71 регион это какая область: 71 регион — это какой город России

Государственное учреждение — Тульское региональное отделение Фонда социального страхования Российской Федерации

Подписка на рассылку новостей	Объявления ИЗМЕНЕНИЕ РЕКВИЗИТОВ С 1 ЯНВАРЯ 2021 ГОДА С 01.01.2021 г. страховые взносы, пени,  штрафы по обязательному социальному страхованию от несчастных случаев на производстве и профессиональных заболеваний, денежные взыскания, возмещение ущерба, административные штрафы, стоимость страхового года для лиц, добровольно вступивших в отношения по обязательному социальному страхованию на случай временной нетрудоспособности и в связи с материнством, возврат расходов прошлых лет, штрафные санкции по государственным контрактам, подлежат зачислению по следующим реквизитам: 31.05.2021 КАК УДЕРЖИВАЮТСЯ АЛИМЕНТЫ С ПОСОБИЙ ПО ВРЕМЕННОЙ НЕТРУДОСПОСОБНОСТИ С 2021 ГОДА? Удержание алиментов из исчисленного пособия по временной нетрудоспособности застрахованного лица — должника осуществляется Тульским отделением Фонда социального страхования РФ с четвертого дня временной нетрудоспособности, а за первые три дня временной нетрудоспособности и с заработной платы удержание производит работодатель. 25.05.2021 Уважаемые работодатели! Страхователь в 3-дневный срок обязан уведомить Тульское региональное отделение  Фонда социального страхования РФ о прекращении права застрахованного лица на получение ежемесячного пособия по уходу за ребенком в случае: 13.05.2021 ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ !     С 1 июля 2021 года пособия от Тульского регионального отделения Фонда социального страхования работающим гражданам будут выплачиваться только на национальную платёжную карту «Мир»! Переход на карту отечественной платежной системы «Мир» при перечислении ряда социальных выплат перенесён с 1 октября 2020 года на 1 июля 2021 года. На карту национальной платёжной системы, согласно законодательству, будут переводиться следующие выплаты от Тульского регионального отделения: 11.05.2021 Уважаемые работодатели! Оплатить взносы в ФСС необходимо до 15 мая! Тульское региональное отделение Фонда социального страхования РФ напоминает, что 15 мая истекает срок уплаты взносов ФСС РФ по обязательному страхованию от несчастных случаев на производстве и профессиональных заболеваний за апрель 2021 года. 06.05.2021 Прием граждан в приемной Общественной палаты Куркинского района. 11 мая 2021 года с 11.00 до 14.00 Управляющий Государственным учреждением -  Тульским региональным отделением Фонда социального страхования РФ Елена Владимировна Агаева проведет личный прием граждан по вопросам деятельности Тульского регионального отделения Фонда социального страхования Российской Федерации в приемной Общественной палаты Куркинского района по адресу: рп Куркино, ул. Театральная д. 22, каб. № 312. Также, в рамках посещения Куркинского района у Елена Агаевой запланирована встреча с главой муниципального образования. К списку » Новости К списку »
Адрес: 300041, г.Тула, ул.Колетвинова, д.6
© 2001-2021 Государственное учреждение — Тульское региональное отделение Фонда социального страхования Российской Федерации

Тульская область — 71 регион: каталог организаций

Действует ООО ГИППО ТРАНС

Перевозка пассажиров и грузов

Грузовые перевозки

Генеральный Директор:Жаворонкова Екатерина Николаевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЕФРЕМОВСКИЙ ГОРОД ЕФРЕМОВ УЛИЦА ЗАВОДСКАЯ 1

Дата регистрации:25. 02.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7113065467

ОГРН:1057101780812

Действует ООО ИТАН

Оптовая торговля

Оптовая торговля прочими товарами

Директор:Сидельников Игорь Петрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ ЛЕНИНА ДОМ 131 ПОМЕЩЕНИЕ Х

Дата регистрации:01.03.2005

Уставной капитал:500 000 ₽

ИНН:7104047327

ОГРН:1057100331221

Действует ООО АШ2О

Почта и курьеры

Курьерская доставка

Директор:Дьяченко Сергей Георгиевич

Юридический адрес:ОБЛ. ТУЛЬСКАЯ Г. Тула УЛ. ЛУНАЧАРСКОГО Д. 17 К. 5 17 (ПОМЕЩ.3, ЭТАЖ ПОДВАЛ)

Дата регистрации:01.03.2005

Уставной капитал:50 000 ₽

ИНН:7104047302

ОГРН:1057100331200

Действует ООО СКЦ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Директор:Маклаков Сергей Михайлович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОЕЗД ХАНИНСКИЙ 8

Дата регистрации:02. 03.2005

Уставной капитал:11 000 ₽

ИНН:7104047334

ОГРН:1057100331287

Действует АО СОЮЗ

Производство

Производство металлических изделий и конструкций

Производство строительных металлических изделий

Генеральный Директор:Чепурной Григорий Афанасьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА СКУРАТОВСКАЯ 108

Дата регистрации:03.03.2005

Уставной капитал:55 000 000 ₽

ИНН:7107087529

ОГРН:1057101138687

Действует ООО ДЕНТАМЕД

Здравоохранение и медицина

Медицинская и стоматологическая практика

Директор:Луговая Валентина Александровна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД НОВОМОСКОВСК УЛИЦА КИРОВА/КАЛИНИНА 9/25

Дата регистрации:03.03.2005

Уставной капитал:12 000 ₽

ИНН:7116127841

ОГРН:1057101587322

Действует ООО НОВЫЙ АРБАТ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Директор:Татаринов Игорь Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЯСНОГОРСКИЙ ГОРОД ЯСНОГОРСК ПЕРЕУЛОК КОМСОМОЛЬСКИЙ ДОМ 2

Дата регистрации:03. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7136025580

ОГРН:1057102381236

Действует ООО ПРОФЕССИОНАЛ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Конкурсный Управляющий:Лабзин Константин Витальевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН КИРЕЕВСКИЙ ГОРОД БОЛОХОВО УЛИЦА ПЕРВОМАЙСКАЯ 13

Дата регистрации:03.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064470

ОГРН:1057100791362

Действует ООО СТАРАЯ ГАТЬ

Производство

Производство металлических изделий и конструкций

Производство металлических изделий

Директор:Винюков Павел Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН КИМОВСКИЙ ГОРОД КИМОВСК УЛИЦА КОММУНИСТИЧЕСКАЯ ДОМ 3В

Дата регистрации:03.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7115020207

ОГРН:1057102580501

Действует ООО ТЕПЛО-ГАЗ СЕРВИС

Строительство

Организация строительных работ

Монтажные работы

Директор:Мухин Сергей Александрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН НОВОМОСКОВСКИЙ ГОРОД НОВОМОСКОВСК УЛИЦА КОММУНИСТИЧЕСКАЯ 31

Дата регистрации:04. 03.2005

Уставной капитал:35 799 ₽

ИНН:7116127859

ОГРН:1057101587388

Действует ООО КИБЕРНЕТИКА+

Розничная торговля

Розничная торговля оборудованием и электроникой

Розничная торговля компьютерами и периферией

Директор:Долгов Сергей Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ КРАСНОАРМЕЙСКИЙ 7 ПОМЕЩЕНИЕ 118

Дата регистрации:04.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064494

ОГРН:1057100791472

Действует ООО ЭНЕРГИЯ-ТЭКС

Услуги для бизнеса

Склады и логистика

Транспортная логистика

Генеральный Директор:Кузнецова Наталия Юрьевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МАКАРЕНКО ДОМ 19 КОРПУС 2 ОФИС 3

Дата регистрации:10.03.2005

Уставной капитал:50 000 ₽

ИНН:7104047398

ОГРН:1057100332354

Действует ООО ОДОЕВСКИЕ САДЫ

Сельское хозяйство

Садоводство

Директор:Хорошилов Виктор Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ОДОЕВСКИЙ РАБОЧИЙ ПОСЕЛОК ОДОЕВ УЛИЦА 50 ЛЕТ ОКТЯБРЯ 59 — —

Дата регистрации:10. 03.2005

Уставной капитал:11 000 ₽

ИНН:7131025308

ОГРН:1057103180837

Действует ООО ТОРГОВЫЙ ДОМ ТЯЖПРОМАРМАТУРА

Оптовая торговля

Оптовая торговля прочими товарами

Оптовая торговля водопроводным и отопительным оборудованием

Генеральный Директор:Сатанивский Денис Игоревич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПОСЕЛОК ХОМЯКОВО УЛИЦА ХОМЯКОВСКАЯ 26 — ОФИС 204

Дата регистрации:10.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064550

ОГРН:1057100791945

Действует ООО ВНЕШСТРОЙ-КОММУНСЕРВИС

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Генеральный Директор:Ельтищев Сергей Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МАРАТА 35 А 1

Дата регистрации:14.03.2005

Уставной капитал:50 000 ₽

ИНН:7105034514

ОГРН:1057100571813

Действует ООО СТРОИТЕЛЬНАЯ КОМПАНИЯ АКВАТЭК

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Директор:Семенищева Людмила Филипповна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПОСЕЛОК РУДАКОВО УЛИЦА ЛЮЛИНА 6 А

Дата регистрации:14. 03.2005

Уставной капитал:50 000 ₽

ИНН:7107087663

ОГРН:1057101139920

Действует ООО АДС

Строительство

Строительство сооружений

Строительство инженерных коммуникаций

ДИРЕКТОР:ВОЛЧКОВ АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЯСНОГОРСКИЙ ДЕРЕВНЯ ВОЛОВНИКОВО УЛИЦА МИРА 38

Дата регистрации:14.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7136025622

ОГРН:1057102381379

Действует САДОВОДЧЕСКОЕ НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО №1 ПРИ В/Ч 55599

Сельское хозяйство

Овощеводство

Председатель Правления:Куршев Василий Алексеевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЛЕНИНСКИЙ ПОСЕЛОК ТЕСНИЦКИЙ

Дата регистрации:15.03.2005

Уставной капитал:–

ИНН:7130025633

ОГРН:1057102381380

Действует ООО СЕВЕР

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Генеральный Директор:Мустафин Талгат Аскатович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА Н. РУДНЕВА 56 Г

Дата регистрации:16.03.2005

Уставной капитал:30 000 ₽

ИНН:7107087705

ОГРН:1057101140535

Действует ООО ЭТНОС

Оптовая торговля

Оптовая торговля прочими товарами

Директор:Васильев Сергей Анатольевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА СМИДОВИЧ ДОМ 12Б ОФИС 4

Дата регистрации:17.03.2005

Уставной капитал:410 000 ₽

ИНН:7105034546

ОГРН:1057100572077

Действует ООО АВТО-АКЦЕНТ

Торговля автомобилями и автосервис

Торговля автотранспортными средствами

Оптовая торговля легковыми автомобилями

Директор:Кочимар Роман Лазаревич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПЕРЕУЛОК ШЕВЧЕНКО ДОМ 6 А КВАРТИРА 11

Дата регистрации:17.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064600

ОГРН:1057100792363

Действует ООО СПУТНИК

Спорт, отдых и развлечения

Туризм

Туристические агентства и туроператоры

Генеральный Директор:Шершунова Наталья Викторовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПОСЕЛОК ПЕРВОМАЙСКИЙ УЛИЦА ПИОНЕРСКАЯ 15

Дата регистрации:17. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064649

ОГРН:1057100792462

Действует ООО ЧАСТНОЕ ОХРАННОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ ЖЕЛДОР-СПЕЦОХРАНА

Детективная и охранная деятельность

Частные охранные службы

Генеральный Директор:Рожков Андрей Сергеевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ОКТЯБРЬСКАЯ ДОМ 37 ОФИС 31

Дата регистрации:18.03.2005

Уставной капитал:250 000 ₽

ИНН:7107087790

ОГРН:1057101140920

Действует СОДНТ САДОВОДЧЕСКОЕ НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО СОЮЗ

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление нежилым недвижимым имуществом

Председатель Правления:Богачев Николай Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЗАОКСКИЙ САДОВОЕ НЕКОМ-Е ТОВАРИЩЕСТВО СОЮЗ

Дата регистрации:18.03.2005

Уставной капитал:–

ИНН:7126015752

ОГРН:1057101981640

Действует ООО ДЕНТА

Здравоохранение и медицина

Медицинская и стоматологическая практика

Директор:Зубенко Анатолий Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН АЛЕКСИНСКИЙ ГОРОД АЛЕКСИН УЛИЦА СЕВЕРНАЯ ДОМ 15 ПОМЕЩЕНИЕ 5

Дата регистрации:19. 03.2005

Уставной капитал:725 000 ₽

ИНН:7111015044

ОГРН:1057101981672

Действует ООО ГАЗЭНЕРГОМОНТАЖ

Строительство

Строительство сооружений

Строительство инженерных коммуникаций

Директор:ДЯТЛОВ АЛЕКСЕЙ СЕРГЕЕВИЧ

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН АЛЕКСИНСКИЙ ГОРОД АЛЕКСИН УЛИЦА ЛЕНИНА 8 8

Дата регистрации:19.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7111015069

ОГРН:1057101981727

Действует СНП САДОВОДЧЕСКОЕ НП ЕГНЫШЕВКА-2005

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Покупка и продажа недвижимости

Председатель Правления Партнерства:Грибков Вадим Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН АЛЕКСИНСКИЙ ДЕРЕВНЯ ЕГНЫШЕВКА УЛИЦА ЮБИЛЕЙНАЯ 19

Дата регистрации:19.03.2005

Уставной капитал:–

ИНН:7111015051

ОГРН:1057101981694

Действует ООО ЭЛИТСТРОЙСЕРВИС

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Директор:Бурцев Михаил Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА СЕРЕБРОВСКАЯ 16 В 81

Дата регистрации:21. 03.2005

Уставной капитал:30 000 ₽

ИНН:7107087818

ОГРН:1057101141426

Действует ООО СИНЬОР РОБИНЗОН

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Директор:Каримов Михаил Ринатович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ГАЛКИНА ДОМ 18 ОФИС 202

Дата регистрации:21.03.2005

Уставной капитал:21 900 ₽

ИНН:7103037446

ОГРН:1057100127435

Действует ООО КРИВОЛУЧЕНСКИЕ ВСТРЕЧИ 2005

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Генеральный Директор:Агапонова Наталья Геннадьевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МИХЕЕВА ДОМ 11 Б ПОМЕЩЕНИЕ IV

Дата регистрации:21.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7105034578

ОГРН:1057100572154

Действует ООО АЙ ТИ СЕРВИС

Телекоммуникации

Проводная связь

Конкурсный Управляющий:Логинов Дмитрий Константинович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ ЛЕНИНА 108 Б 415

Дата регистрации:21. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7104047528

ОГРН:1057100333070

Действует ООО СТРОЙКОМПЛЕКТ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Директор:Канатчиков Алексей Александрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ПУШКИНСКАЯ ДОМ 55А КОМНАТА 17

Дата регистрации:22.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064751

ОГРН:1057100793199

Действует ООО ТЭЙЧ-М

Оптовая торговля

Оптовая торговля бытовыми товарами

Директор:Осколкова Светлана Николаевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ПАВШИНСКИЙ МОСТ ДОМ 1 КОРПУС 3 КВАРТИРА 56

Дата регистрации:22.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107087864

ОГРН:1057101141811

Действует ООО ИНФОРМАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ

IT-технологии

Услуги в IT

Генеральный Директор:Мельников Андрей Петрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ЖУКОВСКОГО ДОМ 58 ОФИС 302

Дата регистрации:22. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064744

ОГРН:1057100793188

Действует ООО СПЕЦТЕХНОЛОГИИ

Строительство

Строительство сооружений

Строительство инженерных коммуникаций

Директор:Скворцов Дмитрий Валерьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА КАШТАНОВАЯ ДОМ 8

Дата регистрации:23.03.2005

Уставной капитал:11 000 ₽

ИНН:7106064783

ОГРН:1057100793309

Действует ООО НАСТРОЙ

Строительство

Организация строительных работ

Монтажные работы

Генеральный Директор:Третьяков Дмитрий Валерьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН НОВОМОСКОВСКИЙ ГОРОД НОВОМОСКОВСК УЛИЦА ОКТЯБРЬСКАЯ ДОМ 34 КВАРТИРА 56

Дата регистрации:23.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7116127866

ОГРН:1057101587730

Действует ООО ЖАСМИН

Розничная торговля

Розничная торговля мебелью

Директор:Богданова Татьяна Вячеславовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ КРАСНОАРМЕЙСКИЙ 19 — —

Дата регистрации:23. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064776

ОГРН:1057100793298

Действует ООО ЮВЕЛИРНЫЙ ДОМ Е.ЗАКС ХУДОЖНИКИ-ЮВЕЛИРЫ

Розничная торговля

Розничная торговля в специализированных магазинах

Оптовая торговля часами и ювелирными изделиями

Директор:Гаджиев Рустам Рашидович

Юридический адрес:ОБЛ. ТУЛЬСКАЯ Р-Н Заокский Д. Малахово УЛ. МАГИСТРАЛЬНАЯ СТР. 38 ЗД. ГАРАЖ

Дата регистрации:23.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7126015760

