандолины Майком Кемнитцером, The Fretboard Journal : выпуск 38, 2017, страницы 48-63

Майк Маршалл и Крис Тайл: обзора, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 90-91

Майк Микельсон: Ценность лагеря: обучение и гастроли с Bearfoot, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010 г., страницы 10-12

The Milk Carton Kids: Close Harmony: The Milk Carton Kids заново изобретают фолк-дуэт, The Fretboard Journal : выпуск 30, лето 2013, страницы 82-91

Мюриэль Андерсон: Классическое образование: Мюриэль Андерсон идет по тонкой грани между блюграссом, фингерстилем и музыкой фламенко, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 58-67

The Music Emporium: It Takes a Village: посещение Music Emporium, акустическая улица Шангри-ла на Восточном побережье, The Fretboard Journal : выпуск 38, 2017, страницы 88-99

Нэнси Блейк: Ближе к дому: Норман и Нэнси Блейк все еще находят музыкальное вдохновение в своей сельской местности в Джорджии, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 88-99

The National: Square to be Hip: братья Десснер из The National ставят содержание важнее стиля, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011 г., страницы 22-29

Nato Lima: The Sound of Magic: невероятная одиссея бразильского гитариста Nato Lima, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 27-33

Нед Штайнбергер: Мейн-стрим: Из прибрежного форпоста Новой Англии течет гений Неда Штайнбергера, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009, страницы 34-45

Neko Case: Tenor Guitar Tales: Беседа с Неко Кейс о магии (и опасностях) ее четырехструнных друзей, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006, страницы 32-40

Nels Cline: Mood Swings: Самый смелый проект Нелса Клайна также является его самым красивым, The Fretboard Journal : Issue 37, 2016, pages 36-61

The Neptunes: All Beach, No Ocean: The Neptunes and the Fresno surf sound, The Fretboard Journal : выпуск 4, весна 2007 г., страницы 10-12

Ник Джонс: Обзоры: Ник Джонс, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 86-87

Ник Джонс: Deep, Dark, Underground: британский народный певец Ник Джонс прощается с золотом, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 78-83

Ник Форстер: Примерка: Ник Форстер решает устроить шоу, The Fretboard Journal : выпуск 34, 2015, страницы 38-57

Nikos Apollonio: Away From the Roll of the Sea: Лютье Никос Аполлонио открывает кельтский звук, The Fretboard Journal : Выпуск 36, 2016, страницы 48-59

Ноам Пикельны: Ноам Пикельны собирается соло, The Fretboard Journal : выпуск 39, 2017, страницы 4-6

Норман Блейк: Близко к дому: Норман и Нэнси Блейк все еще находят музыкальное вдохновение в своей сельской Джорджии, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 88-99

Мандолины Нортфилда: К востоку от Каламазу: трансглобальная лютерия мандолинов Нортфилда, Журнал грифа : Выпуск 35, 2015, страницы 6-13

Музыкальная компания Оаху: Слайд заказа по почте: Эдди Алкир и музыкальная компания Оаху, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 75-82

Ome Banjos: Universal Sound: Chuck Ogsbury and Ome Banjos, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., страницы 43-55

The Old Town School: Пятьдесят лет и подсчет: Pickin ’and Hopin’ в Старой городской школе народной музыки Чикаго, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 68-83

Olson Guitars: Звезды Севера: праздник гитарного сообщества Миннесоты, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 83-99

Отис Тейлор: Встреча в трансе: визит к гипнотическому блюзмену Отису Тейлору, The Fretboard Journal : выпуск 16, зима 2009 г., страницы 44-55

Paracho, Мексика Guitar Builders: Guitar Town: визит с los guitarreros de Paracho, Мексика, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., страницы 70-85

Paramount Records: Взлет и падение Paramount: история фабрики стульев в Висконсине и ее записывающая деятельность, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 118-120

Пол Бигсби: Beyond the Whammy Bar: история Пола Бигсби, отца современной цельнокорпусной электрогитары, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 112-116

Пол Берч: Голубая ода: Пол Берч направляет своего внутреннего Джимми Роджерса, The Fretboard Journal : выпуск 36, 2016, страницы 14-19

Пол Бускерк: В повозке: по длинному пыльному следу Пола Баскерка, The Fretboard Journal : Выпуск 14, лето 2009, страницы 102-111

Пол Лангедок и Крестон Ли: Вместе в одиночестве: Пол Лангедок и Крестон Ли связаны бизнесом построения соло, The Fretboard Journal : Выпуск 21, весна 2011, страницы 66-77

Поль Мелинг: Rêveries Parisiennes, Пол Мелинг всю жизнь занимался джазовым манушем , The Fretboard Journal : выпуск 20, зима 2010, страницы 90-99