ОГРН:1057101982145

Действует ООО АДМЕТ

Розничная торговля

Розничная торговля продовольственными товарами

Розничная торговля пищевыми продуктами

Генеральный Директор:Литвинов Дмитрий Вячеславович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ПЕРВОМАЙСКАЯ ДОМ 10

Дата регистрации:24.03.2005

Уставной капитал:500 000 ₽

ИНН:7104047574

ОГРН:1057100333278

Действует ООО ЗОЛОТОЕ РУНО

Производство

Швейное производство

Пошив одежды

Директор:Лунькова Ирина Владимировна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЩЕКИНСКИЙ ГОРОД ЩЕКИНО УЛИЦА УГОЛЬНАЯ 1

Дата регистрации:24. 03.2005

Уставной капитал:343 400 ₽

ИНН:7118100147

ОГРН:1057102982518

Действует ООО ВЕКТОР МОДЫ

Оптовая торговля

Оптовая торговля бытовыми товарами

Оптовая торговля текстилем

Директор:Богомолов Олег Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА СОВЕТСКАЯ ДОМ 23 ОФИС 1

Дата регистрации:24.03.2005

Уставной капитал:60 000 ₽

ИНН:7107087920

ОГРН:1057101142383

Действует ООО ПРОМТЕХРЕСУРС-ТУЛА

Оптовая торговля

Оптовая торговля техникой и оборудованием

Оптовая торговля бытовой техникой

Директор:Фадеев Сергей Юрьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ОКТЯБРЬСКАЯ ДОМ 48 Б ОФИС 410

Дата регистрации:24.03.2005

Уставной капитал:12 500 ₽

ИНН:7104047550

ОГРН:1057100333223

Действует ООО ФАВОРИТ-СПОРТ

Розничная торговля

Розничная торговля спортивными товарами

Директор:Бодрова Ольга Владимировна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН НОВОМОСКОВСКИЙ ГОРОД НОВОМОСКОВСК УЛИЦА РУДНИЧНАЯ 11

Дата регистрации:24. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7116127873

ОГРН:1057101587773

Действует ООО ВЕКТОР

Услуги для бизнеса

Маркетинг и реклама

Рекламная деятельность

Генеральный Директор:Залуцкий Евгений Юльянович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МАКАРЕНКО 13 4 29

Дата регистрации:24.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107087896

ОГРН:1057101142230

Действует ООО КРИАТПЛЮС

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Генеральный Директор:Сапожков Владимир Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ОБОРОННАЯ 118 3

Дата регистрации:24.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107087913

ОГРН:1057101142340

Действует ООО ЧАСТНАЯ ОХРАННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЭЛЬФ-ЩИТ РЕГИОН

Детективная и охранная деятельность

Частные охранные службы

Директор:Бронин Евгений Вячеславович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ ЛЕНИНА 77 422

Дата регистрации:25. 03.2005

Уставной капитал:250 000 ₽

ИНН:7107087960

ОГРН:1057101142427

Действует ООО НЭКСТ

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Покупка и продажа недвижимости

Директор:Хорошавин Евгений Александрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ КРАСНОАРМЕЙСКИЙ ДОМ 10 ПОМЕЩЕНИЕ 105, ЭТАЖ 1

Дата регистрации:25.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106064906

ОГРН:1057100793727

Действует ООО ШЕЛЬФ

Оптовая торговля

Оптовая торговля топливом и сырьём

Директор:Лысенко Александр Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА СТАРОНИКИТСКАЯ ДОМ 105 ПОМЕЩЕНИЕ 1

Дата регистрации:25.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107087952

ОГРН:1057101142416

Действует ООО ТВИНСЕРВИС-ТУЛА

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Директор:Спасский Юрий Юрьевич

Юридический адрес:ОБЛ. ТУЛЬСКАЯ Г. Тула ПР-КТ ЛЕНИНА Д. 52 ПОМЕЩ. VIII, ЭТАЖ 1

Дата регистрации:28.03.2005

Уставной капитал:12 000 ₽

ИНН:7107088018

ОГРН:1057101142647

Действует ООО СТК ТЕХНОСТРОЙ

Оптовая торговля

Оптовая торговля прочими товарами

Оптовая торговля водопроводным и отопительным оборудованием

Генеральный Директор:Сон Марина Валерьевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ПУШКИНСКАЯ ДОМ 14 ЗДАНИЕ ПРОИЗВОДСТВ.-АДМИН ОФИС 103/4, 1ЭТАЖ, ЛИТЕР Ж1

Дата регистрации:28.03.2005

Уставной капитал:11 000 ₽

ИНН:7118100161

ОГРН:1057102982562

Действует ООО ПРИНТ-СЕРВИС

Бытовые услуги

Ремонт и монтаж

Ремонт электроники и бытовых изделий

Директор:Фарбер Роман Олегович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ШОССЕ ОДОЕВСКОЕ ДОМ 67 ЭТАЖ 2, ПОМ. 10

Дата регистрации:29.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7104047609

ОГРН:1057100335390

Действует ООО ГАЛАТЕЯ

Бытовые услуги

Директор:Семушкина Инна Валерьевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА КАУЛЯ 20

Дата регистрации:29. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107087977

ОГРН:1057101144594

Действует ООО ЛМЕДКОМ

Здравоохранение и медицина

Медицинская и стоматологическая практика

Директор:Янин Андрей Геннадьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН НОВОМОСКОВСКИЙ ГОРОД НОВОМОСКОВСК ПРОЕЗД ПАРКОВЫЙ 4А

Дата регистрации:30.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7116127880

ОГРН:1057101587905

Действует ООО РЕММОНТАЖ

Бытовые услуги

Ремонт и монтаж

Ремонт машин и оборудования

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ЩЕГЛОВСКАЯ ЗАСЕКА ДОМ 17 ОФИС 9

Дата регистрации:31.03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7105034659

ОГРН:1057100572682

Действует ООО ОКНОПРОМ

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Генеральный Директор:Григорьев Виталий Георгиевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН АЛЕКСИНСКИЙ ГОРОД АЛЕКСИН УЛИЦА КИРОВА 27

Дата регистрации:31. 03.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7111015090

ОГРН:1057101982706

Действует ООО КОМПАНИЯ ФЕРРУМ

Экологическая безопасность

Отходный промысел

Обработка вторичного сырья

Генеральный Директор:Маркина Инна Алексеевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЛЕНИНСКИЙ ПОСЕЛОК БАРСУКИ УЛИЦА ПРОЛЕТАРСКАЯ 15

Дата регистрации:01.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7130025697

ОГРН:1057102381632

Действует ООО ТАКТ-ОЙЛ

Торговля автомобилями и автосервис

Торговля автомобильными деталями

Оптовая торговля запасными частями

Директор:Слободсков Андрей Леонидович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МОСИНА 33

Дата регистрации:01.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088064

ОГРН:1057101145056

Действует СОДНТ САДОВОДЧЕСКОЕ НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО ЧАЙКА

Сельское хозяйство

Растениеводство

Руководитель Юридического Лица:Захаров Александр Павлович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПОСЕЛОК КОСАЯ ГОРА ТЕРРИТОРИЯ СНТ ЧАЙКА

Дата регистрации:04. 04.2005

Уставной капитал:–

ИНН:7104047662

ОГРН:1057100335665

Действует ООО ТАНДЕМ

Розничная торговля

Розничная торговля продовольственными товарами

Розничная торговля пищевыми продуктами

Директор:Сахарова Евгения Васильевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН КИМОВСКИЙ ГОРОД КИМОВСК ПРОЕЗД КАЛИНИНА 26

Дата регистрации:05.04.2005

Уставной капитал:500 000 ₽

ИНН:7115020260

ОГРН:1057102580919

Действует АО АНДРОМЕДА

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Директор:Караев Тимур Везирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МИХЕЕВА ДОМ 17 ОФИС 1

Дата регистрации:05.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106065018

ОГРН:1057100794618

Действует ООО ТУЛЬСКИЙ ЭЛЕКТРОМЕХАНИЧЕСКИЙ ЗАВОД

Производство

Производство электротехники

Производство электрофурнитуры

Генеральный Директор:Мартыненко Юрий Александрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНАЯ ДОМ 48 ЗДАНИЕ АДМИНИСТРАТИВНОЕ

Дата регистрации:05. 04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088113

ОГРН:1057101145782

Действует ООО АНТЭЛ-МЕДИА

Типография и печать

Полиграфическая деятельность

Директор:Сафронов Валерий Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ ЛЕНИНА ДОМ 77 ОФИС 609

Дата регистрации:05.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106065032

ОГРН:1057100794563

Действует ООО ЧАСТНОЕ ОХРАННОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ АЛЬБАТРОС

Детективная и охранная деятельность

Частные охранные службы

Директор:Тоболев Андрей Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ГЕНЕРАЛА МАРГЕЛОВА ДОМ 5

Дата регистрации:06.04.2005

Уставной капитал:250 000 ₽

ИНН:7104047670

ОГРН:1057100335775

Действует ООО КЛИНСЕРВИС

Розничная торговля

Розничная торговля оборудованием и электроникой

Генеральный Директор:Терновой Алексей Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПЕРЕУЛОК ГОРОДСКОЙ 17 А

Дата регистрации:06. 04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088145

ОГРН:1057101145925

Действует ООО СТРОЙМЕХАНИКА-2

Металлургия

Обработка металла

Генеральный Директор:Джикия Гоча Лудукиевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПОСЕЛОК СКУРАТОВСКИЙ УЛИЦА КИРЕЕВСКАЯ 41

Дата регистрации:06.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088201

ОГРН:1057101146013

Действует ООО ПРОМЭЛЕКТРОКОМ

Производство

Производство электротехники

Производство электрофурнитуры

Генеральный Директор:Потудин Владимир Олегович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ЩЕГЛОВСКАЯ ЗАСЕКА ДОМ 31

Дата регистрации:07.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7105034680

ОГРН:1057100573012

Действует ООО КИРЕЕВСКАЯ ПАРКЕТНАЯ ФАБРИКА

Производство

Столярное производство

Деревообработка

Генеральный Директор:Архипов Сергей Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН КИРЕЕВСКИЙ ДЕРЕВНЯ НОВАЯ КИРЕЕВКА УЛИЦА ТЕРРИТОРИЯ ПРОМЫШЛЕННЫХ ОБЪЕКТОВ

Дата регистрации:08. 04.2005

Уставной капитал:14 000 ₽

ИНН:7128028161

ОГРН:1057102190067

Действует ООО СПЕЦАВТОМАТИКА Т

Строительство

Строительство сооружений

Строительство инженерных коммуникаций

Директор:Гомозов Валерий Иванович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ВЕРЕСАЕВА 11 — 2

Дата регистрации:08.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106065113

ОГРН:1057100795465

Действует ООО САНГИГТРЕЙД

Оптовая торговля

Оптовая торговля бытовыми товарами

Генеральный Директор:Куракин Эдуард Станиславович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА НЕМЦОВА 38 А 5

Дата регистрации:08.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088265

ОГРН:1057101146453

Действует ООО МИР

Производство

Производство из природных ресурсов

Производство цемента, извести и гипса

Генеральный Директор:Корниленкова Любовь Михайловна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН АЛЕКСИНСКИЙ ГОРОД АЛЕКСИН УЛИЦА 25 ЛЕТ ОСВОБОЖДЕНИЯ 5 Б

Дата регистрации:08. 04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7111015118

ОГРН:1057101982783

Действует ООО ТРАНСЭКСП

Перевозка пассажиров и грузов

Грузовые перевозки

Директор:Ратке Владимир Эдуардович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН НОВОМОСКОВСКИЙ ГОРОД НОВОМОСКОВСК УЛИЦА КОСМОНАВТОВ ДОМ 41-В КОРПУС ЛИТ В. ОФИС 1

Дата регистрации:08.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7116127915

ОГРН:1057101589126

Действует ООО МИР СТЕКЛА

Производство

Производство из природных ресурсов

Производство стекла

Директор:Быков Олег Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ВОЛНЯНСКОГО 1

Дата регистрации:08.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7104047704

ОГРН:1057100335863

Действует ООО ЦЕНТР ЭКСПЕРТНОЙ ОЦЕНКИ

Недвижимость

Риелторские услуги

Директор:Харитонова Ирина Евгеньевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА ПРОСПЕКТ ЛЕНИНА 79 ОФИС 109

Дата регистрации:08. 04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7722542742

ОГРН:1057746621514

Действует ООО СУВЕНИРНАЯ ЛАВКА И М

Творческая деятельность

Генеральный Директор:Палевская Елена Михайловна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ПЕТРА АЛЕКСЕЕВА ДОМ 64 СТРОЕН. 1

Дата регистрации:08.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106065096

ОГРН:1057100795443

Действует ООО РЕКОНСТРУКЦИЯ-ТУЛАМАШ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Директор:Феськов Константин Петрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МОСИНА 2 — —

Дата регистрации:11.04.2005

Уставной капитал:3 450 000 ₽

ИНН:7106065145

ОГРН:1057100795542

Действует ООО СОВРЕМЕННЫЕ СТРОИТЕЛЬНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ

Строительство

Организация строительных работ

Прочие строительные работы

Директор:Попов Павел Иванович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА С. ПЕРОВСКОЙ ДОМ 49 ПОМ/ОФИС 1/6

Дата регистрации:11.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088297

ОГРН:1057101147003

Действует ООО САНГИГСЕРВИС

Обслуживание зданий и территорий

Деятельность по чистке и уборке

Генеральный Директор:Куракин Эдуард Станиславович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА НЕМЦОВА 38 А 5

Дата регистрации:11.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088280

ОГРН:1057101146992

Действует ООО ИНЖЕНЕРНО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ

Оптовая торговля

Оптовая торговля прочими товарами

Оптовая торговля водопроводным и отопительным оборудованием

Генеральный Директор:Петрушин Юрий Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА КАМИНСКОГО ДОМ 33 ЛИТЕРА А ПОМЕЩЕНИЕ 10

Дата регистрации:11.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7104047711

ОГРН:1057100335973

Действует ООО СТРОЙТЕХКОМПЛЕКТАЦИЯ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Директор:Курушкин Виктор Михайлович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА К. МАРКСА ДОМ 5 ОФИС 76

Дата регистрации:12.04.2005

Уставной капитал:40 000 ₽

ИНН:7106065152

ОГРН:1057100795586

Действует ООО КЛАССИК-А

Строительство

Организация строительных работ

Строительные отделочные работы

Директор:Прудаев Михаил Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА БЕЛКИНА 4 Б —

Дата регистрации:13.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106065184

ОГРН:1057100795685

Действует ООО ЭНЕРГО-СЕРВИС

ТЭК

Электроэнергетика

Генеральный Директор:Иванов Александр Григорьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА МАРАТА ДОМ 184Б ОФИС 213

Дата регистрации:14.04.2005

Уставной капитал:27 250 ₽

ИНН:7106065201

ОГРН:1057100795872

Действует ООО ЮВИС

Строительство

Организация строительных работ

Монтажные работы

Генеральный Директор:Михайлин Владимир Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА НОВОТУЛЬСКАЯ ДОМ 13 ЛИТЕР Б ПОМЕЩЕНИЕ 9, ЭТАЖ 1

Дата регистрации:14. 04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088360

ОГРН:1057101148037

Действует ООО АКВА ЛЮКС

Водообеспечение

Генеральный Директор:Свиренева Любовь Юрьевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА СУРИКОВА ДОМ 20 ОФИС 210

Дата регистрации:15.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:5047065644

ОГРН:1055009315778

Действует ООО ЛЕГО-ОЙЛ

Оптовая торговля

Оптовая торговля топливом и сырьём

Оптовая торговля топливом

Директор:Родинков Глеб Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ФРУНЗЕ ДОМ 1 ЛИТЕР А ОФИС 2

Дата регистрации:18.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7106065272

ОГРН:1057100796202

Действует ООО НАДЕЖДА

Сельское хозяйство

Животноводство

Директор:Хрупкин Юрий Павлович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ВЕНЕВСКИЙ ДЕРЕВНЯ ТУЛУБЬЕВО

Дата регистрации:19.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7123028182

ОГРН:1057102190474

Действует ООО ТРИО

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Директор:Тимофеев Игорь Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ДЗЕРЖИНСКОГО 10

Дата регистрации:19. 04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7107088402

ОГРН:1057101148642

Действует ООО ЭЛЕКТРОКОМПЛЕКТ

Оптовая торговля

Оптовая торговля техникой и оборудованием

Директор:Черемных Павел Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА БОЛДИНА ДОМ 94 ОФИС 48

Дата регистрации:19.04.2005

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:7104047768

ОГРН:1057100336391

Действует АО КВАДРА-ГЕНЕРИРУЮЩАЯ КОМПАНИЯ

ТЭК

Теплоснабжение

Генеральный Директор:Сазонов Семен Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ ГОРОД ТУЛА УЛИЦА ТИМИРЯЗЕВА 99В

Дата регистрации:20.04.2005

Уставной капитал:19 877 685 166 ₽

ИНН:6829012680

ОГРН:1056882304489

Действует ООО ЗАОКСК-АГРО

Производство

Производство пищевых продуктов

Мясное дело

Генеральный Директор:Погорелов Сергей Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ ТУЛЬСКАЯ РАЙОН ЗАОКСКИЙ РАБОЧИЙ ПОСЕЛОК ЗАОКСКИЙ УЛИЦА ЛЕНИНА ДОМ 58

Дата регистрации:20. 04.2005

Уставной капитал:530 000 ₽

ИНН:7126015784

ОГРН:1057101982915

Новое ИА «Регион 71» объединит государственные печатные СМИ и сайты

Ранее мы сообщали, Правительство Тульской области постановило реорганизовать государственное учреждение Тульской области «Телеканал «Тула». Мы попросили прокомментировать данную новость председателя комитета Тульской области по печати и массовым коммуникациям Марину Панову, в адрес редакции поступил официальный ответ на запрос:

«В ответ на Ваше обращение по вопросам реорганизации государственного учреждения Тульской области «Телеканал «Тула» сообщаю следующее.

Государственное учреждение Тульской области «Телеканал «Тула» (далее – ГУ ТО «Телеканал «Тула», телеканал) объединяет телевизионное производство, выпуск печатных изданий регионального и районного уровня, работу информационного агентства и сайтов в сети Интернет.

В его состав входят редакции 24 государственных общественно-политических районных (городских) газет, региональная государственная общественно-политическая газета «Тульские известия» и коллектив телеканала.

ГУ ТО «Информационное агентство «Регион 71» будет выделено из состава ГУ ТО «Телеканал «Тула» с целью организации дифференцированного учета бюджетных и внебюджетных средств каждой редакции, развития конкуренции в профессиональной среде, а также стимулирования редакций печатных СМИ к достижению принципа самоокупаемости.

Исходя из вышесказанного, перед новым государственным учреждением, включающим в себя печатные СМИ и сайты в сети Интернет, стоит задача поддержания тиражей печатных СМИ, увеличения посещаемости сайтов и их присутствия в социальных сетях.

Штатная численность ГУ ТО «Информационное агентство «Регион 71» будет определена учреждением самостоятельно после завершения юридических процедур по созданию учреждения.

Деятельность государственного учреждения Тульской области «Информационное агентство «Регион 71» будет направлена на широкое и всестороннее информирование жителей региона о деятельности Губернатора Тульской области, органов исполнительной власти, а также на подготовку и размещение материалов о значимых для Тульской области событиях социальной политики, экономики, культуры, науки и спорта в печатных и электронных СМИ».

Официальный портал Администрации города Тулы

Владимир Корниенко, 51 год Я живу на пересечении проспекта Ленина и улицы Льва Толстого. У нас все прекрасно. Сейчас центр в идеальном состоянии.  Хотелось бы, чтобы продолжали дальше асфальтировать второстепенные улицы города, пешеходные дорожки. Очень понравился новый Болдинский сквер, после благоустройства там стало очень  красиво. И лавочки новые появились, и освещение. Хочется, чтобы больше сохранялось старинной Тулы.

Сергей Окорочков, 65 лет Я вижу положительные изменения. Я пожилой человек, много времени провожу на свежем воздухе и вижу, как город меняется в лучшую сторону. Дворы благоустраивают кругом. Я живу на улице Сурикова. Жду в своем дворе благоустройства. В нем уже частично придомовая территория заасфальтирована. Хочется, чтобы было больше уличных фонарей  и ярче освещение.

Раиса Щербакова, 65 лет Я в Тулу влюбилась снова! Очень красивый город, спасибо городским властям! И дороги ремонтируются, и скверы благоустраиваются, цветов очень много высаживается. Про дворы отдельные слова благодарности. Я живу на улице Фридриха Энгельса.  В нашем дворе территорию благоустроили, пешеходные дорожки сейчас все заасфальтированы, поставили красивую детскую площадку. Тула наша красавицей стала!

Полина Кузина, 18 лет Меня очень сильно радует то, как наша Тула развивается, как ее благоустраивают! Появилось много городских пространств, где можно с друзьями хорошо провести время. Очень набережная нравится. Не только центр преображается, но и дворы благоустраивают, дороги асфальтируют. Я живу возле педагогического университета. В моем районе очень хорошо дороги сделали. Заасфальтировали и проезжую часть, и тротуары.

Галкин Павел, 20 лет Свой город очень люблю! Каждый год появляются новые интересные места. Появилась великолепная набережная. Я вижу, как озеленяют город, новые деревья высаживают, цветов очень много. Устанавливают детские площадки, появляются стадионы, новые спортивные объекты. Хочется, чтобы именно спортивных площадок появлялось больше. Чтобы больше было возможностей заниматься футболом, хоккеем. Это очень важно для будущего поколения.

Валентина Демина, 34 года Тула в последнее время преобразилась очень сильно. Появилось огромное количество мест, где можно гулять всей семьей, это огромный плюс! Я вижу, как дворы преображаются. У меня родители живут в центре Тулы. У них заасфальтировали придомовую территорию, тротуары, установили детскую площадку. Теперь ждем, когда преобразится наш двор на Новомосковской улице. Хочется, чтобы больше появилось парковочных мест

71 новый случай заражения коронавирусом выявили за сутки во Владимирской области

В регионе после четырехдневного сокращения суточной прибавки, вновь зафиксирован рост инфицированных. Общее количество зараженных за все время пандемии во Владимирской области приблизилось к 29 тысячам человек

За сутки во Владимирской области подтвержден 71 новый диагноз «коронавирус». Это на 3 случая больше, чем накануне — во вторник, 16 марта, Роспотребнадзор официально объявил о 68 зараженном.

Новые случаи инфицирования ковидом выявлены у жителей 16 муниципальных территорий Владимирской области:

Владимир — 20

Муром — 9

Гусь-Хрустальный — 8

Александров — 6

Кольчугино — 5

Ковров — 5

Собинка — 4

Юрьев-Польский — 3

Петушки — 2

Суздаль — 2

Меленки — 2

Киржач — 1

Судогда — 1

Красная Горбатка — 1

Радужный — 1

Камешково — 1

Общее число официально зафиксированных случаев коронавируса за все время пандемии во Владимирской области увеличилось до 28 973 человек:

Владимир — 6 564

Гусь-Хрустальный — 3 604

Муром — 3 239

Ковров — 2 060

Александров — 1 786

Петушки — 1 683

Юрьев-Польский — 1 291

Вязники — 1 198

Кольчугино — 1 195

Суздаль — 1 054

Собинка — 944

Меленки — 800

Киржач — 780

Гороховец — 695

Камешково — 650

Красная Горбатка — 630

Судогда — 438

Радужный — 362

Во Владимирской области за сутки официально признали 5 смертельных случаев от коронавируса. Общее количество скончавшихся от ковида владимирцев увеличилось до 953 человек. Суточное количество выздоровевших составило 58 пациентов. Всего же коронавирусом, по официальной статистике, благополучно переболело уже более 26 143 владимирца. В активной фазе заболевания коронавирусом к 17 марта находится 1 877 владимирцев.

По масштабам распространения коронавируса Владимирская область с общим количеством зараженных 28 973 (за сутки +71) занимает 56 место из 85 регионов России. У большинства географических соседей и общее количество инфицированных, и суточная прибавка выше: в Московской области — 224 096 (за сутки +436), Нижегородской области — 102 933 (за сутки +352), Ярославской области — 34 777 (за сутки +102).

В Ивановской области уже более месяца суточная прибавка меньше — 31 644 (за сутки +66).

А в Рязанской области зараженных меньше и по суточной прибавке, и по общему количеству — 25 523 (за сутки +61).

Самые яркие события дня — в инстаграме Зебра ТВ.

регион получил 71 медаль / Правительство Брянской области

Вчера, основываясь на предварительных итогах, мы сообщали о медалях,  полученных Брянской областью на выставке «Золотая осень». Сегодня стали известны окончательные итоги: продукция тружеников агропромышленного комплекса Брянской области получила 71 заслуженную награду по результатам участия в крупнейшей российской агропромышленной выставке «Золотая осень-2017».

Брянскую область представляли более 50 предприятий АПК. На выставке «Золотая осень 2017» в экспозиции Брянской области были представлены в широком ассортименте: хлебобулочные и кондитерские изделия; колбасные изделия и копчености; молочные продукты; мясные, мясорастительные и плодоовощные консервы; картофель, зерно, овощи закрытого и открытого грунта; продукты переработки картофеля: крахмал картофельный и сухие картофельные хлопья; фито-чаи, лекарственные травы, корень женьшеня.

Всего, согласно окончательным итогам, на 19-й российской агропромышленной выставке «Золотая осень — 2017» Брянская область получила 71 медаль, из них 45 золотых, 16 серебряных, 10 бронзовых.

Такое количество полученных на «Золотой осени» наград — это результат труда работников агропромышленного комплекса и предприятий перерабатывающей промышленности Брянской области. Губернатор Александр Богомаз неоднократно подчеркивал, что именно их труд — основа успеха агропромышленного комплекса региона, ведь труженики села эффективно работают, вкладывая душу и сердце в развитие важнейших секторов сельскохозяйственного производства.

Благодаря их неустанному труду Брянская область уверенно смотрит в будущее, наращивая производство зерна, картофеля, овощей, мясной и молочной продукции. Товары с брянской маркой широко известны не только во многих регионах России, но и за рубежом.

В конкурсе «За производство высококачественной пищевой продукции» продукция брянских производителей удостоена 41 медали различного достоинства, в том числе 35 золотых, 6 серебряных (ОАО «Бежицкий хлебокомбинат» получил шесть золотых и одну серебряную медаль, ОАО «Брянский гормолзавод» — пять золотых медалей, ОАО «Брянский молочный комбинат» — десять золотых медалей, ОАО «Брянконфи» — три золотые и одну серебряную медаль, ТнВ «Сыр Стародубский» — четыре золотые медали, ОАО «Консервсушпрод» — шесть золотых медалей, ГУП «Брянский хлебокомбинат № 1» — четыре серебряные медали).

Сельскохозяйственный производственный кооператив «Зимницкий» Дубровский район награжден золотой медалью за достижение высоких показателей в развитии племенного и товарного животноводства.

ООО ССХП «Женьшень» удостоен золотой медали за набор смесей сухого растительного сырья для приготовления травяного чая торговой марки «Божественные дары природы».

Брянский государственный аграрный университет получил 17 медалей за научные разработки, из них золото — 3 медали, серебро — 8 медалей, бронза — 6 медалей.

ГКУ Брянской области «Брянская областная государственная племенная служба» удостоена золотой медали за информационное обеспечение АПК Брянской области.

СПК Агрофирма «Культура» удостоена золотой медали за томаты защищенного грунта — ботанический сорт «Лезгинка».

Департамент сельского хозяйства Брянской области награжден золотой медалью за эффективную реализацию мероприятий государственной поддержки малых форм хозяйствования.

ИП глава КФХ Виктор Шаков из Дубровского района и ИП глава КФХ Николай Липунов из Суземского района награждены золотыми медалями, ИП глава КФХ Алексей Жукунов из Суземского района и ИП глава КФХ Максим Цыбренок из Почепского района награждены серебряными медалями за достижение высоких показателей в производстве продукции растениеводства.

ИП глава КФХ Евгений Петровский из Климовского района и ИП глава КФХ Николай Цыганков награждены бронзовыми медалями за достижение высоких показателей в производстве продукции животноводства.

ООО «Фермерское хозяйство Пуцко», в лице генерального директора Евгений Пуцко, награждено бронзовой медалью за высокие достижения в производстве картофеля.

Пресс-служба Губернатора и Правительства области

Создано: Sep 10, 2017 2:13:38 PM
Обновлено: Oct 10, 2018 12:26:57 PM

В правительстве региона обсудили меры противодействия «теневому» бизнесу | ФНС России

Дата публикации: 30.07.2019 18:11

Заместитель руководителя Управления Федеральной налоговой службы по Тульской области Александр Белишев 30 июля принял участие в очередном заседании рабочей группы по реализации комплексного плана противодействия «теневому» бизнесу в Тульской области, которое провел заместитель председателя правительства – министр сельского хозяйства Тульской области Дмитрий Миляев.   

В мероприятии также приняли участие представители регионального правительства, территориальных подразделений федеральных контрольно-надзорных органов, органов местного самоуправления, общественных бизнес-объединений, а также муниципальные бизнес-гиды.

Создание условий для развития добросовестной конкуренции в сфере бизнеса – одна из задач национального проекта «Малое и среднее предпринимательство и поддержка индивидуальной предпринимательской инициативы».

На заседании  рассмотрели отчеты о реализации комплексного плана противодействия «теневому» бизнесу в Суворовском, Щекинском и Ясногорском районах, представлен позитивный опыт Тулы.

Так, например, на сайте администрации Суворовского района для сокращения числа работников, занятых в «теневом» бизнесе, размещаются актуальные вакансии центра занятости г. Суворова.

Работает «горячая линия» для приема сообщений о деятельности «теневого» бизнеса и нарушениях трудовых прав граждан.

Администрация Щекинского района ежемесячно проводит совместные рейды с сотрудниками полиции для выявления «теневого» бизнеса в муниципалитете. В частности — торговли в неустановленных местах.

Сотрудники администрации Ясногорского района поделились опытом урегулирования спорных отношений при размещении нестационарных торговых объектов.

Заместитель руководителя Управления Федеральной налоговой службы по Тульской области Александр Белишев доложил о работе своего ведомства по противодействию «теневому» бизнесу в регионе.

Регион 71

• Карта
• Сезонный график 2020-2021 гг.
• Хост-помещения
• Область 11
• Регион 12
• Регион 21
• Область 22
• Регион 31
• Регион 32
• Регион 41
• Регион 42
• Регион 51
• Регион 52
• Регион 61
• Регион 62
• Регион 71
• Регион 72
• Регион 81
• Регион 82
• Регион 91
• Область 92

> Домашняя страница> Регионы> Регион 71

2020-2021 Информация о сезоне:

---

Региональные координаторы (region71 @ usaclimbing. орг)

Энн Берри ([email protected])
Джим Нортон ([email protected])
Джонатан Линд ([email protected])
Тодд Уилсон ([email protected])

Facebook для обновления сезона:

https://www.facebook.com/groups/usacyouthregion71

Скалолазание в США объявляет о значительных изменениях в сезоне скалолазания в США 2020-2021 гг.

http: // www.usaclimbing.org/Media/USA_Climbing_News/USA_Climbing_Announces_Significant_Changes_to_2020-2021_USA_Climbing_Season.htm

Идентификация области SCARB2 человека, которая важна для связывания энтеровируса и инфицирования

J Virol. 2011 May; 85 (10): 4937–4946.

Нейровирологический проект, Токийский столичный институт медицинских наук, Токийская столичная организация медицинских исследований, 2-1-6, Камикитадзава, Сетагая-ку, Токио 156-8506, Япония

^* Автор, отвечающий за переписку. Почтовый адрес: Проект нейровирологии, Токийский столичный институт медицинских наук, Токийская столичная организация медицинских исследований, 2-1-6, Камикитадзава, Сетагая-ку, Токио 156-8506, Япония. Телефон: 81-3-5316-3312. Факс: 81-3-5316-3224. Электронная почта: pj.ro.nekukagi@ts-ekiok.

Поступило 10 ноября 2010 г .; Принято 28 февраля 2011 г.

Copyright © 2011, Американское общество микробиологов. Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Ранее мы идентифицировали человеческий рецептор-скавенджер класса B, член 2 (SCARB2), как клеточный рецептор для энтеровируса 71 (EV71).Экспрессия человеческого SCARB2 (hSCARB2) позволяла мышиным клеткам L929 эффективно связываться с вирионами и продуцировать как вирусные белки, так и дочерние вирусы при инфицировании EV71. Мышиный Scarb2 (mScarb2) обнаруживал 85,8% аминокислотной идентичности и 99,9% сходства с hSCARB2. Экспрессия mScarb2 в клетках L929 придает частичную чувствительность. Очень мало вирионов связывается с клетками, экспрессирующими mScarb2. Вирусный титр в клетках L929, экспрессирующих mScarb2, был примерно в 40-100 раз ниже, чем в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2.Используя химерные мутанты hSCARB2-mScarb2, мы попытались картировать область, которая была важна для эффективной инфекции EV71. Клетки L929, экспрессирующие химеры, несущие аминокислоты 142-204 из последовательности человека, были чувствительны к EV71, в то время как химеры, несущие последовательность мыши в этой области, не были. Более того, этот регион также имел решающее значение для связывания с вирионами. Определение этой области в hSCARB2, которая важна для связывания EV71 и инфицирования, в значительной степени способствует пониманию взаимодействий вирус-рецептор.Дальнейшие исследования прояснят первые шаги инфекции EV71.