Пол Рид Смит: Много заботы, много любви: Пол Рид Смит показывает, как создавать вдохновляющие гитары, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006, страницы 60-81

Осторожно! Баллады об убийствах и песни о бедствиях 1913-1938: Обзоры: наводнения, крушения и пожары, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008, страницы 115-118

Перри Бектел: Ставка на 14 ладов: Правдивая история Перри Бектеля и модели оркестра гитары, Журнал грифа : Выпуск 6, лето 2007, страницы 102-112

Пит Хаттлингер: Выживший: путешествие гитариста Пита Хаттлингера в Макгуайрс-Лендинг, The Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 34-43

Пит Росс: Призрак Миссисипи: Производитель банджо из тыквы Питер Росс озвучивает анонимное прошлое, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 18-25

Пит Сигер: На большие расстояния: Далекие возможности Пита Сигера и его пятиструнного банджо с длинной шеей, The Fretboard Journal : Выпуск 15, осень 2009, страницы 30-45

Пит Верник: Др.Банджо: новатор блюграсса, педагог и артист Пит Верник, The Fretboard Journal : выпуск 29, весна 2013 г., страницы 28-47

Довоенные гитары: Scratch and Dent: Изготовление новых старых гитар с довоенными гитарами, The Fretboard Journal : Выпуск 40, 2017, страницы 18-27

Radim Zenkl: Tramp Tuners: From Moravia to America (and back) with Radim Zenkl, The Fretboard Journal : Issue 4, Winter 2006, pages 32-43

Ральф Таунер: В центре внимания: оценка жанровой гитарной работы Ральфа Таунера, The Fretboard Journal : выпуск 39, 2017, страницы 34-53

Рэй Дэвис: Со стороны внутрь: Как раннее разочарование Рэя Дэвиса на грифе привело к одной из величайших рок-карьер сочинителей песен, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009 г., страницы 60-73

Рэй Джексон: Каждая сессия рассказывает историю: отчет о самой известной рок-игре на мандолине, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 116-120

Рэй Линдси: Mac Attack, Часть первая: Как я стал гитарным техником Линдси Бэкингем, The Fretboard Journal : Выпуск 3, осень 2006, страницы 10-12

р.К. Аллен: Дань уважения: знаменитый коллекционер, игрок и строитель из Южной Калифорнии скончался в возрасте 79 лет, The Fretboard Journal : выпуск 33, 2014, страницы 18-24

Редд Волькарт: Телепат: дорожное путешествие Редда Волькаерта, наполненное резкими звуками, Журнал Гриф : Выпуск 24, зима 2011, страницы 20-33

Redline Instruments: Jigs and Reels: удивительно доступные инструменты RedLine Стива Смита, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 18-25

Retrofret: Fairyland: Visit Retrofret, рай для старинных гончих в сердце индустриального Бруклина, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 102-111

Преподобный Гэри Дэвис: Давайте вместе: устная история от «сыновей» преподобного Гэри Дэвиса, The Fretboard Journal : Выпуск 33, 2014, страницы 26-35

Ричард Гувер: Тайная жизнь Отиса Б.Родео: Ричард Гувер и гитаристская компания Santa Cruz, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 52-65

Ричард Смит: Сельский джентльмен: Ричард Смит из Англии обретает счастье в Нэшвилле, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 12-20

Ричард Томпсон: Размышления об учителе: почтенный Ричард Томпсон делится своими мыслями о песнях, гитарах и войне, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008, страницы 56-67

Ричард Томпсон: Все еще и все: Ричард Томпсон смотрит вперед и назад, The Fretboard Journal : выпуск 35, 2015, страницы 18-30

Рик Бишоп: Strum und Drang: Мастер экспериментальной гитары Рик Бишоп, The Fretboard Journal : Выпуск 2, лето 2006 г., страницы 23-31

Рик Келли: Горячие и холодные циклы: кусочек старого Нью-Йорка живет в каждом творении Рика Келли, The Fretboard Journal : выпуск 15, осень 2009, страницы 82-91

Rick Shubb: Riding the Merry Go Round: Психоделическая сцена с капо-королем Риком Шуббом, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 80-85

Рик Тернер: Рождение 12: ранее не публиковавшиеся фотографии Гэри Сомберга с самых ранних дней Alembic, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 30-41

Рик Тернер: Мили для часто летающих пассажиров: лютера в чемодане, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009 г., страницы 18-19

Рик Тернер: Движение иглы: Ветеран-мастер Рик Тернер представляет свое последнее творение, акустическую гитару Compass Rose, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 74-87

Рики Скэггс: Чистый: Рики Скаггс возвращается домой, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 54-73

Робби Басё: Голос орла: кругосветное путешествие Робби Басё, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011, страницы 97-109

Роберт Тейлор: Обзоры: Сборщики с ручками: Blind Singer Joe’s Blues, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, стр. 120

Роб Мок: Шоу собак и пони: комбо Роба Мока с Трикси, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 16-21

Roger Bucknall: Industrial Evolution: замечательная команда людей и машин помогает создавать легендарные гитары Fylde Роджера Бакнелла, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 56-65

Roger McGuinn: Back to Earth: Несмотря на окольный путь к рок-славе, Роджер МакГуинн по-прежнему наслаждается твердой почвой фолк-музыки, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 27-35

Роланд и Кларенс Уайт: Отдавать и брать: Вместе и врозь, Роланд и его брат Кларенс оказали прочное влияние на блюграсс и кантри, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009, страницы 96-111

Рон Сол: The Little Plucker: тренажер Рона Сола для укулеле, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., страницы 10-11

Rosta Capek: Tramp Tuners: From Moravia to America (and back) with Radim Zenkl, The Fretboard Journal : Issue 4, Winter 2006, pages 32-43

Рой Кларк: Входное крыльцо: раскрывая глубокие музыкальные корни Роя Кларка, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 94-105

Рой Макалистер: Испытано и верно: если бы рабочий стол гитариста Роя Макалистера мог говорить, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 20-22

Руди Чиполла: St.Фрэнсис с мандолиной: размышления Руди Чиполлы, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 94-99

Ryan Guitars: Звезды Севера: праздник гитарного сообщества Миннесоты, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 83-99

Ry Cooder: Looking Beyond: Ry Cooder’s Globetrotting Ways, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 50-77

Сэм Буш и Тим О’Брайен: Социальный звонок: заглядывание на Сэма Буша и Тима О’Брайена, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 60-79

Сэм Рэддинг: Dream Weavers: неблагоприятный дебют Taylor Guitars, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 10-12

Santa Cruz Guitar Company: Тайная жизнь Отиса Б.Родео: Ричард Гувер и гитаристская компания Santa Cruz, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 52-65

Скотт Ло: Реликвия: воображаемая гитара, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 30-33

Скотт Уокер: Искусство выдерживать: Скотт Уокер занимает свою собственную нишу, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012 , страниц 68-81

Моряк Дэн: Обзоры: Island Way, The Fretboard Journal : Выпуск 7, осень 2007, страницы 116-118

Сэми Мозли: Мосрайт навсегда: упаковка одной из последних гитар Сэми Мозли, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009 г., страницы 28-31

Sergei de Jonge: Dreaming the Build: My time on the farm with Sergei de Jonge, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 44-53

Sinier De Ridder: Repairing the Rare: муж и жена Sinier De Ridder восстанавливают резной антиквариат, The Fretboard Journal : выпуск 35, 2015, страницы 108-122

Скип Хеллер: Трансплантация органов: эволюция Скипа Хеллера в мир джаза, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005, страницы 6-9

Skip Simmons: Tube Driven: Пропустите мир старинного стекла и стали Симмонса, The Fretboard Journal : выпуск 33, 2014, страницы 36-51

Гитара Solo Novo: Эстетика Archtop: Рождение гитары Kim Walker Solo Novo, The Fretboard Journal : Выпуск 9, весна 2008 г., страницы 43-53

Стефан Гроссман: Сэндвич с пустяком: обед со Стефаном Гроссманом и Эль МакМином, The Fretboard Journal : Выпуск 10, лето 2008, страницы 6-7

Стефан Собелл: Голос мастера: что заставляет инструменты Стефана Собелла петь, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 63-75

Стивен Брутон: Кубик Рубика: множество вариантов пикера Стивена Брутона, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008 г., 91-97

Стереообзоры: Двойное видение: банджо, гитары и мандолины в стереовиде конца 19-го, ^-го,-го века, The Fretboard Journal : выпуск 8, зима 2007, страницы 109-114

Стив Андерсен: Log Jam: производитель гитар находит сырье у источника, The Fretboard Journal : выпуск 36, 2016, страницы 20-32

Стив Карр: Вакуумная упаковка: титан с ламповым усилителем Стив Карр приносит силу людям, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 17-25

Стив Кроппер: Тайна и манеры: Стив Кроппер и звук Стакса, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 44-59

Стив Ганн: Letting It Go: певец, автор песен и гитарист Стив Ганн находит свой путь, The Fretboard Journal : выпуск 40, 2017, страницы 96-101

Стив Кригер: 000-401K: Поиск ценности в проекте восстановления Мартина, The Fretboard Journal : Выпуск 15, осень 2009, страницы 22-29