ВВЕДЕНИЕ

Энтеровирус 71 (EV71) вместе с вирусом Коксаки А16 (CVA16) принадлежит к человеческому энтеровирусу вида A из рода Enterovirus в семействе Picornaviridae (28). Вирус содержит одноцепочечную РНК с положительным смыслом, окруженную икосаэдрическим капсидом, собранным из 60 копий каждого из четырех структурных белков: VP1, VP2, VP3 и VP4 (32). EV71 был впервые изолирован от пациентов с неврологическими заболеваниями, включая смертельный энцефалит и асептический менингит, в Калифорнии с 1969 по 1972 год (33).Более поздние исследования показали, что EV71 связан с болезнью рук и ног (HFMD) у маленьких детей и младенцев (6, 13). Хотя HFMD обычно считается легким инфекционным заболеванием, HFMD, вызываемый EV71, но не другими энтеровирусами, иногда сопровождается тяжелыми неврологическими заболеваниями, включая энцефалит ствола головного мозга и острый вялый паралич (23). В последние годы эпидемические или спорадические вспышки нейровирулентных инфекций EV71 были зарегистрированы в основном в Юго-Восточной или Восточной Азии, включая Тайвань, Малайзию, Сингапур, Японию и Китай (1, 8, 11, 17, 27, 38).В частности, вспышки эпидемии, произошедшие в 2008 и 2009 годах в Китае, привели к 488 955 и 1155 525 случаям HFMD, включая 126 и 353 смертельных случая в год, соответственно (http://www.moh.gov.cn/publicfiles/ бизнес / htmlfiles / mohbgt / s3582 / 201002 / 46043. htm) (40). Более того, эпидемия EV71 с тех пор продолжается в Китае, где зарегистрировано 987 779 случаев HFMD, включая 537 смертельных случаев по состоянию на 22 июня 2010 г. (http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohbgt/s3582/201006 / 47871.htm).

Клетки RD человека очень чувствительны к инфекции EV71, тогда как клетки L929 мыши проявляют очень низкую чувствительность. Ранее мы сообщали об идентификации рецепторов EV71 путем генетической комплементации клеток L929 генами, перенесенными из клеток RD человека (37). Вкратце, мы установили две чувствительные к EV71 клеточные линии, несущие часть геномной ДНК человека. Идентифицируя интегрированную ДНК человека в одном из трансформантов, клетках Ltr051, мы показали, что рецептор скавенджера класса B, член 2 (SCARB2), является клеточным рецептором для EV71.SCARB2 служит рецептором для всех протестированных изолятов EV71. Инфекция EV71 в линии клеток L929, экспрессирующей SCARB2, столь же эффективна, как и инфекция в линии клеток RD (37). Мы также обнаружили, что эффективность репликации вируса в другой линии трансформантных клеток, Ltr246, немного ниже, чем в клетках Ltr051 (37), и что клетки Ltr246 чувствительны только к подгруппе штаммов EV71 (S. Yamayoshi et al., Неопубликованные данные) ). Хотя клетки Ltr246, по-видимому, экспрессируют другой, неизвестный рецептор (рецептор X), мы еще не идентифицировали последовательность ДНК человека, которая придает чувствительность клеткам Ltr246.Кроме того, Nishimura et al. также идентифицировали лиганд селектина P (SELPLG, также известный как лиганд-1 гликопротеина P-селектина [PSGL-1]) в качестве рецептора EV71 из клеток Jurkat Т-клеточного лейкоза человека с помощью анализа пэннинга, который обогащен молекулами с сильным связыванием сродство к частицам EV71 (26). SELPLG также придает чувствительность только некоторым штаммам EV71 на клетках L929. Однако в клетках Jurkat и клетках L929, экспрессирующих SELPLG, проявление цитопатического эффекта (ЦПЭ) и экспрессия вирусных белков после инфицирования EV71 происходили медленнее, чем в клетках RD и клетках L929, экспрессирующих SCARB2 (26). Мы подтвердили, что клетки Ltr246 не несут человеческие гены SCARB2 и SELPLG . Другое исследование показало, что истощение О-связанных гликанов или предварительная обработка сиалидазой уменьшали инфицирование EV71 в клетках рака толстой кишки человека DLD-1 (39). Эти результаты предполагают, что EV71 может проникать в клетку несколькими путями. Поскольку все протестированные штаммы EV71 использовали SCARB2 в качестве рецептора (37), тогда как только подмножество штаммов EV71 использовали SELPLG (26) или рецептор X, SCARB2 может играть центральную роль на ранних этапах инфекции EV71.Следовательно, характеристика роли SCARB2 во время инфекции EV71 будет способствовать пониманию входа EV71.

SCARB2 (также известный как лизосомный интегральный мембранный белок II или CD36b-подобный-2) принадлежит к семейству CD36 и имеет два трансмембранных домена с N- и C-концами, расположенными в цитозоле (10). SCARB2 является одним из наиболее распространенных белков лизосомальной мембраны и участвует в мембранном транспорте и реорганизации эндосомального / лизосомного компартмента (21). SCARB2 также работает как рецептор для маннозо-6-фосфат-независимого транспорта β-глюкоцереброзидазы (β-GC) в лизосомы (5, 30). Связывание β-GC со SCARB2 происходит в просветном домене SCARB2, особенно в мотиве спиральной спирали на аминокислотах 152–167 (30). Дефицит SCARB2 у мышей вызывает обструкцию лоханочно-мочеточникового перехода, глухоту и периферическую невропатию (12). Хотя мотивы в некоторых клеточных рецепторах пикорнавирусов, которые важны для связывания и / или инфицирования, были выяснены, SCARB2 не имеет мотивов, общих с другими рецепторами пикорнавирусов, таких как иммуноглобулин (Ig) -подобный мотив.Таким образом, SCARB2 представляет собой новый класс рецепторов пикорнавирусов. Идентификация важных областей в SCARB2 будет способствовать выяснению взаимодействия вирус-рецептор.

В этом отчете мы сравнили чувствительность клеток, экспрессирующих человеческий SCARB2 (hSCARB2) или мышиный Scarb2 (mScarb2), к EV71. Кроме того, мы картировали область в hSCARB2, которая важна для инфекции EV71, с помощью химер hSCARB2-mScarb2.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Клетки.

Клетки RD человека, клетки L929 мыши и клетки Vero африканской зеленой мартышки культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Sigma) с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и раствора пенициллин-стрептомицина (Invitrogen) (5% FBS-DMEM).

Вирусы.

Штамм EV71 SK-EV006 / Malaysia / 97 был размножен в клетках Vero для использования в этом исследовании (25). EV71-GFP, который экспрессирует зеленый флуоресцентный белок (GFP) при репликации вируса, был выделен из инфекционного клона кДНК pSVA-EV71-GFP, описанного ранее (37).

Плазмиды.

Фрагмент кДНК mScarb2 амплифицировали с помощью ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) из клеток L929 с праймерами mSCARB2-Eco (+) (CAGAATTCACCATGGGCAGATGCTGCTTCTACA) и mSCARB2-Xba (-), и продукт PCCTGTCGTC был вставлен в в pCAGGS-PUR (14).Полученная конструкция была обозначена как pCA-mScarb2. Фрагмент кДНК, кодирующий mScarb2 или hSCARB2 (37), был субклонирован в pCAGGS. MCS (19, 36) для создания тега FLAG на С-конце, и конструкция была обозначена как pCA-mScarb2-F или pCA-hSCARB2-F соответственно.

Химерные мутанты hSCARB2-mScarb2 (см. A и A) были сконструированы с использованием стандартных методов на основе ПЦР и были клонированы в pCAGGS.MCS с тегом FLAG на С-конце. У мутантов не было неожиданных мутаций или делеций.

Аминокислоты с 1 по 204 hSCARB2 важны для эффективной инфекции EV71.(A) Схематическая диаграмма химерных мутантов hSCARB2-mScarb2. Серию мутантов конструировали последовательной заменой набора из 4 экзонов. Тег FLAG был добавлен на конце C открытой рамки считывания. (B и C) Для сравнения эффективности заражения EV71, как описано в легенде к. Данные FACS показаны как средние значения со стандартными отклонениями ( n = 3). Статистическая значимость определялась тестом Стьюдента t .

Область от аминокислот 142 до 204 hSCARB2 важна для эффективной инфекции EV71. (A) Схематическая диаграмма химерных мутантов hSCARB2-mScarb2. Серию мутантов конструировали путем индивидуальной замены экзонов 1-4. Тег FLAG был добавлен на конце C открытой рамки считывания. (B и C) Однократные анализы инфекции. (B) Экспрессия hSCARB2-F, mScarb2-F и химерных рецепторов была подтверждена вестерн-блоттингом с антителом против FLAG. ACTB использовали в качестве контроля загрузки для вестерн-блоттинга.(C) Трансфицированные клетки, инфицированные EV71-GFP, анализировали с помощью FACS. Данные FACS показаны как средние значения со стандартными отклонениями ( n = 3). Статистическая значимость определялась тестом Стьюдента t . (D) Обработка PNGase F H (M4) -F, M (h3) -F и M (h4) -F. Клетки L929 трансфицировали плазмидой, кодирующей H (M4) -F, M (h3) -F или M (h4) -F. Клетки обрабатывали PNGase F, и образцы анализировали вестерн-блоттингом с антителом против FLAG.

Распространение вируса в культуре клеток.

клеток RD инфицировали либо EV71-GFP, либо EV71. Через 24 часа после инфицирования клетки, инфицированные EV71-GFP, визуализировали с помощью камер IX70 и DP70 (Olympus) и анализировали с помощью программного обеспечения DP Controller (Olympus). Клетки, инфицированные EV71 или EV71-GFP, впоследствии фиксировали 4% параформальдегидом и зондировали мышиным антителом против EV71 (клон 422-8D-4C-4D; Millipore) с последующей инкубацией с ослиным анти- антителом Alexa Fluor 488. мышиный IgG (Invitrogen). Изображения были получены с помощью камеры IX70.

Расщепление PNGase F.

Клетки L929 трансфицировали плазмидой, кодирующей hSCARB2, mScarb2, hSCARB2-F, mScarb2-F, H (M4) -F, M (h3) -F или M (h4) -F, с использованием реагента для трансфекции FuGENE 6. Через 48 часов трансфицированные клетки лизировали денатурирующим гликопротеином буфером (New England Biolabs [NEB]), а затем инкубировали в течение 10 минут при 99 ° C. Денатурированные образцы смешивали с реакционным буфером G7 (NEB) с добавлением 1% NP-40 и 500 ед. Пептида N -гликозидазы F (PNGase F) (NEB), а затем инкубировали в течение 2 часов при 37 ° C для переваривания.Эти образцы были смешаны с буфером для образцов додецилсульфата натрия (SDS) и затем инкубированы в течение 5 минут при 95 ° C перед разделением на 12% трис-глициновом геле. Разрешенные белки исследовали с помощью козьего антитела против hSCARB2 (R&D Systems), козьего антитела против mScarb2 (R&D Systems) или кроличьего антитела против FLAG (Sigma) с последующей инкубацией с пероксидазой хрена (HRP), конъюгированной. антитела против козла или кролика (Jackson ImmunoResearch).

Однократный анализ инфекции.

Клетки L929 трансфицировали указанной плазмидой в трех повторностях для анализа (i) эффективности трансфекции, (ii) экспрессии белка и (iii) инфекции EV71-GFP. Трансфицированные клетки в первой лунке фиксировали на дне планшета 4% параформальдегидом через 48 часов после трансфекции и зондировали мышиным антителом против FLAG (Sigma) с последующей инкубацией с ослиным IgG против мышиных антител Alexa Fluor 488. Изображения были получены с помощью камер IX70 и DP70. Трансфицированные клетки во второй лунке смешивали с буфером для образцов SDS (Invitrogen) через 48 часов после трансфекции, и эти образцы инкубировали в течение 5 минут при 95 ° C перед разделением на 12% трис-глициновом геле (Invitrogen). Разрешенные белки исследовали с помощью антитела против hSCARB2, кроличьего антитела против FLAG (Sigma) или мышиного антитела против β-актина (ACTB) (клон AC-74; Sigma) с последующей инкубацией с соответствующим конъюгированным с HRP вторичное антитело (Jackson ImmunoResearch). Трансфицированные клетки в третьей лунке инфицировали EV71-GFP через 24 часа после трансфекции и инкубировали еще 24 часа при 37 ° C. Впоследствии изображения были получены с помощью камер IX70 и DP70 и проанализированы с помощью программного обеспечения DP Controller.Инфицированные клетки, включая GFP-положительные клетки, отделяли в трипсин-EDTA (0,05% трипсин, 0,53 мМ EDTA · 4Na) (GIBCO) и инкубировали с 4% параформальдегидом в течение 30 минут при комнатной температуре. После промывания фосфатно-солевым буфером (PBS), содержащим 2% FBS, клетки анализировали с помощью проточного цитометра FACSCalibur и программного обеспечения CellQuest Pro (оба от Becton Dickinson and Company).

Многоступенчатый анализ инфекции.

клеток L929 трансфицировали указанной плазмидой с использованием реагента для трансфекции FuGENE 6.Через 24 часа трансфицированные клетки инфицировали EV71 (1 × 10 ³ 50% инфекционных доз для культуры ткани [TCID ₅₀ ]) и инкубировали в течение 0, 12, 24, 36 или 48 часов при 37 ° C. . В каждый момент времени определяли титры вирусов и выражали их как TCID ₅₀ в соответствии с методом Рида-Мюнча (31).

Анализ иммунопреципитации.

Анализы Pulldown выполнялись, как сообщалось ранее (37), с некоторыми изменениями. EV71 (1,87 × 10 ⁸ TICD ₅₀ ) инкубировали с бычьим сывороточным альбумином (BSA) (10 мкг), человеческим IgG Fc (контрольный Fc) (10 мкг; R&D Systems), hSCARB2-Fc (1, 3, или 10 мкг; R&D Systems), или mScarb2-Fc (1, 3 или 10 мкг; R&D Systems) и античеловеческий IgG (Fc-специфический) -агароза (Sigma) в 1 мл 5% FBS DMEM в течение 2 часов при 4 ° С.Затем шарики дважды промывали 5% FBS-DMEM, суспендировали в буфере для образцов SDS и инкубировали в течение 10 минут при 95 ° C. После удаления шариков образцы загружали в 12% трис-глициновый гель с последующим вестерн-блоттингом кроличьим антителом против EV71 (25) или антителом против человеческого IgG Fc _γ , специфичным к фрагменту (Jackson ImmunoResearch. ). Для дегликозилирования контрольный Fc (3 мкг) и hSCARB2-Fc (3 мкг) в нативной форме обрабатывали 1500 ед. PNGase F в реакционном буфере G7 и инкубировали в течение 24 ч при 37 ° C перед смешиванием с антителами против человеческого IgG. (Специфично для Fc) -агароза.

Анализ прикрепления вирусов.

клеток L929, трансфицированных указанной плазмидой, отделяли в PBS, содержащем 0,05% EDTA. Эти клетки смешивали с EV71 (1,87 × 10 ⁸ TICD ₅₀ ) в течение 1 ч при 4 ° C, дважды промывали 5% FBS-DMEM, суспендировали в буфере для образцов SDS и затем инкубировали в течение 10 мин при 95 ° C. С. Образцы разделяли электрофорезом в SDS-полиакриламидном геле (PAGE) с использованием 12% трис-глицинового геля с последующим вестерн-блоттингом с антителами против EV71, против FLAG или против ACTB.

Биотинилирование белков клеточной поверхности.

Клетки L929, трансфицированные указанными плазмидами, дважды промывали ледяным PBS и дважды биотинилировали сульфо- N -гидроксисукцинимидом (NHS) -SS-биотином (Pierce) в течение 15 минут каждый раз при 4 ° C. После двух промываний ледяным PBS свободные тиоловые группы гасили гасящим раствором (Pierce), и клетки солюбилизировали в буфере для лизиса (20 мМ трис-HCl [pH 7,5], 150 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1% Triton X-100 и смесь ингибиторов полной мини-протеазы [Roche]) и осаждали агарозной смолой NeutrAvidin (Pierce).Осажденные белки и клеточные лизаты анализировали вестерн-блоттингом с антителом против FLAG.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Сравнение аминокислотных последовательностей hSCARB2 и mScarb2.

кДНК, кодирующая mScarb2, была получена из клеток L929, и ее аминокислотная последовательность сравнивалась с последовательностью hSCARB2 (A). И hSCARB2, и mScarb2 состоят из 478 аминокислот, которые кодируются в 12 экзонах. Уровень идентичности аминокислот между hSCARB2 и mScarb2 составлял 85,8%, а уровень сходства составлял 99.9%. Мы временно экспрессировали hSCARB2 и mScarb2 в клетках L929 и детектировали экспрессированные белки с использованием антител против SCARB2 человека и мыши. Мы обнаружили единственную полосу, которая мигрировала при приблизительно 80 кДа в Вестерн-блоттинге клеток RD с антителом против hSCARB2. mSCARB2, который эндогенно экспрессируется в клетках L929, был обнаружен в клетках L929, трансфицированных пустым вектором, с помощью антитела против mScarb2 (B). Мы обнаружили два основных молекулярных вида, мигрирующих с массой приблизительно 70 кДа и 80 кДа с антителом против hSCARB2 в клетках, трансфицированных pCA-hSCARB2 (B, слева).Точно так же мы также обнаружили два основных молекулярных вида, мигрирующих при приблизительно 70 кДа и 80 кДа с антителом против mScarb2 в клетках, трансфицированных pCA-mScarb2 (B, справа). Кажущиеся молекулярные размеры этих полос были больше, чем рассчитанные из аминокислотной последовательности (приблизительно 54 кДа). Сообщается, что hSCARB2 и mScarb2 являются N-гликозилированными белками в клетках человека и мыши соответственно (5, 30). Было обнаружено, что hSCARB2 имеет 10 потенциальных сайтов N-гликозилирования, тогда как mScarb2 имеет 11 (C).Возможные сайты N-гликозилирования были обнаружены в аминокислотных последовательностях, кодируемых экзонами 2, 3, 5, 6, 7, 10 и 11 как hSCARB2, так и mScarb2. mScarb2 имел один дополнительный потенциальный сайт N-гликозилирования в экзоне 3. Чтобы подтвердить, гликозилированы ли экзогенно экспрессируемые SCARB2 в клетках L929, клеточные лизаты обрабатывали PNGase F, которая удаляет все N-связанные углеводные остатки. После обработки PNGase F, каждый из hSCARB2 и mScarb2 был обнаружен как отдельная полоса с рассчитанной молекулярной массой (приблизительно 54 кДа) (D).Эти результаты показывают, что hSCARB2 и mScarb2 экспрессируются как N-гликозилированные белки в клетках L929 мыши и что характер гликозилирования немного отличается от такового для эндогенных белков.

SCARB2 человека и Scarb2 мыши. (A) Сравнение аминокислотной последовательности hSCARB2 с последовательностью mScarb2. Выделены расходящиеся аминокислоты. Два трансмембранных домена подчеркнуты, а аминокислоты, кодируемые в мРНК из SCARB2 экзонов 1, 3, 5, 7, 9 и 11, обведены красными пунктирными линиями.Аминокислоты, кодируемые в мРНК экзонов 2, 4, 6, 8, 10 и 12, обведены черными пунктирными линиями. (B) Экспрессия hSCARB2 и mScarb2. Клетки L929 трансфицировали плазмидами, кодирующими hSCARB2 или mScarb2. Трансфицированные клетки и клетки RD анализировали вестерн-блоттингом с антителом против hSCARB2 или против mScarb2. (C) Схематические диаграммы hSCARB2 и mScarb2. Красные линии представляют собой аминокислотные последовательности, кодируемые в экзонах 1, 3, 5, 7, 9 и 11, а черные линии представляют последовательности, кодируемые в экзонах 2, 4, 6, 8, 10 и 12 (нумерация от N-конца до конец C).Возможные сайты N-гликозилирования обозначены леденцами. Звездочкой отмечен сайт N-гликозилирования, который присутствует только в mScarb2. (D) Обработка PNGase F hSCARB2 и mScarb2. Клетки L929 трансфицировали плазмидами, кодирующими hSCARB2 или mScarb2. Клетки либо оставляли необработанными (Non Treat), либо обрабатывали PNGase F, и образцы анализировали вестерн-блоттингом с антителом против hSCARB2 или против mScarb2.

Стратегия сравнения эффективности заражения в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2 или mScarb2.

Чтобы сравнить эффективность одного раунда заражения EV71 через hSCARB2 и mScarb2, мы использовали EV71-GFP в качестве контрольного вируса. EV71-GFP, когда его используют для инфицирования клеток, экспрессирует достаточные уровни GFP для мониторинга становления инфекции. Однако этот вирус имел дефекты кинетики роста и распространения. Определить титр вируса ни по образованию бляшек, ни по методу TCID ₅₀ было невозможно. Когда RD-клетки инфицировали EV71-GFP в соответствующем разведении, GFP-положительные клетки становились видимыми примерно через 16-18 часов после инфицирования, что позволяет предположить, что кинетика экспрессии вирусного белка была необычной по сравнению с таковой для вируса дикого типа. Кластеры GFP-положительных или вирусных антиген-положительных клеток, которые распространились из исходного инфекционного центра, не наблюдались через 24 часа после инфицирования (A, слева и в центре). Напротив, когда клетки RD были инфицированы EV71 дикого типа, мы наблюдали кластеры вирусных антиген-положительных клеток, которые сформировались из-за распространения из инфекционных центров через 24 часа после инфицирования (A, правая панель). Таким образом, мы оценили эффективность инфекции EV71 в начальном раунде инфицирования, используя EV71-GFP и подсчитывая количество GFP-положительных клеток через 24 часа после инфицирования.

Стратегия сравнения эффективности заражения в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2 или mScarb2. (A) EV71-GFP нарушает вирусное распространение. Клетки RD инфицировали EV71 или EV71-GFP. Зараженные клетки визуализировали через 24 часа после заражения, чтобы наблюдать GFP с помощью флуоресцентной микроскопии (GFP), а затем окрашивали антителом против EV71. (От B до E) Эффективность заражения EV71-GFP через hSCARB2 с тегом FLAG или без него. (B) Эффективность трансфекции оценивали путем иммуноокрашивания антителом против hSCARB2.(C) Экспрессия hSCARB2 или hSCARB2-F была подтверждена вестерн-блоттингом с анти-hSCARB2 или анти-FLAG антителом. Экспрессию β-актина (ACTB) использовали в качестве контроля нагрузки. (D и E) Клетки, инфицированные EV71-GFP, визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии (D) и одновременно анализировали с помощью FACS для количественного определения количества GFP-положительных клеток (E). Данные FACS показаны как средние значения со стандартными отклонениями ( n = 3). Статистическая значимость определялась тестом Стьюдента t .Не было значительной разницы между hSCARB2 и hSCARB2-F ( P = 0,823).

Чтобы контролировать уровни экспрессии hSCARB2 и mScarb2 с помощью вестерн-блоттинга, мы добавили метку эпитопа FLAG к С-концам белков (5). Чтобы проверить, влияет ли C-концевой тег FLAG на инфекцию EV71, мы сравнили количество GFP-положительных клеток после заражения EV71-GFP в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2 с тегом FLAG или без него (E). Клетки L929 трансфицировали pCA-hSCARB2 или pCA-hSCARB2-F, и через 24 часа эффективность трансфекции и экспрессию hSCARB2 и hSCARB2-F подтверждали иммунным окрашиванием и вестерн-блоттингом, соответственно (C).Количество SCARB2-положительных клеток в клетках L929, трансфицированных pCA-hSCARB2 или pCA-hSCARB2-F, было сопоставимым (B). Два основных вида hSCARB2 и hSCARB2-F со сходной интенсивностью были обнаружены вестерн-блоттингом с использованием антитела против hSCARB2 (C). Таким образом, на эффективность трансфекции, уровень экспрессии и характер гликозилирования hSCARB2 не повлияло добавление тега FLAG. В этих условиях эти трансфицированные клетки L929 были инфицированы EV71-GFP и визуализированы через 24 часа после инфицирования (D).GFP-положительные клетки не наблюдались в клетках, трансфицированных ложной или пустой плазмидой, тогда как многие GFP-положительные клетки были обнаружены в клетках, трансфицированных hSCARB2 и hSCARB2-F (D). Для количественной оценки микроскопических наблюдений эти клетки были проанализированы с помощью сортировки клеток с активацией флуоресценции (FACS) для подсчета количества GFP-положительных клеток (E). Как сообщалось ранее, количество GFP-положительных клеток было значительно больше в клетках, экспрессирующих hSCARB2 или hSCARB2-F, чем в ложных или пустых клетках, трансфицированных плазмидой ( P <0.01) (37). Не было существенной разницы в количестве GFP-положительных клеток между клетками, экспрессирующими hSCARB2 и hSCARB2-F ( P = 0,823). Аналогичные результаты были получены с использованием mScarb2 без тегов и с тегами FLAG (данные не показаны). Эти результаты ясно показывают, что на инфицирование EV71 через SCARB2 не влияет C-концевой тег FLAG. На основании этих результатов мы могли сравнить эффективность заражения EV71-GFP с помощью этого анализа.

EV71-GFP инфицирование клеток L929, экспрессирующих hSCARB2 и mScarb2.

Мы провели однократный анализ инфекции, чтобы сравнить эффективность инфицирования EV71 в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2-F, по сравнению с mScarb2-F (). Клетки L929 либо ложно трансфицировали, либо трансфицировали pCA-hSCARB2-F, pCA-mScarb2-F или пустой плазмидой. После подтверждения эффективности трансфекции и экспрессии hSCARB2-F и mScarb2-F иммунным окрашиванием и вестерн-блоттингом (A и B) трансфицированные клетки инфицировали EV71-GFP и наблюдали через 24 часа после инфицирования (C).В клетках, трансфицированных ложной или пустой плазмидой, не было обнаружено GFP-положительных клеток. Большое количество GFP-положительных клеток было обнаружено в клетках, трансфицированных hSCARB2-F, тогда как небольшое количество было обнаружено в клетках, трансфицированных mScarb2-F (C). По данным анализа FACS, количество GFP-положительных клеток было значительно больше в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2-F, чем в клетках, экспрессирующих mScarb2-F ( P = 0,0032) (D). Эти результаты показывают, что EV71-GFP инфицирован эффективно через hSCARB2 и менее эффективно через mScarb2, и что эффективность заражения при использовании двух рецепторов значительно различалась.

Эффективность заражения EV71-GFP через hSCARB2 или mScarb2. Для сравнения эффективности инфицирования EV71 через hSCARB2-F по сравнению с mScarb2-F проводили однократные анализы на инфицирование. (A и B) Эффективность трансфекции и экспрессия hSCARB2-F и mScarb2-F подтверждали иммуноокрашиванием (A) и вестерн-блоттингом с антителом против FLAG (B) соответственно. ACTB использовали в качестве контроля загрузки для вестерн-блоттинга. (C и D) Трансфицированные клетки, инфицированные EV71-GFP, визуализировали с помощью флуоресцентной микроскопии (C), а затем анализировали с помощью FACS (D).Данные FACS показаны как средние значения со стандартными отклонениями ( n = 3). Статистическая значимость определялась тестом Стьюдента t .

Multistep EV71 инфицирование клеток L929, экспрессирующих hSCARB2 и mScarb2.

Для подтверждения результатов, полученных в эксперименте с однократным заражением с использованием EV71-GFP, мы выполнили многоэтапный анализ инфекции с заражением EV71 дикого типа при низкой множественности заражения (MOI) для изучения распространения вируса. Мы подтвердили иммунным окрашиванием и вестерн-блоттингом, что hSCARB2-F и mScarb2-F были трансфицированы и экспрессировались на аналогичных уровнях (данные не показаны). Клетки L929, экспрессирующие hSCARB2-F и mScarb2-F, инфицировали EV71, и титры вируса определяли в каждый момент времени (). EV71 эффективно рос в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2-F, но лишь умеренно в клетках L929, экспрессирующих mScarb2-F. В последний момент времени титр вируса в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2-F, был приблизительно в 100 раз выше, чем титр в клетках L929, экспрессирующих mScarb2-F. EV71 минимально размножался в клетках L929, трансфицированных ложной и пустой плазмидой. Эти результаты показывают, что EV71 инфицирован более эффективно через hSCARB2, чем через mScarb2.

Многоступенчатое инфицирование EV71 в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2 или mScarb2. Ложно-трансфицированные клетки L929 и клетки, трансфицированные пустой плазмидой или плазмидой, кодирующей hSCARB2-F или mScarb2-F, инфицировали EV71 с низкой MOI. Титры вирусов в клетках Vero определяли через 0, 24 и 48 ч после инфицирования. Данные представлены как средние титры вирусов со стандартными отклонениями ( n = 3).

Связывание hSCARB2 и mScarb2 с EV71.

Чтобы выяснить функциональное различие между hSCARB2 и mScarb2 на ранних стадиях заражения, мы провели выпадающие анализы для сравнения аффинности связывания растворимого hSCARB2-Fc и растворимого mScarb2-Fc для EV71 (A).EV71 инкубировали с BSA, контрольным Fc, hSCARB2-Fc или mScarb2-Fc и с гранулами анти-Fc-агарозы, и осажденные белки анализировали вестерн-блоттингом. EV71 VP1 был обнаружен при всех концентрациях hSCARB2-Fc, и количество осажденного VP1 увеличивалось в зависимости от концентрации, как сообщалось ранее (37). Однако, хотя mScarb2-Fc осаждается на уровне, аналогичном уровню hSCARB2-Fc при каждой концентрации (A, нижняя панель), VP1 не обнаруживается ни при какой концентрации mScarb2-Fc (A, верхняя панель).VP1 не осаждается с BSA или контрольным Fc. Эти данные показывают, что аффинность связывания hSCARB2 с EV71 была сильнее, чем у mScarb2.

Связывание hSCARB2 с EV71. (A) hSCARB2-Fc, связанный с EV71. Всего 10 мкг BSA, 10 мкг контрольного Fc или 1, 3 или 10 мкг hSCARB2-Fc или mScarb2-Fc связывали с агарозой против Fc человека и инкубировали с EV71. Осажденные белки анализировали вестерн-блоттингом с антителом против EV71 или против Fc. Антитело против EV71 детектировало в первую очередь вирусный белок VP1.(B) hSCARB2-Fc с N-связанными углеводными цепями или без них, связанными с EV71. EV71 инкубировали с 3 мкг контрольного Fc или 3 мкг hSCARB2-Fc, обработанными PNGase F, и белки осаждали антителом против Fc. Осажденные белки анализировали вестерн-блоттингом с антителом против EV71 или против Fc. (C) EV71, прикрепленный к экспрессирующим hSCARB2 клеткам L929. Клетки L929 либо ложно трансфицировали, либо трансфицировали пустой плазмидой, pCA-hSCARB2-F или pCA-mScarb2-F. Трансфицированные клетки инкубировали с EV71 при 4 ° C.После стадий отмывки клетки лизировали и анализировали вестерн-блоттингом с антителами против EV71, против FLAG или против ACTB. ACTB использовался в качестве контроля загрузки.

Чтобы определить, вносят ли N-связанные углеводные цепи hSCARB2 вклад в связывание с вирионами, нативную форму hSCARB2-Fc обрабатывали PNGase F. Удаление углеводных цепей из hSCARB2-Fc было подтверждено 25-кДа. сдвиг в сторону уменьшения, наблюдаемый при вестерн-блоттинге в белке, обработанном PNGase F.Обработанный PNGase F hSCARB2-Fc или необработанный hSCARB2-Fc смешивали с вирионами. После иммунопреципитации связанные вирионы и белки Fc анализировали вестерн-блоттингом (B). EV71 соосаждался как с обработанным PNGase F, так и с необработанным hSCABR2-Fc; однако интенсивность полосы EV71 VP1, соосажденной с обработанным PNGase F hSCARB2-Fc, была лишь умеренно ниже, чем интенсивность полосы, соосажденной с необработанным hSCARB2-Fc. Эти результаты показывают, что углеводные цепи hSCARB2 не важны для взаимодействия EV71-hSCARB2.

Чтобы оценить связывание EV71 с SCARB2 на плазматической мембране, мы выполнили анализы прикрепления вируса с использованием системы временной экспрессии (C). Клетки L929 либо ложно трансфицировали, либо трансфицировали пустой плазмидой, pCA-hSCARB2-F или pCA-mScarb2-F. Уровень экспрессии hSCARB2-F был аналогичен уровню экспрессии mScarb2-F (C, в центре). Через 48 часов после трансфекции эти клетки смешивали с EV71, промывали для удаления несвязавшегося вируса, лизировали вместе со связанными вирусами и затем анализировали вестерн-блоттингом.Количество EV71, которое было связано с клетками, трансфицированными pCA-hSCARB2, было существенно больше, чем количество EV71, связанное с ложно-трансфицированными клетками или с клетками, трансфицированными пустой плазмидой или pCA-mScarb2 (C, вверху). Эти данные показывают, что сродство связывания EV71 с hSCARB2 в мембране было сильнее, чем сродство связывания с mScarb2 в мембране.

Определение области hSCARB2, которая опосредует инфекцию EV71.

Поскольку EV71 инфицировал клетки L929 более эффективно через hSCARB2, чем через mScarb2 (), мы картировали области, которые были важны для инфекции EV71, с помощью химерных мутантов hSCARB2-mScarb2.Мы предположили, что эффективность заражения EV71 через hSCARB2 может быть снижена при замене важной (ых) области (ов) на соответствующие области в mScarb2 и наоборот. Для этого мы приготовили 6 химерных мутантов, у которых часть экзонов была заменена (А). В мутанте H (M1-4) -F, например, человеческая аминокислотная последовательность с 1 по 204, кодируемая в hSCARB2 экзонах 1-4, была заменена соответствующей областью из mScarb2. Другие химерные мутанты были сконструированы в соответствии с той же стратегией.Мы выполнили однократный анализ инфекции, чтобы сравнить эффективность заражения EV71-GFP через эти химеры. Все мутанты были трансфицированы и экспрессированы на аналогичных уровнях (B). Трансфицированные клетки инфицировали EV71-GFP и визуализировали под микроскопом через 24 часа после инфицирования (данные не показаны). Эти клетки анализировали с помощью FACS для подсчета количества GFP-положительных клеток (C). Среди химерных мутантов остова hSCARB2 мутант H (M1-4) -F не ​​смог опосредовать эффективную инфекцию EV71-GFP. Среди химер остова mScarb2 мутант M (h2-4) -F опосредовал эффективную инфекцию EV71-GFP.Эти данные показывают, что область от аминокислот 1 до 204, кодируемая в человеческих SCARB2 экзонах 1-4, важна для инфекции EV71-GFP.