Стив Малкмус: Стив Малкмус: Срок службы триггерных порезов, трещин и сбросов грифа, Журнал грифа : Выпуск 2, лето 2006 г., страницы 6-7

Steve Martin: Slight of Hand: Стив Мартин размышляет о 50-летнем возрасте как банджоист. The Fretboard Journal : выпуск 30, лето 2013 г., страницы 42-61

Стив Смит: Jigs and Reels: человек, стоящий за удивительно доступными инструментами RedLine, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 18-25

Стив Сподарик: Parlor Games: Стив Сподарик и очарование гитары с маленьким корпусом, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 34-39

Sugar Hill Records: Девиантное поведение: Sugar Hill Records: ретроспектива, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 114-116

Sullivan Banjo: Rim Shot: старые полы создают новые тона в Sullivan Banjo, The Fretboard Journal : выпуск 7, осень 2007, страницы 7-8

Сьюзан Тедески: Религия старых времен: оценка блюза Сьюзан Тедески, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012 г., страницы 84-95

Сильвен Люк: обзора, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006, страницы 89-90

Sylvan Wells: Egg Man in Beantown: Sylvan Wells и возрождение гитар Bay State, The Fretboard Journal : выпуск 19, осень 2010, страницы 112-116

Тадж-Махал: От корней до плодов: Тадж-Махал и главный язык мира, The Fretboard Journal : выпуск 4, весна 2007 г., страницы 54-61

Taylor Guitars: Dream Weavers: неблагоприятный дебют Taylor Guitars, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 10-12

Тед Маккарти: По вторникам с Тедом: Пол Рид Смит встречает пионера электрогитары, The Fretboard Journal : выпуск 10, лето 2008, страницы 8-9

Фестиваль теллуридного мятлика: Чувство свободы: легендарному фестивалю теллуридного мятлика исполняется 35 лет, Журнал Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 38-55

Терсиу Рибейро: Приветствие из Рио: Знакомьтесь, бразильский мастер-строитель Терсиу Рибейро, The Fretboard Journal : Выпуск 16, зима 2009, стр. 118

Tiki: Island Memories: Что случилось с гитарой тики-бара?, The Fretboard Journal : Выпуск 7, осень 2007, страницы 12-14

Король Тики: Болтовня идола: хорошо быть королем, Журнал «Гриф» : выпуск 16, зима 2009 г., страницы 16-18

Тим Луранк: Заявление: рождение Р.Taylor Guitars, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 20-26

TJ Thompson: The Guitar Whisperer: Если TJ Thompson не может исправить это, никто не сможет, The Fretboard Journal : выпуск 26, лето 2012, страницы 46-67

TK Smith: Desert Oasis: современные гитары TK Smith середины века, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 32-49

The Tone Poets: Поэт-лауреат: Дэвид Грисман сочиняет новый стих для двух классических произведений, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005, страницы 30-35

Том Андерсон: Роддер: безумное хобби Тома Андерсона, The Fretboard Journal : выпуск 17, весна 2010, страницы 74-85

Tom Brosseau: Рождение продавца: Tom Brosseau из Северной Дакоты, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., страницы 6-7

Том Крэндалл и Уолтер Картер: Взрыв: Том Крэндалл и Уолтер Картер разбивают свои старинные палатки, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 16-31

Том Дойл: Guitar Tech: Как Том Дойл стал правой рукой Лес Пола, The Fretboard Journal : Выпуск 29, весна 2013, страницы 82-94

Томми Рамон: Томми — старожил: Рамон идет блюграсс с дядей Монком, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 12-13

Тони Райс: 58957: Тони Райс и его Святой Грааль Мартин D-28, The Fretboard Journal : Выпуск 5, весна 2007 г., страницы 88-100

Тони Тришка: Великий антидепрессант: Тони Тришка и его энергичный пятиструнный аппарат, The Fretboard Journal : выпуск 11, осень 2008, страницы 39-47

Тревор Хили: Wish Upon a Star: Тревор Хили воссоздает 100-летнюю гитару Bay State, The Fretboard Journal : выпуск 36, 2016, страницы 6-10

Тут Тейлор: Посреди вещей: Тут Тейлор, сердце сообщества Добро, The Fretboard Journal : Выпуск 21, весна 2011, страницы 94-108

Victoria Amp Co.: Boss Tweed: Victoria Amp Co. Марка Байера привносит винтажные тона в современный мир, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., стр. 22-30

Винс Гилл: Banner Day: Винс Гилл возвращает заветный Гибсон его бывшему владельцу, The Fretboard Journal : Выпуск 34, 2015, страницы 14-22

Винс Гилл: Музыкант, которым он всегда был: суперзвезда кантри не притупила выбор гитары Винса Гилла, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008, страницы 87-99

Vintage Guitars: Коллекционное издание: With Strings Attached: The Art and Beauty of Vintage Guitars, The Fretboard Journal : Issue 12, Winter 2008, pages 112-114

Винтажные струнные пакеты: Это струнная вещь: Винтажные струнные пакеты начала 20-го ^{-х годов} века, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006, страницы 56-67

Уэйд Майнер: Дедушка Блюграсса: первые 99 лет Уэйда Майнера, The Fretboard Journal : Выпуск 3, осень 2006 г., страницы 68-75

Фестиваль гитары от стены до стены: Wallflowers: Фестиваль гитары от стены до стены, The Fretboard Journal : выпуск 15, осень 2009, страницы 108-116

Уолтер Картер и Том Крэндалл: Взрыв: Том Крэндалл и Уолтер Картер ставят свои старинные палатки, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 16-31

Уоррен Хейнс: Оригинальный рецепт: Уоррен Хейнс придумывает его по ходу дела, The Fretboard Journal : выпуск 14, лето 2009, страницы 72-89

Washburn and Lyon & Healy: голоса в хоре: малоизвестное наследие Lyon & Healy и Washburn, Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 96-118

Уэйн Гейли: Boondocked: Одинокая судьба Fender 2000 Уэйна Гейли, The Fretboard Journal : Выпуск 39, 2017, страницы 88-97

Уэйн Хендерсон: Гитара Клэптона: наблюдая, как Уэйн Хендерсон создает идеальный инструмент, The Fretboard Journal : выпуск 5, весна 2007, страницы 116-120

Уэйн Хендерсон: Whittling Away: В наши дни мастер Уэйн Хендерсон немного быстрее продвигается по своему эксклюзивному списку работ, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 17-23

Weber Instruments: Следующая глава: Weber Instruments находит новую усадьбу, The Fretboard Journal : выпуск 33, 2014, страницы 74-91

Wilco: Лофт: Внутри секретного убежища Уилко, The Fretboard Journal : выпуск 15, осень 2009 г., страницы 46-63

Уильям «Грит» Ласкин: Полный текст: Гитарное искусство Уильяма «Грит» Ласкин, The Fretboard Journal : Выпуск 34, 2015, страницы 68-79

Захари Векс: Каждая уловка в сумке: знакомьтесь с Закари Вексом, безумным ученым из Stomp Box, The Fretboard Journal : выпуск 6, лето 2007, страницы 35-43

Инструментов:

1924 Лютня тенора Гибсона: The Other Loar, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 16-18

Гибсон 1930-х годов 335: Опережая свое время: странное открытие 1930-х годов Гибсон 335, The Fretboard Journal : Выпуск 30, лето 2013, страницы 6-10

1934 Gibson Roy Smeck Guitars: Модификация винтажных гитар обычно не рекомендуется, но не здесь, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, стр. 108

1937 Мартин 0-17 часов: Что бы вы сделали? Приключения в торговле струнами, The Fretboard Journal : Выпуск 4, зима 2006 г., страницы 24-29

1937 г.Уошбернс: Triple Play: три последовательных 1937 года, Tonk Bros. Washburns, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 12-14

Переходная модель гитары Selmer 1938 года: «Находка с блошиного рынка», The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011 г., стр. 112

1966 Бразильский палисандр D-28: Как они могли? История осквернения и искупления, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 15-17

2004 Collings 16 ”Archtop и Collings MF5V : Matching Coats, The Fretboard Journal : выпуск 23, осень 2011, страницы 110-112

2008 Michihiro Matsuda Harp Guitar: Sketch Artist, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 110-111

Aero-Uke: Крылья и молитва: возрождение Aero-Uke, Журнал Fretboard : выпуск 8, зима 2007 г., страницы 6-7

Мартин D-28 Боба Шейна 1958 года: Народный герой, The Fretboard Journal : выпуск 21, весна 2011, страницы 12-14

Les Paul Бадди Холли: Гитара, которая изменила ход музыкальной истории тем, что на ней не играли, The Fretboard Journal : выпуск 38, 2017, страницы 31-38

Charles Sawtelle’s Martin D-28 1937 года: The Fretboard Journal : выпуск 20, зима 2010 г., страницы 60-61

Казино Epiphone: Украшенный солдат: Дэнни Мишель проводит нас через свое закаленное в боях казино Epiphone, The Fretboard Journal : выпуск 32, зима 2013, страницы 6-10

Fender Jazzmaster: Shape Shifter: Социальная история Fender’s Jazzmaster, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 84-97

The F: Тайная жизнь Отиса Б.Родео: Ричард Гувер и гитаристская компания Santa Cruz, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 52-65