Чтобы уточнить область, важную для инфекции EV71-GFP, мы сконструировали дополнительные 8 химерных мутантов, в каждом из которых был заменен один из экзонов с 1 по 4 (A). Эффективности трансфекции всех химерных мутантов были сопоставимы (данные не показаны). Экспрессию химерных мутантов в клетках L929 подтверждали вестерн-блоттингом (B). Мы обнаружили, что уровни экспрессии мутантов H (M1) -F, H (M2) -F, H (M3) -F, M (h2) -F и M (h5) -F были сопоставимы с уровнем экспрессии hSCARB2. -F, и соотношения двух основных молекулярных видов, мигрирующих при приблизительно 80 кДа и 70 кДа, были аналогичны таковым для hSCARB2-F.Были обнаружены два вида с приблизительно 80 кДа и 70 кДа для H (M4) -F и M (h4) -F; однако интенсивность видов 80 кДа в H (M4) -F и M (h4) -F была ниже, чем в hSCARB2. В клетках, трансфицированных M (h3) -F, мы обнаружили, по крайней мере, 3 вида, мигрирующих с приблизительно 55 кДа, 80 кДа и 90 кДа. Обработка SCARB2-F дикого типа и трех химерных мутантов PNGase F приводила к сходным кажущимся молекулярным массам (D). Этот результат показывает, что различия в подвижности и соотношении этих видов между этими тремя мутантами были вызваны разными паттернами N-гликозилирования, а не деградацией белка.Замена области в hSCARB2 на соответствующую область в mScarb2, и наоборот, может влиять на укладку белка и может способствовать различию в паттернах N-гликозилирования. Мы выполнили однократный анализ инфекции, чтобы определить эффективность заражения. Трансфицированные клетки инфицировали EV71-GFP и анализировали с помощью FACS для подсчета количества GFP-положительных клеток (C). В серии экспериментов с использованием химер остова hSCARB2 количество GFP-положительных клеток в клетках, экспрессирующих H (M4) -F, было значительно снижено ( P = 0.000039). В экспериментах с использованием химер остова mScarb2 количество GFP-положительных клеток в клетках, экспрессирующих M (h5) -F, было значительно больше ( P = 0,00071). Эти данные показывают, что область от аминокислот 142 до 204, кодируемая в SCARB2 экзоне 4, важна для инфекции EV71-GFP.

Для дальнейшего уточнения области, важной для инфекции EV71, мы сконструировали 4 химерных мутанта, в которых первая или вторая половина экзона 4 была заменена последовательностью другого вида происхождения, и мы проанализировали эффективность заражения при однократном заражении. проба.Каждый мутант показал промежуточную эффективность заражения между hSCARB2 и mScarb2 (данные не показаны). Эти данные показывают, что важные для инфекции EV71 аминокислоты локализованы по всей области от аминокислот 142 до 204.

Многоступенчатое инфицирование клеток L929, экспрессирующих H (M4) -F или M (h5) -F.

Чтобы подтвердить важную область, идентифицированную однократным анализом инфекции, мы провели многоэтапные анализы инфекции, чтобы определить распространение EV71 дикого типа в химер-экспрессирующих клетках L929.Клетки L929 трансфицировали плазмидами, кодирующими hSCARB2-F, mScarb2-F, H (M4) -F или M (h5) -F, и затем инфицировали EV71. Титры вирусов определяли в каждый момент времени (). EV71 рос в клетках L929, экспрессирующих M (h5) -F, так же эффективно, как и в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2-F, тогда как EV71 рос на умеренном уровне в клетках L929, экспрессирующих M (h5) -F или mScarb2-F. Конечный вирусный титр в клетках L929, экспрессирующих hSCARB2-F или M (h5) -F, был приблизительно в 40 раз выше, чем в клетках L929, экспрессирующих mScarb2-F или H (M4) -F.Эти результаты показывают, что мутант M (h5) -F функционировал как рецептор для EV71 с эффективностью, аналогичной эффективности hSCARB2-F.

Многоступенчатое заражение EV71. Ложно-трансфицированные клетки L929 и клетки, трансфицированные пустой плазмидой или плазмидой, кодирующей hSCARB2-F, mScarb2-F, H (M4) -F или M (h5) -F, инфицировали EV71 с низким значением MOI. Титры вирусов в клетках Vero определяли через 0, 12, 24, 36 и 48 ч после инфицирования. Данные представлены как средние титры вирусов со стандартными отклонениями ( n = 3).

Связывание H (M4) -F и M (h5) -F с EV71.

Поскольку область от аминокислот 142 до 204 была важна для одно- и многоступенчатой ​​инфекции EV71, мы предположили, что эта область играет критическую роль в связывании EV71. Перед проведением анализа прикрепления вируса экспрессия hSCARB2-F, mScarb2-F, H (M4) -F и M (h5) -F на клеточной поверхности была подтверждена биотинилированием белков клеточной поверхности (A). Аналогичные количества биотинилированного hSCARB2-F, mScarb2-F, H (M4) -F и M (h5) -F осаждали агарозной смолой NeutrAvidin.Без биотинилирования рецепторы, меченные FLAG, не осаждались. Эти результаты показывают, что эти рецепторы сравнительно экспрессировались на поверхности клетки. Затем клетки L929, трансфицированные плазмидой, кодирующей hSCARB2-F, mScarb2-F, H (M4) -F или M (h5) -F, смешивали с EV71, и связанные вирусы выявляли вестерн-блоттингом. Количество EV71 VP1, связавшегося с клетками, экспрессирующими hSCARB2-F или M (h5) -F, было явно больше, чем количество для клеток, которые были либо ложно трансфицированы, либо трансфицированы пустой плазмидой, mScarb2-F или H (M4) -F. .Эти результаты показывают, что M (h5) -F связывается с EV71 на уровне, аналогичном уровню hSCARB2-F.

Мутант M (h5) -F связывался с EV71 так же эффективно, как hSCARB2-F. (А) Биотинилирование белков клеточной поверхности. Клетки L929 трансфицировали пустой плазмидой, pCA-hSCARB2-F, pCA-mScarb2-F, pCA-H (M4) -F или pCA-M (h5) -F. Белки клеточной поверхности трансфицированных клеток биотинилировали и осаждали агарозной смолой NeutrAvidin. Осажденные белки (Avidin ppt) и лизаты общих клеток (клеточный лизат) анализировали вестерн-блоттингом с антителом против FLAG.(B) Связывание EV71 с химерами. Клетки L929 либо ложно трансфицировали, либо трансфицировали пустой плазмидой, pCA-hSCARB2-F, pCA-mScarb2-F, pCA-H (M4) -F или pCA-M (h5) -F. Эти клетки инкубировали с EV71 при 4 ° C. После стадий отмывки клетки и связанные вирусы лизировали и анализировали вестерн-блоттингом с антителом против EV71 или против FLAG. ACTB использовался в качестве контроля загрузки.

ОБСУЖДЕНИЕ

Вирусный рецептор играет несколько ролей, включая ключевые этапы проникновения вируса, прикрепления вируса, возможной интернализации и / или удаления оболочки. Мы показали, что EV71 эффективно инфицировал клетки мыши через hSCARB2, но не через mScarb2. Используя растворимые рецепторы и клетки, экспрессирующие рецепторы, мы продемонстрировали, что hSCARB2, но не mScarb2, эффективно связывается с EV71. Связывание mScarb2 с EV71 было слишком слабым, чтобы его можно было обнаружить в наших экспериментальных условиях. Мы пришли к выводу, что способность молекул SCARB2 связываться с вирионами EV71 является, по крайней мере, одним из основных функциональных различий между hSCARB2 и mScarb2. Другие роли рецепторов, такие как интернализация и снятие оболочки в молекуле SCARB2, требуют выяснения в дальнейших исследованиях.

Мы картировали область человеческого SCARB2, которая важна как для эффективного связывания вируса, так и для установления инфекции с аминокислотами 142–204, с использованием химерных рецепторов SCARB2 человека и Scarb2 мыши. Общая аминокислотная идентичность между hSCARB2 и mScarb2 составляла 85,8%, в то время как локальная аминокислотная идентичность аминокислот 142-204 составляла 76,2%. EV71 связывает область, которая отличается от последовательностей человека и мыши. Аминокислоты 142-204 могут образовывать центральную область сайта связывания вирионов.Мы приготовили гибридный белок, состоящий из аминокислот 142-204 hSCARB2 и области Fc человеческого IgG (h5-Fc), чтобы определить, достаточно ли этой области для связывания вируса. Однако попытка осаждения EV71 с помощью h5-Fc не увенчалась успехом (данные не показаны). Эта неудача предполагала две возможности: либо эта область h5, которая была бы достаточной для связывания вируса, не была надлежащим образом свернута в слитном белке, либо что некоторые аминокислоты вне этой области, которые являются общими для последовательностей человека и мыши, участвуют в взаимодействие.Недавно сообщалось, что домен спиральной спирали SCARB2 / LIMPII в положениях 152–167, который включает область, важную для инфекции и связывания EV71, необходим для связывания β-GC (5). Этот отчет указывает на то, что область от аминокислот 142 до 204 потенциально обнажена на поверхности белка.

Нет потенциального сайта N-гликозилирования в области от аминокислот 142 до 204 hSCARB2 или mScarb2. Более того, мы показали, что N-связанные углеводные цепи hSCARB2 не являются существенными для взаимодействия EV71-hSCARB2.Взятые вместе, результаты предполагают, что прямое белок-белковое взаимодействие необходимо для взаимодействия EV71-SCARB2. Однако в экспериментах по иммунопреципитации с использованием растворимого hSCARB2-Fc, hSCARB2-Fc, обработанный PNGase F, соосаждал уменьшенные количества EV71. Следовательно, мы не можем исключить возможность того, что N-связанные углеводные цепи играют некоторую роль в связывании hSCARB2 с EV71, например, в мостиковом взаимодействии EV71-hSCARB2 или стабилизации конформации hSCARB2.

Было идентифицировано и охарактеризовано несколько типов рецепторов пикорнавируса.Каждый тип рецептора имеет характеристики, общие для всей семьи. Рецепторы первого типа, которые включают рецептор полиовируса (PVR), молекулу межклеточной адгезии 1 (ICAM-1) риновирусов основной группы, рецептор вируса Коксаки В человека и рецептор аденовируса 2 (HCAR) вируса Коксаки В1-В6 и молекулу адгезии сосудистых клеток 1 (VCAM-1) вируса энцефаломиокардита (EMCV) являются членами суперсемейства иммуноглобулинов, внеклеточные области которого имеют от двух до семи Ig-подобных доменов (9, 15, 18, 20). Эти трансмембранные рецепторы типа II стерически связываются с каньоном вируса в дистальном Ig-подобном домене (D1) через несколько аминокислот (22, 34).Рецепторы второго типа: α _v β ₁ , α _v β ₃ и α _v β ₆ интегринов пареховируса, вируса Кокацкива А9 и вируса ящура ( FMDV), принадлежат к семейству интегринов и связываются с экспонированным мотивом RGD на поверхности вириона через свою α- или β-цепь (7, 34, 35, 38). Рецепторы третьего типа, которые включают рецептор липопротеинов низкой плотности (LDL-R) риновирусов минорной группы и фактор ускорения распада (DAF) некоторых эховирусов и вирусов Коксаки группы B, связываются за пределами каньона посредством повторов типа A комплемента и короткого консенсуса. повторы (SCR) соответственно (4, 9, 16).Хотя SCARB2 не принадлежит ни к суперсемейству иммуноглобулинов, ни к семейству интегринов, мы идентифицировали область (аминокислоты 142–204) hSCARB2, которая опосредует прикрепление вируса и инфекцию. В этой области несколько аминокислот, охватывающих всю область от 142 до 204, важны для связывания и инфицирования. Аналогичные результаты были показаны для области D1 PVR. Было обнаружено, что для связывания полиовируса важны три основных сайта: (i) петля CC ‘через цепь C ″, (ii) граница цепи D и петли DE и (iii) цепь G (2, 3, 15, 24, 29).Следовательно, hSCARB2 связывается с EV71 с несколькими точками контакта, что предполагает, что область, охватывающая аминокислоты 142–204 hSCARB2, может связываться с вирусным каньоном аналогично взаимодействию между полиовирусом и PVR. Кристаллизация вирионов EV71 и SCARB2 или сокристаллизация EV71 со SCARB2 должна выявить взаимодействие EV71-SCARB2 на атомном уровне. Идентификация области в hSCARB2, которая опосредует связывание и инфекцию, принесет новое понимание природы взаимодействия вирус-рецептор пикорнавирусов, а дальнейшие исследования внесут вклад в полное понимание связывания EV71 с рецептором.

Таким образом, наши данные показали, что аминокислоты с 142 по 204 (кодируемые в человеческом экзоне 4 SCARB2 ) SCARB2 важны для инфицирования и связывания EV71. Идентификация этой области человеческого SCARB2, которая необходима для инфекции EV71, в значительной степени способствует пониманию взаимодействий вирус-рецептор, поскольку SCARB2 человека не имеет известных мотивов рецептора пикорнавируса. Дальнейшие исследования прояснят первые шаги инфекции EV71. Замена экзона 4 мыши Scarb2 соответствующей последовательностью SCARB2 человека приведет к разработке новой модели мыши, чувствительной к EV71.Эти мыши внесут большой вклад в понимание нейропатогенности EV71 in vivo и, возможно, в разработку вакцины и / или противовирусного препарата.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим H. Shimizu и Y. Nishimura (NIDD of Japan) за предоставленный нам штамм EV71 SK-EV006 / Malaysia / 97 и за полезные обсуждения, Y. Kawaoka (University of Tokyo) за предоставленные нам pCAGGS .MCS и K. Fujii за полезные обсуждения и критическое прочтение рукописи.

Эта работа частично поддержана грантом на научные исследования (C) (205

) Японского общества содействия науке, частично грантом для молодых ученых (B) ( 217) от Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий (MEXT) и частично грантом на исследования по возникающим и вновь возникающим инфекционным заболеваниям от Министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии. .

Сноски

^▿ Опубликовано досрочно 9 марта 2011 г.