The FS: Тайная жизнь Отиса Б. Родео: Ричард Гувер и гитаристская компания Santa Cruz, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005, страницы 52-65

Gibson Army-Navy GY Специальный «кошачий глаз»: Необычный подозреваемый: мифически редкий Gibson Army-Navy GY Special «кошачий глаз», The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 8-10

Gibson Explorer Bass: Esoteric Explorer: проблеск одного из самых редких басов на планете, The Fretboard Journal : выпуск 33, 2014, страницы 6-14

The Gibson F-5: The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., стр. 33

The Gibson F-5: Keeper: мандолина, которая не ускользнула, The Fretboard Journal : выпуск 12, осень 2008, страницы 14-15

Мандолина Gibson F-5: Небеса мандолины: отчет с фестиваля Loar Fest West 2006, The Fretboard Journal : выпуск 3, осень 2006 г., стр. 8-9

Gibson Lap Steel: Lap Steel, которого никогда не было: обнаружено еще одно загадочное творение Гибсона, The Fretboard Journal : выпуск 25, весна 2012, страницы 114-118

Gibson Lloyd Loar Mandolin: Fever Pitch: фанатик мандолины воссоздает Gibson Lloyd Loar, The Fretboard Journal : выпуск 13, весна 2009, страницы 6-12

The Gong Show: Pickin ’and Winnin’: банджо, играющее на The Gong Show, The Gong Show Journal : выпуск 3, зима 2006 г., страницы 10-12

The Gretsch Duo Jet Tenor: Tenor Guitar Tales: беседа с Неко Кейс о магии (и опасностях) ее четырехструнных друзей, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006, страницы 32-40

The Gryphon Banjo: Рождение старинного инструмента, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 36-41

The H: Тайная жизнь Отиса Б.Родео: Ричард Гувер и гитаристская компания Santa Cruz, The Fretboard Journal : выпуск 1, зима 2005 г., страницы 52-65

Герман Хаузер: Потерянное и найденное: безумная прогулка по Сеговии Хаузер, The Fretboard Journal : выпуск 4, зима 2006 г., страницы 6-9

Штора Мартина 1937 года Джона Арнольда 00-18: All in the Family: Мартин 1937 года, имитируемый Джоном Арнольдом, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, стр. 110

Модель Тернера 1979 года Линдси Бэкингем 1: Rode Hard, The Fretboard Journal : выпуск 24, зима 2011 г., страницы 8-9

Банджо «Маргарет Бот»: The Fretboard Journal : выпуск 20, зима 2010, страницы 88-89

Мартин 14-ладовый оркестр Модель: 14-ладовая ставка: подлинная история Перри Бектеля и модели оркестра гитары, Журнал грифа : выпуск 6, лето 2007, страницы 102-112

Martin D-18 Authentic: Проверено и верно: полностью подлинная история Martin D-18 Authentic, The Fretboard Journal : Выпуск 13, весна 2009 г., страницы 74-83

Мартин D-28: «Ты можешь называть меня Фред:» Легенда о К.Ф. Мартин III (1894-1986), The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., страницы 69-76

Мартин D-28 58957: 58957: Тони Райс и его Святой Грааль Мартин D-28, The Fretboard Journal : Выпуск 5, весна 2007 г., страницы 88-100

The Martin OM: The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., стр. 33

Морис Шевалье и Мистингетт банджо: Валентина? Морис Морис Шевалье, Мистингет и таинственные банджо, The Fretboard Journal : выпуск 31, осень 2013, страницы 6-10

Миллионный Мартин: Shell Games: Ларри Робинсон и миллионный Мартин, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 11-14

Phil Crump B-I Bouzouki: Невостребованный багаж: поиск редких бузуки в самых неподходящих местах, The Fretboard Journal : выпуск 28, зима 2012, страницы 6-10

Sabicas ’1951 Barbero Guitar: Flamenco’s Finest, The Fretboard Journal : выпуск 27, осень 2012, страницы 6-16

Six String Nation Guitar: Maple Leaf Rag: История канадской Six String Nation Guitar, The Fretboard Journal : Выпуск 6, лето 2007, страницы 8-11

Statman’s 1923 A-2Z Mandolin: The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006 г., стр. 17

12-струнная Stella: Bourgeois Blues: воссоздание 12-струнной Stella Leadbelly, The Fretboard Journal : выпуск 9, весна 2008 г., страницы 16-20

Taylor Baritone 8: Sparkle: интригующий восьмиструнный баритон Тейлора, The Fretboard Journal : выпуск 18, лето 2010, страницы 112-116

Тенор-гитары: Интервью с Чарли Лувеном, The Fretboard Journal : Выпуск 1, зима 2005 г., страницы 24-29