ССЫЛКИ

1. Ахмад К. 2000. В Сингапуре сообщается о вспышке болезни рук, ягодиц и рта. Ланцет 356: 1338. [PubMed] [Google Scholar] 2. Аоки Дж., Койке С., Исэ И., Сато-Йошида Ю., Номото А. 1994. Аминокислотные остатки на рецепторе полиовируса человека, участвующие во взаимодействии с полиовирусом. J. Biol. Chem. 269: 8431–8438 [PubMed] [Google Scholar] 3. Белнап Д. М. и др. 2000. Трехмерная структура рецептора полиовируса, связанного с полиовирусом.Proc. Natl. Акад. Sci. США. 97: 73–78 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Бергельсон Дж. М. и др. 1994. Фактор ускорения распада (CD55), гликозилфосфатидилинозитол-заякоренный регуляторный белок комплемента, является рецептором для нескольких эховирусов. Proc. Natl. Акад. Sci. США. 91: 6245–6248 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Blanz J., et al. 2010. Мутации, вызывающие заболевание, в лизосомном интегральном мембранном белке типа 2 (LIMP-2) раскрывают природу связывания с его лигандом бета-глюкоцереброзидазой. Гм. Мол. Genet. 19: 563–572 [PubMed] [Google Scholar] 6. Бломберг Дж. И др. 1974. Новый тип энтеровируса, связанный с эпидемией асептического менингита и / или болезней рук, ног и рта. Ланцет II: 112. (Письмо) [PubMed] [Google Scholar] 8. Чан Л. Г. и др. 2000. Смерть детей во время вспышки болезни рук, ног и рта в Сараваке, Малайзия: клинические и патологические характеристики болезни. Для исследовательской группы вспышек. Clin. Заразить. Дис. 31: 678–683 [PubMed] [Google Scholar] 9.Койн С. Б., Бергельсон Дж. М. 2006. Сигналы киназ Abl и Fyn, индуцированные вирусом, позволяют проникать вирусу Коксаки через плотные эпителиальные контакты. Ячейка 124: 119–131 [PubMed] [Google Scholar] 10. Эскелинен Э. Л., Танака Ю., Сафтиг П. 2003. На кислотном крае: новые функции белков лизосомных мембран. Trends Cell Biol. 13: 137–145 [PubMed] [Google Scholar] 11. Fujimoto T., et al. 2002. Вспышка заболевания центральной нервной системы, связанного с болезнью рук, ног и рта, в Японии летом 2000 года: обнаружение и молекулярная эпидемиология энтеровируса 71. Microbiol. Иммунол. 46: 621–627 [PubMed] [Google Scholar] 12. Гамп А. С. и др. 2003. Дефицит LIMP-2 / LGP85 вызывает обструкцию тазового перехода мочеточника, глухоту и периферическую невропатию у мышей. Гм. Мол. Genet. 12: 631–646 [PubMed] [Google Scholar] 13. Хагивара А., Тагая И., Йонеяма Т. 1978. Эпидемия кисты, ящура и ротовой полости, связанная с энтеровирусной инфекцией 71. Интервирология 9: 60–63 [PubMed] [Google Scholar] 14. Hatakeyama S., et al. 2005. Повышенная экспрессия α2,6-связанной сиаловой кислоты на клетках MDCK улучшает изоляцию вирусов гриппа человека и оценку их чувствительности к ингибитору нейраминидазы.J. Clin. Microbiol. 43: 4139–4146 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Хеват Э. А. и др. 2000. Клеточный рецептор человеческого риновируса 2 связывается вокруг 5-кратной оси, а не в каньоне: структурный вид. EMBO J. 19: 6317–6325 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17. Хо М. и др. 1999. Эпидемия энтеровирусной 71 инфекции на Тайване. Тайваньская рабочая группа по эпидемии энтеровируса. N. Engl. J. Med. 341: 929–935 [PubMed] [Google Scholar] 18. Хубер С. А. 1994. VCAM-1 представляет собой рецептор вируса энцефаломиокардита на эндотелиальных клетках сосудов мышей.J. Virol. 68: 3453–3458 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 19. Кобаса Д., Роджерс М. Э., Уэллс К., Каваока Ю. 1997. Гемадсорбционная активность нейраминидазы, сохраненная в вирусах птичьего гриппа А, не влияет на репликацию вируса у уток. J. Virol. 71: 6706–6713 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20. Колаткар П. Р. и др. 1999. Структурные исследования двух серотипов риновирусов в комплексе с фрагментами их клеточного рецептора. EMBO J. 18: 6249–6259 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21.Куронита Т. и др. 2002. Роль лизосомального мембранного белка LGP85 в биогенезе и поддержании эндосомальной и лизосомальной морфологии. J. Cell Sci. 115: 4117–4131 [PubMed] [Google Scholar] 23. Макминн П. С. 2002. Обзор эволюции энтеровируса 71 и его клиническое значение и значение для общественного здравоохранения. FEMS Microbiol. Rev. 26: 91–107 [PubMed] [Google Scholar] 24. Моррисон М. Э., Хе Й. Дж., Вин М. В., Хогл Дж. М., Раканиелло В. Р. 1994. Мутагенез со сканированием гомологов выявляет остатки рецептора полиовируса, важные для связывания и репликации вируса.J. Virol. 68: 2578–2588 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25. Нагата Н. и др. 2002. Пирамидное и экстрапирамидное участие в экспериментальной инфекции яванских макак энтеровирусом 71. J. Med. Virol. 67: 207–216 [PubMed] [Google Scholar] 26. Nishimura Y., et al. 2009. Гликопротеин-лиганд-1 Р-селектина человека является функциональным рецептором энтеровируса 71. Nat. Med. 15: 794–797 [PubMed] [Google Scholar] 28. Раканиелло В. 2007. Picornaviridae: вирусы и их репликация, с.795–838 В Книп Д. М., Хоули П. М., Гриффин Д. Э., Лэмб Р. А., Мартин М. А., Ройзман Б., Штраус С. Э. (ред.), Филдс-вирусология, 5-е изд. Липпинкотт Уильямс и Уилкинс, Филадельфия, Пенсильвания [Google Scholar] 29. Раканиелло В. Р. 1996. Ранние события полиовирусной инфекции: вирус-рецепторные взаимодействия. Proc. Natl. Акад. Sci. США. 93: 11378–11381 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Речек Д. и др. 2007. LIMP-2 представляет собой рецептор лизосомального маннозо-6-фосфат-независимого нацеливания бета-глюкоцереброзидазы.Ячейка 131: 770–783 [PubMed] [Google Scholar] 31. Рид Л. Дж., Мюнч Х. 1938. Простой метод оценки 50-процентных конечных точек. Являюсь. J. Hyg. (Лондон) 27: 493–497 [Google Scholar] 32. Россманн М. Г., Джонсон Дж. Э. 1989. Икосаэдрическая структура вируса РНК. Анну. Rev. Biochem. 58: 533–573 [PubMed] [Google Scholar] 33. Шмидт Н. Дж., Леннетт Э. Х., Хо Х. 1974. По-видимому, новый энтеровирус, выделенный у пациентов с заболеванием центральной нервной системы. J. Infect. Дис. 129: 304–309 [PubMed] [Google Scholar] 34.Семлер Б., Виммер Э. 2002. Молекулярная биология пикорнавирусов. ASM Press, Вашингтон, округ Колумбия [Google Scholar] 36. Ямаёши С. и др. 2008. Матричный белок VP40 вируса Эбола использует транспортную систему COPII для своего внутриклеточного транспорта. Cell Host Microbe 3: 168–177 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37. Ямаёши С. и др. 2009. Рецептор скавенджера B2 является клеточным рецептором энтеровируса 71. Nat. Med. 15: 798–801 [PubMed] [Google Scholar] 38. Янь Дж. Дж., Ван Дж. Р., Лю К. С., Ян Х.Б., Су И. Дж. 2000. Вспышка энтеровирусной инфекции 71 на Тайване, 1998 г .: всестороннее патологическое, вирусологическое и молекулярное исследование случая молниеносного энцефалита. J. Clin. Virol. 17: 13–22 [PubMed] [Google Scholar] 39. Ян Б., Чуанг Х., Ян К. Д. 2009. Сиалированные гликаны как рецептор и ингибитор энтеровирусной инфекции 71 для кишечных клеток DLD-1. Virol. Дж. 6: 141. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Подкаст о Дивизионе III Бейсбол: Эпизод 71: Обзор Ближнего Востока 2021 года

15 марта 2021 года

Добро пожаловать в Эпизод 71 Подкаста О Дивизионе III Бейсбол.Это пятая из восьми региональных предварительных версий модулей. один охватывает Ближний Восток и его пять конференций. Прежде, чем мы начнем, мы быстро обсудим выходные, которые были в D3, статус SCIAC, и кричать North Central (IL) за их нет. Тогда мы приступим к делу:

• AMCC (в 7:00)
  
  • Ла-Рош вернул давнего главного тренера и много талант, как всегда, но потребуется немного молодых кадров, чтобы активизировать, если они хотят доминировать на этой конференции как обычно
• HCAC (в 11:25)
  
  • Франклин доказал свою способность конкурировать с лучшими командами и, похоже, готовы снова выиграть эту конференцию
  • HCAC, вероятно, немного недооценен, с Андерсоном, Трансильвания, Роуз-Халман и Эрлхэм — все они способны сезоны
• MIAA (в 17:00)
  
  • Адриан вернул почти всех старших на пятый и второй год обучения. лучших питчеров страны; в этом году они наконец-то совершить сверхглубокий пробег?
  • Есть надежда…для голландцев пошуметь в этом конференция также
• NCAC (в 26:00)
  • У Вустера по-прежнему много талантов высшего уровня, но он входит в сезон с гораздо большей неопытностью, чем обычно
  • Денисон вернул несколько ключевых игроков на пятый год и устрашающий состав, но для повышения
  потребуются более молодые кадры.
  • ДеПау и Виттенберг определенно могли пошуметь, когда колодец
• OAC (в 40:30)
  • Heidelberg имеет некоторых участников Мировой серии 2019 года вернулся к # Year5, что должно помочь им продолжить борьбу за
  • У Болдуина Уоллеса, похоже, довольно загруженный состав, но очень молодой персонал качки
  • Оттербейн, Джон Кэрролл, Маунт-Юнион, Северный Огайо, несомненно, все тоже в миксе
  • Ой ой…это Мариетта вернулась?
• PAC (в 59:10)
  • У Вашингтона и Джефферсона не должно быть проблем в этом конференция — посмотрим, смогут ли они провести еще одну Мировую серию бег
• UAA (в 1:04:05)
  • Case Western не сможет сыграть в свою обычную безумно жестко график, но по-прежнему стараемся максимально использовать сложные и уникальные ситуация

Мы закончили (в 1:08:00) криком нескольких других известных игроков. ауты, наш игрок и питчер года выбирают для региона, и наши команды побеждать. Потом прощаемся. Спасибо за внимание!

Следуйте за нами в Twitter @ d3baseballpod (если вы хотите добраться до нас там) и @CespedesBBQ.

Присылайте нам свои лучшие истории о D-III или любые другие комментарии или вопросы на [email protected]

Подписка + оценка / обзор в iTunes: https://itunes.apple.com/us/podcast/the-podcast-about-division-iii-baseball/id1342691759

State Route 71 (US 441) Chapman Highway Evans Road to Burnett Lane

Обзор

Проект вдоль State Route 71 (US 441 / Chapman Highway), от Evans Road до Burnett Lane в округе Нокс, включает расширение существующей дороги примерно на 0.9 миль.

Этот проект является частью более масштабных усилий по повышению безопасности и эффективности коридора шоссе Чепмен в графствах Нокс, Блаунт и Севьер. Из-за значительного размера проекта в целом предлагаемые улучшения были разделены на шесть более мелких разделов или этапов. Чтобы узнать больше обо всех улучшениях коридора, посетите веб-сайт проекта Chapman Highway.

Цель и необходимость

Chapman Highway — это крупное сообщение между Ноксвиллем и Севьервиллем, по которому проходит коммерческий и жилой транспорт.Ускоренный рост и развитие коридора и, как следствие, большой объем движения привели к негативным проблемам с безопасностью и пропускной способностью.
Предлагаемые улучшения призваны уменьшить количество аварий и удовлетворить насущные потребности безопасности в коридоре с интенсивным движением.

Дизайн

Chapman Highway от Evans Road до Burnett Lane — один из шести участков, которые улучшат коридор в графствах Нокс, Блаунт и Севьер. (см. веб-сайт проекта Chapman Highway)

Участок между Evans Road и Burnett Lane будет следовать существующей трассе, расширяя проезжую часть до пяти полос с четырьмя 11-футовыми полосами движения (по две в каждом направлении), выделенной 12-футовой полосой центрального поворота и 3-футовыми мощеными обочинами .

Небольшая часть проекта, между East Simpson Road и Sevierville Pike, будет перестроена, чтобы улучшить доступ к коридору. Подъездные пути на этом участке будут изменены с учетом новой трассы. Кроме того, Evans Road будет превращен в тупик и не будет пересекать Chapman Highway.

Будут установлены дренажные сооружения и будет расширена существующая водопропускная труба возле Севьервиль-Пайк. Две подпорные стены также будут построены к западу от Уэст-Симпсон-роуд.

Светофоры, велосипедные дорожки и тротуары для этого проекта не предусмотрены.

разрешений по Разделу V на юго-западе Тихого океана EPA (регион 9) | Разрешение в соответствии с Законом о чистом воздухе

Агентство по охране окружающей среды

имеет право выдавать и изменять разрешения по Разделу V на землях племен и на некоторых территориях США (таких как Гуам и Северные Марианские острова) согласно 40 CFR Part 71. Ниже перечислены разрешения Part 71, выданные или измененные, начиная с 2006 года. Для информации Что касается разрешений по Части 71, выданных или измененных до 2006 г., свяжитесь с нами по адресу R9AirPermit @ epa. губ.

На этой странице:

Разрешения на рассмотрении

Если в таблице отображается значок «+» (плюс), щелкните для получения дополнительной информации.

Раздел V (Часть 71) Разрешения на рассмотрении EPA на юго-западе Тихого океана (регион 9)

Название учреждения	Государство	Расположение	Тип проекта	Статус	Связанные документы	Комментарии к сроку	Контакт
НЕТ	В настоящее время на юго-западе Тихого океана (регион 9) Агентства по охране окружающей среды на юго-западе Тихого океана (регион 9) нет ожидающих разрешения по Разделу V.

---

Выдано разрешений

Если в таблице отображается значок «+» (плюс), щелкните для получения дополнительной информации.

Раздел V (Часть 71) Разрешения, выданные регионом 9

Название учреждения	Штат / территория	Расположение	Тип	Дата окончательного действия	Статус	Связанные документы
Шахтный комплекс миссии ASARCO — Сан-Ксавьер	AZ	Сахуарита	Продление	10.08.2017	Активный	EPA-R09-OAR-2017-0252
Desert View Power, LLC	CA	Мекка	Продление	30.09.2020	Активный	EPA-R09-OAR-2020-0266
Масло Mobil Guam Cabras	ГУ	Пити, Гуам	Начальный	10. 04.2017	Активный	EPA-R09-OAR-2016-0216
Mobil Oil Saipan Terminal	CNMI	Сайпан	Начальный	26.12.2018	Активный	EPA-R09-OAR-2018-0695
Когенерационная установка в казино Моронго	CA	Запрет	Продление	2020/04/06	Прекращено	EPA-R09-OAR-2019-0533
Индейское сообщество реки Пималько Хила	AZ	Чендлер	Продление	23/10/2006	Активный	EPA-R09-OAR-2007-1114
Свалка Солт-Ривер	AZ	В окрестностях Скоттсдейла	Продление	21.09.2020	Активный	EPA-R09-OAR-2020-0373
Энергетический центр Саут-Пойнт	AZ	Долина Мохаве	Продление	13. 09.2018	Активный	EPA-R09-OAR-2018-0541
Свалка Tri-Cities	AZ	Скоттсдейл	Продление	2020/10/09	Прекращено	EPA-R09-OAR-2020-0526
Tri-Cities Landfill Energy Facility (TCLEF)	AZ	Скоттсдейл	Продление	10.04.2017	Прекращено	EPA-R09-OAR-2015-0517

---

Начало страницы

Зарегистрировано

1881 новый случай COVID, 71 из них — в нашем центральном регионе 26 апреля 2021 г. | WTAJ

HARRISBURG, Pa.(WTAJ) — Со вчерашнего дня Департамент здравоохранения Пенсильвании подтвердил 1881 новый случай COVID-19, в результате чего общее количество известных случаев заболевания с начала пандемии по штату достигло 1 136 057.

В Израиле изучают случаи воспаления сердца у людей, получивших прививку от COVID от Pfizer

С воскресенья в реестре смертей штата Пенсильвания было зарегистрировано 5 новых смертей, в результате чего в общей сложности 25 988 случаев смерти были связаны с COVID-19.

Всего с COVID-19 госпитализировано 2561 человек.Из этого числа 544 пациента находятся в отделении интенсивной терапии с COVID-19. Возраст большинства госпитализированных пациентов составляет 65 лет и старше, и большинство смертей приходится на пациентов 65 лет и старше.

Процент позитивности по штату за неделю с 16 по 22 апреля составил 8,6%.

Восемьдесят девять (89) процентов случаев заболевания в Пенсильвании были признаны излеченными от COVID-19.

Государство сообщает, что было введено более 8 миллионов доз вакцины. Вы можете просмотреть цифры ниже на этой странице.

На сегодняшний день 4 355 119 человек дали отрицательный результат теста.

С воскресенья в нашем центральном районе зарегистрирован 71 новый случай. Таким образом, общее количество известных случаев COVID-19 составляет 72 827 человек.

Ниже представлена ​​разбивка по округам:

Общее количество смертей, связанных с COVID-19, по округам:

BEDFORD: 131 (+0)
BLAIR: 319 (+0)
КАМБРИЯ: 415 (+0)
КАМЕРОН: 7 (+0)
ЦЕНТР: 219 (+0)
CLEARFIELD: 135 (+0)
ELK: 38 (+0)
HUNTINGDON: 128 (+0)
ДЖЕФФЕРСОН: 95 (+0)
SOMERSET: 196 (+0)

НОВЫЕ МЕСТНЫЕ СМЕРТИ: 0

Распространение вакцины против COVID-19

Больницы Пенсильвании начали получать поставки вакцины Pfizer-BioNTech COVID-19 на неделе декабря. 14 и Moderna COVID-19 на неделе 21 декабря. Вакцина Janssen (Johnson & Johnson) COVID-19 была впервые размещена в Пенсильвании на неделе 1 марта. В пятницу, 23 апреля, CDC и FDA уведомили всех COVID- 19 поставщиков вакцин отметили, что приостановка введения доз вакцины Johnson & Johnson (Janssen) была отменена. После этого объявления в Пенсильвании возобновили вакцинацию компании Janssen. В число вакцинаций в Пенсильвании не включены Филадельфия, которая находится в ее юрисдикции, или федеральные учреждения, которые работают напрямую с федеральным правительством.

Основные характеристики вакцины

• По данным CDC, по состоянию на утро понедельника, 26 апреля, Пенсильвания ввела первые дозы вакцины 47,3% населения, имеющего право на вакцинацию, и штат занимает 10-е место среди всех 50 штатов по количеству введенных первых доз вакцины по процентной доле населения.
• По данным CDC, по состоянию на утро понедельника, 26 апреля, Пенсильвания занимает 5 ^{-е место среди всех 50 штатов по общему количеству введенных доз.}
• Поставщики вакцин выполнили 8 043 744 общих дозы вакцины по состоянию на понедельник, 26 апреля.
• 3 200 270 человек полностью вакцинированы; при семидневном скользящем среднем более 96 800 человек в день получают вакцины.
• 1 914 947 человек вакцинированы частично, то есть они получили одну дозу двухдозовой вакцины.
• 5 115 217 человек получили по крайней мере свою первую дозу.

• На этой неделе до 1 мая будет распределено в общей сложности 8 326 640 доз:
  • 297 520 первых / разовых доз будут распределены на этой неделе.
  • 276 520 вторых доз будут распределены на этой неделе.

• На сегодняшний день мы ввели 8 043 744 дозы, всего до 26 апреля:
  • Первые / разовые дозы: 5 115 217 введено
  • Вторые дозы: 2 928 527 введено

Ношение маски требуется на всех предприятиях и в любое время выходят из дома, даже если полностью вакцинированы. Регулярное ношение масок имеет решающее значение для предотвращения распространения COVID-19.

149 970 человек имеют положительный тест на вирусный антиген и считаются вероятными случаями, а 639 человек имеют положительный серологический тест и либо симптомы COVID-19, либо подвержены высокому риску.

Подпишитесь на информационный бюллетень WTAJ, чтобы получать последние местные новости, погоду и события, которые важны для вас.

LSEF — регион VII

LOUISIANA REGION VII НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКАЯ ЯРМАРКА

Информация / Регистрация

71-я ежегодная региональная VII научная ярмарка 22–26 февраля 2021 г., для судейства младшего и старшего дивизиона. Справедливое судейство в стадии завершения. Результаты будут опубликованы до вторника, 2 марта 2021 г.

.

---

width = «100%» size = 4 color = «black»>

Заявление о соблюдении этических норм: Мошенничество и неправомерное поведение в научных целях не допускается ни на каком уровне исследований или соревнований. Это включает плагиат, подлог, использование представления работы другого исследователя как своей собственной, а также фальсификацию данных. Мошеннические проекты не будут допущены к участию в партнерских ярмарках и Intel ISEF. LSEF и Общество науки и общественности оставляют за собой право отозвать признание проекта, впоследствии признанного мошенническим.

Важные даты и информация о праве на участие
• Регистрация для Региона VII откроется. Понедельник, 14 декабря 2020 г., в 9:00.


• В этом году, наряду с обычными документами, мы попросили учащихся отправить короткое 2–3-минутное (макс.) Видео со своей доской. Информация. Вы можете использовать любую программу (документы Google и т. Д.), Но убедитесь, что при отправке она не требует пароля или входа в систему.

  Мы рекомендуем этот формат с инструкциями — .

  Мы не принимаем и не одобряем ничего, превышающее 3 минуты, а также тех, у кого указана школа или подтверждения.

  Затем мы рекомендуем вам загрузить на Youtube, чтобы они могли просто встроить ссылку в свой план исследования для рассмотрения и утверждения.

  Видеоинструкции по проекту Запишите видео (максимальная продолжительность 2-3 минуты для региональных и государственных соревнований; максимум 2 минуты для соревнований ISEF (старшая школа)), объясняющее ваш проект.Целевая аудитория этого видео — представители широкой общественности, которые посетят ярмарку в День общественности. Несмотря на то, что судьи будут иметь доступ к этому видео, они не будут в центре внимания их проекта.

  Что включить в ваше видео:

  1. Представьтесь: Укажите свое полное имя и город. Вместо того, чтобы повторять название вашего проекта, рассмотрите возможность объяснения вашего проекта одним предложением.

  2. Объясните свой проект: Обобщите свое исследование по основным моментам:
  а.Что ты сделал?
  б. Что ты нашел?
  c. Какие выводы вы сделали?
  К сведению:
  • Вы можете использовать любой имеющийся у вас реквизит или визуальные эффекты, которые соответствуют правилам отображения и безопасности.
  • Не включайте в свое видео никого, кроме студентов-исследователей проекта.

  3. Рекомендации по съемке: Эти видео не будут редактироваться. Чтобы ваше видео наилучшим образом отражало вашу работу, помните о следующих передовых методах при съемке:

  a.Пожалуйста, говорите четко.
  б. Снимайте себя в хорошо освещенной и не отвлекающей обстановке, чтобы все внимание зрителя было сосредоточено на вас и вашей работе.
  c. Для достижения наилучших результатов снимайте видео горизонтально (альбомно).
  d. Во время съемки держите камеру неподвижно и на месте.
  е. Говорите достаточно четко и громко, чтобы запись могла уловить каждое ваше слово.
  f. Избегайте длительных пауз.
  грамм. Слушайте видео после записи, чтобы убедиться, что ваш голос ясен и слышен, и что видео не улавливает слишком много фонового шума.

  Вы также можете представить Quad Chart вместо видео. Ниже приведены подробные сведения о требованиях ISEF и справочная информация: Руководство по материалам проекта Обязательно подготовьте свою четырехъядерную диаграмму в презентации PowerPoint, а затем сохраните ее в формате PDF, чтобы создать ссылку для вставки в ваши документы для рассмотрения судьями.

  Итак, когда студент регистрируется и отправляет свои документы, он должен загрузить 2 отдельных PDF-файла:
  • PDF №1 — Все формы утверждения (формы 1, 1A, 1B и все другие формы утверждения, необходимые для их проекта) и информационная форма LSEF для учащихся, регион VII, , которая будет приложена к вашему подтверждению регистрации для заполнения.
  • PDF № 2 — Официальная аннотация, их исследовательская работа / план БЕЗ БЛАГОДАРНОСТИ, а также ссылка на их видео выше для просмотра судьями. .



• Студенты будут проинформированы по электронной почте, если они соответствуют критериям и одобрены для участия в региональной ярмарке.


• Ни один студент не может участвовать в более чем ONE региональных ярмарках, чтобы получить право на получение статуса штата. Установленные в нарушении не будут утверждены для государственной регистрации.


• Из-за проблем с регистрацией, обработкой и проверкой SRC крайний срок для регистрации и подачи всех проектных документов должен быть в течение 10 дней с момента вашего справедливого заключения или до пятницы, 5 февраля 2021 г. , в зависимости от того, что наступит первая . Если ваша школьная ярмарка состоится после этой даты, напишите в наш офис, чтобы мы могли завершить процесс рассмотрения до регионального конкурса. После этой даты мы не можем гарантировать своевременное одобрение конкурса.Обратите внимание, что все документы должны быть заполнены, должным образом датированы и включать форму информации о студентах LSEF региона VII, которая находится в вашем электронном письме с подтверждением после регистрации ниже.
• LSEF Старшие финалисты Региона VII, выбранные для участия в ISEF — Вы должны согласиться представлять LSEF, путешествовать и соревноваться во время приема, если поездка одобрена из-за пандемии. Пожалуйста, убедитесь, что вы хотите и можете присутствовать, так как другие хотели бы занять ваше место. Политика LSEF соответствует правилам ISEF: «Ожидается, что финалисты Intel ISEF будут присутствовать на всей неделе программы, и им предлагается посещать все мероприятия Intel ISEF.Посещение публичной выставки проектов в четверг и обеих церемоний награждения обязательно. Единственными оправдательными пропусками для выполнения этих обязательных функций являются выпускные церемонии, болезнь или чрезвычайные семейные обстоятельства. Если финалисты имеют конфликт в расписании, они должны немедленно проконсультироваться со своими директорами ярмарки ».

Инструкции по онлайн-регистрации:

• Нажмите кнопку «Регистрация студента / проекта » над (вы перейдете к форме / системе онлайн-регистрации)

• Страница 1: Создайте учетную запись (второе поле внизу страницы) Введите действующий адрес электронной почты (введите внимательно и правильно и используйте адрес электронной почты, который вы будете часто проверять).Выберите пароль (вам нужно будет записать его для справки позже). Нажмите, чтобы сохранить

• Страница 2: Личная и контактная информация (все необходимое). Нажмите, чтобы сохранить

• Страница 3: Информация о школе . Найдите свою школу в раскрывающемся списке (если вы не видите свою школу, обратитесь в свою школу, чтобы зарегистрироваться по адресу www.outreach.lsu.edu/lsef на странице школы). Выберите тип школы, класс, полное имя учителя и адрес электронной почты, а также выберите подразделение (младший или старший).( ОЧЕНЬ ВНИМАТЕЛЬНО ВЫБИРАЙТЕ РЕГИОН VII МЛАДШИЙ ИЛИ СТАРШИЙ ОТДЕЛ, НЕ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ) Нажмите и сохраните

• Страница 4: Информация о проекте. Выберите «Позвоночные», «Человек», «PHBA» и / или «Опасные» (щелкните все подходящие варианты). Введите название проекта, аннотацию (вы можете скопировать и вставить официальную аннотацию). Введите категорию проекта, а затем подкатегорию (описания можно найти, щелкнув ссылку рядом с раскрывающимся списком). Затем установите флажок для темы (-ов), которую может включать в себя ваш проект, если таковая имеется, в противном случае не устанавливайте флажок. Нажмите, чтобы сохранить

• Стр. 5: Индивидуальный или командный. Укажите, является ли это командным проектом. Если да, укажите имя (имена) члена команды, возраст, класс и школу. Максимум 3 члена команды на проект, включая вас. Нажмите, чтобы сохранить

• Стр. 6: Способ оплаты. Выберите форму оплаты в разделе «Способ оплаты» и сохраните на следующей странице. Плата за LSEF Region VII 2021 составляет 25 долларов США для индивидуальных проектов и 50 долларов США для командных проектов.Регистрация возврату не подлежит.

• Страница 7: Подача платежа и инструкции, По завершении нажмите, чтобы перейти на следующую страницу

• Страница 8: Загрузка проекта — 2 отдельных файла PDF.
PDF № 1 — Вы должны загрузить все должным образом заполненные, датированные и подписанные необходимые формы утверждения (формы 1, 1A, 1B и все другие, необходимые для вашего проекта)
и
PDF № 2, ваша официальная аннотация, план исследования / статья, включая вашу ссылку на ваше интервью, как упомянуто выше.Помните, НИКАКИХ БЛАГОДАРНОСТИ (например, спасибо никому, кроме вашего учителя или родителей) и НИКАКОЙ ШКОЛЫ не указаны в вашем официальном бланке тезисов.
Нажмите Выбрать файл, найдите свои формы и затем нажмите Загрузить файл. НЕ нажимайте на Отправить на проверку , пока не убедитесь, что все формы добавлены правильно. После завершения загрузки нажмите «Отправить на проверку». После этого мы получим уведомление о подаче вашего проекта, и начнется процесс рассмотрения. ПРИМЕЧАНИЕ: вы можете покинуть страницу / сайт (после сохранения) без отправки и снова войти в систему, чтобы завершить, как только вы убедитесь, что все верны и готовы к рассмотрению. Тем не менее, убедитесь, что вы отправили на рассмотрение до назначенного срока. Вы получите уведомление по электронной почте об утверждении или дополнительных требованиях, поэтому не забывайте периодически проверять свою электронную почту после отправки.

Категории
Ниже приводится 21 категория, признанная LSEF.Здесь вы найдете полное описание каждой категории — категории и подкатегории Intel ISEF.

Науки о животных (ANIM)
Поведенческие и социальные науки (BEHA)
Биохимия (BCHM)
Биомедицинские и медицинские науки (BMED)
Биомедицинская инженерия (ENBM)
Клеточная и молекулярная биология (CELL)
Химия (CHEM)
Вычислительная биология и биоинформатика (CBIO)
Науки о Земле и окружающей среде (EAEV)
Встроенные системы (EBED)
Энергия: Энергия: устойчивые материалы и дизайн (EGSD)
Инженерная механика (ENMC)
Экологическая инженерия (ENEV)
Материаловедение (MATS)
Математика (MATH)
Микробиология (MCRO)
Физика и астрономия (PHYS)
Науки о растениях (PLNT)
Робототехника и интеллектуальные машины (ROBO) Системное программное обеспечение
(СОФТ)
Трансляционная медицинская наука (TMED)

Необходимые документы и информация

• Дважды проверьте все формы на полноту, точность и наличие соответствующих подписей с датами. Особое внимание следует уделить категории каждого студента. Категория, выбранная при регистрации, должна совпадать с категорией в официальном бланке тезисов.

Утверждение проекта — формы для загрузки при регистрации (дополнительные сведения о формах ниже на этой странице)

Первоначальная проверка и утверждение вашего проекта происходит в вашей школе, прежде чем вы сможете начать экспериментировать. Это нужно сделать как можно раньше в осеннем семестре или раньше, чтобы у вас было достаточно времени для завершения исследования и подготовки проекта.Ознакомьтесь со всеми необходимыми формами утверждения для вашей области исследования.

LSEF следует правилам и рекомендациям ISEF — заполните буклет правил и рекомендаций ISEF 2021 с формами

Regeneron ISEF 2021 Правила и рекомендации для домашних проектов.

Существует четыре официальных формы ISEF, связанных с утверждением, которые должны иметь все проекты: Контрольный список для взрослого спонсора (1), Контрольный список для учащихся (1A), Форма утверждения (1B) и Официальная аннотация категории 21.

В зависимости от характера проекта могут потребоваться другие формы и процедуры утверждения, как указано ниже.Все необходимые формы можно получить, нажав здесь.

Intel ISEF предоставляет помощь с необходимыми формами в виде полезного онлайн-мастера. Ответив на несколько вопросов, вы получите список форм, которые необходимо отправить для каждого проекта. Щелкните здесь, чтобы перейти к мастеру правил ISEF.

LSEF следует правилам и рекомендациям ISEF — Заполните правила и рекомендации Intel ISEF 2021 с формами

ФОРМЫ ISEF — Все формы ISEF и ссылку на Мастер правил

Официальный реферат — Официальный реферат

ВНИМАНИЕ: Внимательно прочтите формы и обратите особое внимание на указания даты и требования к подписи

Дата подписания зависит от проекта, для определения ознакомьтесь с инструкциями.Требуется для каждого проекта. Взрослый спонсор — это взрослый, который просматривает и оценивает план исследования студента. Полное описание взрослого спонсора находится в Руководстве ISEF для научных и технических ярмарок. В большинстве случаев взрослый спонсор — это учитель естествознания учащегося или школьный координатор научной ярмарки. Обратите внимание, что для установки любого поля в части 6 требуются дополнительные формы и утверждения, и что дата проверки должна быть до до начала экспериментов.Взрослый спонсор несет ответственность за то, чтобы исследование учащегося соответствовало критериям регионального и государственного конкурса, т.е. что проект соответствовал руководящим принципам Intel ISEF и чтобы соответствующие формы были надлежащим образом заполнены и подписаны. После того, как Контрольный список для взрослого спонсора (1) будет заполнен, также необходимо заполнить форму утверждения (1B).

Важное примечание:

В рекомендациях ISEF указано, что группы проверки на уровне школы предварительно одобряют следующие типы проектов:

Люди-участники
Проекты, связанные с человеческими предметами, требуют предварительного одобрения Институционального наблюдательного совета (IRB) на уровне школы. Участники-люди

Позвоночные животные
Проекты с участием позвоночных животных требуют предварительного одобрения школьного комитета по научному обзору (SRC). Позвоночные животные

Потенциально опасные биологические агенты
Для проектов, связанных с потенциально опасными биологическими агентами, требуется предварительное одобрение SRC школьного уровня. Потенциально опасные биологические агенты

Опасные химические вещества, деятельность и устройства
Опасные химические вещества, действия и устройства требуют предварительного одобрения квалифицированного ученого.Опасные химические вещества, деятельность и устройства

Дисплей и безопасность

Дисплей ISEF и правила техники безопасности
Имейте в виду, что максимальная глубина проекции (спереди назад): 30 дюймов, ширина (из стороны в сторону): 48 дюймов, высота (от стола до верха): 74 дюйма. ** Правила ISEF разрешают 108 дюймов, так как они позволяют снимать меблированный стол, а мы — нет.

При покупке плакатов имейте в виду, что механизм, поддерживающий плакат, должен соответствовать указанным выше ограничениям максимального размера.Максимальные размеры проекта включают все проектные материалы, поддержку и демонстрации для публики и судей.

Напоминания —

Все графики, диаграммы, фоны и изображения должны быть правильно указаны. Фотографии тех, кто не является финалистом, должны иметь подписанный релиз с копией на конкурсе. Если младше 18 лет, родитель также должен поставить свою подпись.

На досках не допускаются выражения благодарности школам, учителям или кому бы то ни было. На доске не должно быть указано ни школы, ни уровня обучения.

Официальный бланк тезисов должен отображаться на столе, но термин тезисы не может использоваться на самой доске.

Продолжающиеся проекты — Название должно включать продолжительность исследования, и минимальная ссылка на работы предыдущих лет может быть указана без указания какой-либо конкретной даты.

Обратите внимание, что флажки, отмеченные в аннотации, относящейся к формам, должны быть отмечены, и формы должны отображаться (Форма 1C, Форма 7)

Дополнительные формы, которые требуются в их проекте, но не отображаются, — это Контрольный список для взрослого спонсора (1), Контрольный список для учащихся (1A) и план исследования и форма утверждения (1B).

ПРИМЕЧАНИЕ: Все учащиеся или преподаватели, присутствующие на конкурсе, должны иметь свои оригинальные формы. LSEF не несет ответственности за копирование форм в файле.

Учащимся больше не будет разрешено использовать только компьютерный дисплей. Теперь проект должен сопровождаться доской. Ни один проект не может настроить и очистить D&S без доски объявлений и должен соблюдать все правила D&S.

Все финалисты, получившие слоты для Intel ISEF, должны иметь свои платы, утвержденные их региональным директором перед отправкой, чтобы гарантировать устранение проблем (для связанных с ISEF ярмарок)

Любой проект с компонентом, который будет продемонстрирован финалистом, должен быть продемонстрирован только в пределах кабины финалиста.