TogaMan GuitarViol: Bowed, Not Broken: Джонатон Уилсон и TogaMan GuitarViol, The Fretboard Journal : Выпуск 10, лето 2008, страницы 112-114

Верхняя часть цилиндра Vega: Цилиндрический файл: Шелли Парк воскрешает классику от Vega, The Fretboard Journal : выпуск 2, лето 2006, страницы 8-9

Гавайская гитара Уильяма Стедмана: Jailhouse Hula, The Fretboard Journal : выпуск 22, лето 2011, страницы 20-21

Winchester Turbo Diddley: Свадьба с дробовиком: создание Winchester Turbo Diddley, The Fretboard Journal : выпуск 12, зима 2008, страницы 6-8

Подпишитесь на печатный журнал Fretboard Journal и начните получать свои копии Journal .

Безопасность пациентов — Доза облучения при рентгеновских и компьютерных исследованиях

Что такое рентген и для чего он нужен?

Рентгеновские лучи — это форма энергии, подобная свету и радиоволнам. Рентгеновские лучи еще называют радиацией. В отличие от световых волн, у рентгеновских лучей достаточно энергии, чтобы пройти через ваше тело. Когда излучение проходит через ваше тело, оно по-разному проходит через кости, ткани и органы, что позволяет рентгенологу создавать их изображения.Радиолог — это специально обученный врач, который может исследовать эти изображения на мониторе. Монитор похож на дисплей компьютера. Это позволяет рентгенологу видеть очень мельчайшие детали структур вашего тела.

рентгеновских обследований предоставляют ценную информацию о вашем здоровье и помогают вашему врачу поставить точный диагноз. Рентгеновские лучи иногда используются для размещения трубок или других устройств в организме или для лечения болезней.

Для получения дополнительной информации см. «Безопасность в процедурах рентгеновской, интервенционной радиологии и ядерной медицины».

вверх страницы

Измеритель дозы излучения

Когда излучение проходит через тело, часть его поглощается. Рентгеновские лучи, которые не поглощаются, используются для создания изображения. Поглощенное количество влияет на дозу облучения пациента. Радиация, проходящая через тело, не проходит. Научной единицей измерения дозы облучения всего тела, называемой «эффективной дозой», является миллизиверт (мЗв). Другие единицы измерения дозы излучения включают рад, бэр, рентген, зиверт и серый.

Врачи используют «эффективную дозу», когда говорят о риске облучения всего тела. Риск относится к возможным побочным эффектам, таким как вероятность развития рака в более позднем возрасте. Эффективная доза учитывает, насколько чувствительны различные ткани к радиации. Если у вас есть рентгеновское обследование, которое включает ткани или органы, более чувствительные к радиации, ваша эффективная доза будет выше. Эффективная доза позволяет врачу оценить ваш риск и сравнить его с обычными повседневными источниками воздействия, такими как естественный фоновый радиационный фон.

вверх страницы

Естественная «фоновая» радиация

Мы постоянно подвергаемся воздействию естественных источников радиации. По последним оценкам, средний человек в США получает эффективную дозу около 3 мЗв в год от естественной радиации, включая космическое излучение из космоса. Эти естественные «фоновые дозы» варьируются в зависимости от того, где вы живете.

Люди, живущие на больших высотах, таких как Колорадо или Нью-Мексико, получают около 1.На 5 мЗв больше в год, чем у людей, живущих на уровне моря. При полете по маршруту от побережья до побережья в оба конца из-за воздействия космических лучей происходит около 0,03 мЗв. Самый большой источник радиационного фона — это радон в наших домах (около 2 мЗв в год). Как и другие источники фонового излучения, количество облучения радоном широко варьируется в зависимости от того, где вы живете.

Проще говоря, количество радиации от одного рентгеновского снимка грудной клетки взрослого (0,1 мЗв) примерно такое же, как 10 дней естественного радиационного фона, которому мы все подвергаемся как часть нашей повседневной жизни.

вверх страницы

Эффективная доза облучения взрослых

Вот некоторые приблизительные сравнения радиационного фона и эффективной дозы облучения у взрослых для нескольких радиологических процедур, описанных на этом веб-сайте.

Примечание для педиатрических пациентов : Педиатрические пациенты различаются по размеру. Дозы для педиатрических пациентов будут значительно отличаться от доз для взрослых. Для получения дополнительной информации о радиационной безопасности в педиатрической визуализации посетите сайт http: // www.imagegently.org/Roles-What-can-I-do/Parent .

Обратите внимание, что эта таблица пытается упростить очень сложную тему. Если у вас есть вопросы о радиационных рисках, спросите своего медицинского физика и / или радиолога об этих рисках и преимуществах вашей процедуры медицинской визуализации.

* Эффективные дозы являются типичными значениями для взрослого человека среднего роста. Фактические дозы могут существенно различаться.

В отчете 103 Международной комиссии по радиологической защите (МКРЗ) говорится: «Использование эффективной дозы для оценки облучения пациентов имеет серьезные ограничения, которые необходимо учитывать при количественной оценке медицинского облучения.»В отчете предупреждается, что не все ткани, подвергающиеся облучению, получают одинаковое распределение радиационных характеристик. Другими словами, эффективная доза не всегда одинакова для всех. Она может варьироваться в зависимости от роста и веса человека, оборудования и способа проведения процедуры. выполняется, а область тела подвергается облучению.

Для получения дополнительной информации см. Это свободно доступное резюме отчета 184 Национального совета по радиационной защите и измерениям (NCRP).

вверх страницы

Выгода против риска

Риск, связанный с процедурами медицинской визуализации, относится к возможным долгосрочным или краткосрочным побочным эффектам.Большинство процедур визуализации имеют относительно низкий риск. Больницы и центры визуализации применяют принципы ALARA (разумно достижимый низкий уровень). Это означает, что они прилагают все усилия для снижения радиационного риска. Важно помнить, что человек подвергается риску, если врач не может точно диагностировать болезнь или травму. Таким образом, можно сказать, что польза от медицинской визуализации, которая является точным диагнозом, больше, чем небольшой риск, связанный с ее использованием. Поговорите со своим врачом или радиологом о любых опасениях, которые могут у вас возникнуть в связи с риском процедуры.

Дополнительную информацию о преимуществах и рисках см. В разделе «Преимущества и риски».

вверх страницы

Эта страница была просмотрена 20 марта 2019 г.

Белая лада х рей: Белая Лада Х Рей — обзор, фото, видео

ГОТОВЫЕ АВТОЭМАЛИ LADA

Новая Lada в Белой Церкви. Цены и характеристики новых моделей Lada

Какую Lada выбрать?

Преимущества машин от «АвтоВАЗ»

Преимущества работы с нами

Чехлы на Лада Х Рей Кросс, экокожа, ПОЧИН

В Краснодаре объявили в розыск предполагаемого участника перестрелки на белой Lada Priora

Лада гранта седан белая фото

Фото новой Лада Гранта лифтбек

Фото Лады Гранты

Почему так случилось?

Цвета новой Лада Гранта (2018-2019)

Белый “Белое облако” (240)

Черный “Пантера” (672)

Красный “Сердолик” (195)

Ярко-синий “Голубая планета” (418)

Серебристый “Рислинг” (610)

Серебристо-серый “Техно” (618)

Серебристо-темно-серый “Борнео” (633)

Золотисто-коричневый “Кориандр” (790)

Обычно используемые флуорофоры FRET способствуют коллапсу неупорядоченного белка

Значение

Abstract

Результаты

Маркировка флуорофора вызывает коллапс.

Размеры ПЭГ, полученные с помощью SAXS, не зависят от концентрации полимера.

Проверка гипотезы о разделении гетерополимеров.

Измерение отклонений от идеальности в гетерополимерах.

Обсуждение

Материалы и методы

Примечание добавлено в доказательство.

Благодарности

Сноски

Одномолекулярный FRET и конформационный анализ бета-аррестина-1 посредством расширения генетического кода и реакции Se-click

Визуализация синдрома Конна

Какое сканирование лучше всего для опухоли надпочечников и синдрома Конна?

Отслеживание промежуточных продуктов Са2 + АТФазы в реальном времени с помощью рассеяния рентгеновских лучей в растворе

Abstract

ВВЕДЕНИЕ

РЕЗУЛЬТАТЫ

Мониторинг динамики реакции SERCA в реальном времени

Сравнение переходных состояний TR-XSS с промежуточными соединениями кристаллической структуры

Моделирование динамики переходов

Моделирование естественного окружения и локализации домена в предымпульсе [Ca

Структурная интерпретация моделей TR-XSS промежуточного и позднего состояния

ОБСУЖДЕНИЕ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Саркоплазматический ретикулум Ca

Сбор данных TR-XSS

Обработка данных

Анализ SVD

Спектральное разложение

Структурное уточнение

Целевое моделирование MD

Мембранные моделирование MD

Статистический анализ

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Макромолекулярная кристаллография с временным разрешением на импульсных источниках рентгеновского излучения

Печатный индекс | Fretboard Journal

Безопасность пациентов — Доза облучения при рентгеновских и компьютерных исследованиях

Что такое рентген и для чего он нужен?

Измеритель дозы излучения

Естественная «фоновая» радиация

Эффективная доза облучения взрослых

Выгода против риска

Добавить комментарий Отменить ответ